ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Uporaba peptidnih oznak za razlikovanje terapevtskih proteinov, predstavljenih na površini bakterije Lactococcus lactis = The use of peptide tags for differentiation of therapeutic proteins displayed on the surface of Lactococcus lactis bacterium : enovit magistrski študij farmacija
Güntner, Rebeka
Rak debelega črevesa in danke (RDČD) predstavlja velik javnozdravstveni problem s pogosto slabo prognozo v primeru pozne diagnoze in terapije. Konvencionalne metode zdravljenja imajo številne ...slabosti in omejitve, kar spodbuja razvoj sodobnejših pristopov k zdravljenju, usmerjenih v ciljano dostavo učinkovin, kombinirano terapijo in teranostiko. Pomemben dejavnik tveganja za nastanek in napredovanje RDČD je vnetje v gastrointestinalnem traktu s posledično aktivacijo imunskih celic ter sproščanjem vnetnih citokinov. Z dostavo ustreznih protivnetnih učinkovin v črevesje lahko omilimo vnetje ter z njim povezane poškodbe sluznice in upočasnimo ali celo ustavimo progresijo RDČD, s hkratno dostavo vezalcev tumorsko specifičnih antigenov pa lahko dosežemo ciljano dostavo teh učinkovin. V sklopu raziskovalnega dela smo pripravili genske konstrukte in jih vstavili v plazmide pSDBA3b oziroma pNZDual za posamezno ali sočasno površinsko predstavitev dveh proteinov. V konstrukte smo vstavili gen za protein evazin (vezalec provnetnega IL-8) oziroma gen za protein afitin (vezalec tumorskega antigena EpCAM) ter zaporedje za peptidno oznako Cmyc ali Flag. Slednje so pomembno orodje v biokemiji, saj pripete na protein v kombinaciji s specifičnimi protitelesi omogočajo detekcijo, čiščenje in karakterizacijo rekombinantnih proteinov. Konstrukte smo izrazili v bakterijah L. lactis, ki so zaradi dolgoletne priznane varnosti in enostavne genske modifikacije primeren vektor za peroralno dostavo omenjenih terapevtskih proteinov. S pomočjo peptidnih oznak smo potrdili izražanje posameznih proteinov EVA-Cmyc, AFFI-Cmyc, EVA-Flag in AFFI-Flag oziroma njihovih kombinacij, dokazali njihovo prisotnost v celičnih lizatih in tudi na površini bakterij L. lactis, pri čemer je obseg površinske predstavitve variiral glede na vrsto proteina, uvedeno peptidno oznako in tudi glede na to, ali je bil protein izražen posamezno ali sočasno z drugim proteinom. Navsezadnje smo dokazali, da so bakterije s površinsko predstavljenimi evazini in afitini funkcionalne, torej sposobne vezave IL-8 in receptorja EpCAM. Zaradi splošnega neodobravanja GSO smo izražene proteine ločili od celic proizvajalk, jih nekovalentno pripeli na divje seve bakterij, ki niso bile gensko spremenjene in dokazali njihovo površinsko predstavitev. Celotno vrednotenje proteinov smo izvedli na osnovi peptidnih oznak in dokazali, da je njihova uporaba primeren, cenovno ugoden ter enostaven način za detekcijo in razlikovanje izraženih proteinov, kar je bil tudi osnovni namen magistrskega dela. Ugotovili smo, da oznake sicer sterično ovirajo vezavna mesta proteinov in vplivajo na njihovo funkcionalnost, a vendar prednosti njihove uporabe odtehtajo omenjene slabosti.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [R. Güntner], 2021
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
