ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
-
Izražanje rekombinantne zunajcelične regije človeškega eritropoetinskega receptorja v periplazmi bakterije Escherichia coli = Expression of recombinant human erythropoietin receptor ectodomain in the periplasm of Escherichia coli : enovit magistrski študij farmacijeHiti, LukaGlikoprotein eritropoetin je glavni humoralni dejavnik v telesu, ki s spodbujanjem eritropoeze povečuje oksiformno kapaciteto krvi. Takšno povečanje pozitivno vpliva na fizično vzdržljivost, zaradi ... česar se, kljub prepovedi s strani Svetovne protidopinške organizacije, nekateri športniki zatekajo k uporabi eritropoetina oz. substanc, ki oponašajo njegovo fiziološko delovanje. Dokazovanje prisotnosti takšnih % zlasti nizkomolekularnih % spojin je zaenkrat precej težavno in nezanesljivo, zaradi česar obstaja težnja po razvoju univerzalne testne platforme. Pri razvoju takšne testne platforme je bila ena izmed uporabljenih komponent tudi rekombinantna zunajcelična regija eritropoetinskega receptorja (EpoR), ki so jo pridobili s prehodnim izražanjem v sesalski celični liniji HEK 293T. Takšno izražanje je zahtevno, dolgotrajno in drago, zato smo želeli najti enostavnejši, hitrejši in cenejši način pridobivanja EpoR. Namen magistrske naloge je bilo poskusno pridobivanje EpoR z uporabo E. coli kot alternativnega ekspresijskega sistema sesalskim celicam HEK 293T. Glavna ovira bakterijskih ekspresijskih sistemov je, da v citoplazmi ne nudijo oksidacijskega okolja, ki ga EpoR potrebuje za pravilno zvijanje in tvorbo disulfidnih mostičkov. To omejitev smo poskusili odpraviti tako, da smo genskemu zapisu za EpoR na 5'-konec pripojili genski zapis za signalno zaporedje, ki po izražanju usmerja polipeptidno verigo v periplazemski prostor z oksidativnim okoljem. Po okužbi E. coli z bakteriofagnimi delci M13, ki so vsebovali fagmidni vektor pIT2/EpoR, smo, da bi določili optimalne pogoje za izražanje EpoR, najprej izvedli testno izražanje EpoR v različnih pogojih indukcije pri dveh različnih temperaturah. Nato smo izvedli izražanje v večji količini in produkt očistili s kovinsko-kelatno afinitetno kromatografijo in velikostno-izključitveno kromatografijo. Na koncu smo količino produkta ocenili kolorimetrično po Bradfordu, z merjenjem absorbance pri 280 nm in denzitometrično ter ocenili njegovo aktivnost s prilagojeno različico testa ELISA in jo primerjali z aktivnostjo EpoR, pridobljenega z izražanjem v sesalskih celicah HEK 293T. Tako koncentracija (~150 %g / 1 L kulture) kot aktivnost izraženega EpoR (~0,4 % v primerjavi s skoraj 100 % aktivnostjo EpoR, izraženega v HEK 293T) sta bili zelo nizki.Type of material - master's thesis ; adult, seriousPublication and manufacture - Ljubljana : [L. Hiti], 2020Language - slovenianCOBISS.SI-ID - 4886385
Author
Hiti, Luka
Other authors
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978- |
Molek, Peter
Topics
Eksperimentalna kemija |
Eritropoetin |
Escherichia coli |
periplazemsko izražanje |
eritropoetinski receptor |
oksimorfna kapaciteta krvi |
genski zapis
Library/institution |
City | Acronym | For loan | Other holdings |
---|---|---|---|---|
Faculty of Pharmacy, Ljubljana | Ljubljana | FFALJ |
reading room 1 cop.
|
Shelf entry
Permalink
- URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year | Impact factor | Edition | Category | Classification | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Select the library membership card:
If the library membership card is not in the list,
add a new one.
DRS, in which the journal is indexed
Database name | Field | Year |
---|
Links to authors' personal bibliographies | Links to information on researchers in the SICRIS system |
---|---|
Hiti, Luka | 54604 |
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978- | 23598 |
Molek, Peter | 32431 |
Source: Personal bibliographies
and: SICRIS
Select pickup location:
Material pickup by post
Delivery address:
Address is missing from the member's data.
The address retrieval service is currently unavailable, please try again.
By clicking the "OK" button, you will confirm the pickup location selected above and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the above pickup location and delivery address, and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the address selected above and complete the reservation process.
Notification
Automatic login and reservation service currently not available. You can reserve the material on the Biblos portal or try again here later.
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
Pickup location | Material status | Reservation |
---|
Reservation in progress
Please wait a moment.
Reservation was successful.
Reservation failed.
Reservation...
Membership card:
Pickup location: