Akademska digitalna zbirka SLovenije - logo
ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
  • Načrtovanje fosforilacijske signalne poti v sesalskih celicah = Design of phosphorylation signaling pathways in mammalian cells : magistrski študijski program Laboratorijska biomedicina
    Kodila, Anja
    Eden izmed pomembnih ciljev sintezne biologije je vnos novih signalnih poti, kot je primer imunoterapije s CAR-T celicami za zdravljenje raka. Zaradi potrebe po hitrejših celičnih odzivih na vhodni ... signal, se sintezna biologija vedno bolj osredotoča na uravnavanje bioloških sistemov na posttranslacijskem nivoju, kot sta proteoliza in fosforilacija. V magistrskem delu smo načrtovali koncept uravnavanja aktivnosti tarčnega proteina s fosforilacijo. V ta namen smo v poročevalski protein kresničkina luciferaza vstavili zaporedje za SH2 vezavno domeno ter substratni peptid, ki ga ustrezna kinaza prepoznava in fosforilira. Z opisano manipulacijo smo dosegli, da je tarčni protein v osnovnem stanju neaktiven, fosforilacija le-tega z ustrezno kinazo pa mu aktivnost povrne. Za preverjanje najbolj optimalnega razmerja med neaktivnim in aktivnim stanjem kresničkine luciferaze smo pripravili serijo konstruktov, ki so se med seboj razlikovali po drugačnih pozicijah vstavljenih fosfopeptidnih domen in substratnih peptidov, ter različnih dolžinah povezovalnih segmentov. Načrtovali smo dva enomolekulska konstrukta; razcepljeno luciferazo z vstavljeno fosfopeptidno domeno in substratnim peptidom med N in C koncem in razcepljeno luciferazo z vstavljenim substratnim peptidom med N in C koncem, ter fosfopeptidno vezavno domeno vezano na C konec s fleksibilnim povezovalnikom. Uspešnost koncepta smo preverjali s kinazama Lyn in Lck, ki sta članici družine Src nereceptorskih tirozinskih kinaz in sta zaradi svoje vloge v patoloških procesih privlačni terapevtski tarči. V magistrskem delu smo z načrtovanjem od fosforilacije odvisne aktivnosti tarčnega proteina zasnovali temelje za oblikovanje sintetične fosforilacijske kaskade v sesalskih celicah, katera ima dve poglavitni prednosti, in sicer (i) hiter odziv na signale iz okolja ter (ii) reverzibilnost. Sistem je zasnovan modularno, to pomeni, da je razširljiv in omogoča načrtovanje logičnih funkcij, fosforilacijskih kaskad ter pozitivnih in negativnih povratnih zank.
    Type of material - master's thesis ; adult, serious
    Publication and manufacture - Ljubljana : [A. Kodila], 2021
    Language - slovenian
    COBISS.SI-ID - 66946819

Library/institution City Acronym For loan Other holdings
Faculty of Pharmacy, Ljubljana Ljubljana FFALJ reading room 1 cop.
loading ...
loading ...
loading ...