ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Kloniranje in izražanje bakteriofagnih endolizinov ter proteinskih vezalcev toksinov Clostridioides difficile = Cloning and expression of bacteriophage endolysins and protein binders of Clostridioides difficile toxins : univerzitetni študijski program Kozmetologija
Celan, Zala
Zdravljenje okužbe z bakterijo Clostridioides difficile zaradi odpornosti proti antibiotikom predstavlja veliko problematiko v sodobnem svetu. Do okužb prihaja zlasti v bolnišničnem okolju ob uporabi ...antibiotikov, ki izzovejo spremembe v sestavi črevesne mikrobiote. C. difficile povzroča vnetja in krvavitve iz debelega črevesa (kolitis), ki vodijo v hudo obliko driske in se lahko končajo tudi s smrtjo. Poglavitna virulentna dejavnika C. difficile sta eksotoksina TcdA in TcdB, glukoziltransferazi, ki delujeta na GTPaze iz družine Rho, s čimer oslabita tesne in fokalne stike v sluzničnem epiteliju. Rekombinantni probiotiki predstavljajo bioalternativni protimikrobni pristop za zdravljenje okužbe s C. difficile in so tematika mnogih (pred)kliničnih raziskav. Okužbo s C. difficile bi lahko zmanjšali ali preprečili s kombinacijo uporabe bakteriofagnih endolizinov, selektivnih do C. difficile, in specifičnih proteinskih vezalcev toksinov TcdA ter TcdB, ki bi se izražali na površini rekombinantne probiotične bakterije Lactococcus lactis. V diplomski nalogi smo se osredotočili na pridobitev vezalcev toksinov (iz skupin afimerov in DARPinov; samih ali v fuziji s C-končno domeno sidrnega proteina AcmA, ki omogočajo vezavo na celično steno L. lactis,) ter endolizina z uporabo ekspresijskega sistema Escherichia coli. V prvem delu naloge smo pripravili ekspresijske vektorje: v modificiran plazmid pET28c (pET28c-HTF), smo vstavili sintezne gene za izbrane proteine. Ekspresijski sev E. coli NiCo21(DE3) smo transformirali s plazmidi in izvedli testno izražanje rekombinantnih proteinov po indukciji z IPTG ter s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata kvalitativno ocenili količino rekombinantnih produktov. Ugotovili smo, da vezalci eksotoksinov v fuziji z AcmA niso topni. Na podlagi rezultatov smo za izražanje v povečanem obsegu izbrali le topne proteine (tj. vezalce eksotoksinov brez AcmA in endolizina). V drugem delu diplomske naloge smo rekombinantne proteine izolirali s kovinsko-kelatno afinitetno kromatografijo ter jih koncentrirali z ultrafiltracijo. Ugotovili smo, da se fuzijski proteini vezalcev eksotoksinov TcdA/TcdB s sidrno domeno AcmA nahajajo v netopni frakciji lizata in se pri uporabljenih pogojih izražanja odlagajo v inkluzijska telesca.
Type of material - undergraduate thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [Z. Celan], 2023
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
