La necrosis pancreatica infecciosa (IPN), es una de las enfermedades viricas que mayores mortalidades causa la salmonicultura a nivel mundial. No existen tratamientos curativos de la enfermedad, por ...lo que la prevencion es la unica medida de control del virus. Las tecnicas de cultivo celular que se usan actualmente en su diagnostico, estan siendo desplazadas por tecnologias de mayor sensibilidad y rapidez, como la recreacion en cadena de la polimerasa (PCR). Estas metodologias utilizan muestras que involucran la muerte del pez. Es asi, como se genera cierto sesgo en el muestreo, ya que categorias de peces de un alto valor comercial no son examinados, pudiendo ocasionar consecuencias graves al favorecerse la propagacion del patogeno. Por este motivo el objetivo de este trabajo fue desarrollar un metodo de diagnostico, mediante el uso de la tecnica de recreacion en cadena de la polimerasa asociada al paso previo de transcripcion reversa (RT-PCR), utilizando como muestra, sangre de peces vivos. En este ensayo se desarrollo un metodo de extraccion basado en el uso de Chelex 100, el que en forma simple, sin excesiva manipulacion y en tan solo una hora, permitio obtener un templado, libre de agentes inhibitorios (grupos hemo), apto de someter a la tecnica RT-PCR. El metodo desarrollado se evaluo en dos grupos de peces asintomaticos. Uno, perteneciente al rango de peces suceptibles, infectados experimentalmente, y el otro, perteneciente a la de los portadores de la enfermedad, infectados naturalmente. En ambos grupos se detecto presencia viral. El metodo en cuanto a su ejecucion, presenta simpleza, rapidez, no presenta una manipulacion excesiva que pueda provocar contaminacion cruzada y no requiere sacrificar a los individuos sospechosos. Con respecto al rango y precocidad de deteccion, permite detectar el virus, tanto en peces sintomaticos como portadores, ademas detecta al patogeno en fases tempranas de la infeccion, en los individuos mas suceptibles. Todo esto permite proyectar al metodo como una alternativa interesantisima en el area del diagnostico viral en peces.
La necrosis pancreatica infecciosa (IPN), es una de las enfermedades viricas que mayores mortalidades causa la salmonicultura a nivel mundial. No existen tratamientos curativos de la enfermedad, por ...lo que la prevencion es la unica medida de control del virus. Las tecnicas de cultivo celular que se usan actualmente en su diagnostico, estan siendo desplazadas por tecnologias de mayor sensibilidad y rapidez, como la recreacion en cadena de la polimerasa (PCR). Estas metodologias utilizan muestras que involucran la muerte del pez. Es asi, como se genera cierto sesgo en el muestreo, ya que categorias de peces de un alto valor comercial no son examinados, pudiendo ocasionar consecuencias graves al favorecerse la propagacion del patogeno. Por este motivo el objetivo de este trabajo fue desarrollar un metodo de diagnostico, mediante el uso de la tecnica de recreacion en cadena de la polimerasa asociada al paso previo de transcripcion reversa (RT-PCR), utilizando como muestra, sangre de peces vivos. En este ensayo se desarrollo un metodo de extraccion basado en el uso de Chelex 100, el que en forma simple, sin excesiva manipulacion y en tan solo una hora, permitio obtener un templado, libre de agentes inhibitorios (grupos hemo), apto de someter a la tecnica RT-PCR. El metodo desarrollado se evaluo en dos grupos de peces asintomaticos. Uno, perteneciente al rango de peces suceptibles, infectados experimentalmente, y el otro, perteneciente a la de los portadores de la enfermedad, infectados naturalmente. En ambos grupos se detecto presencia viral. El metodo en cuanto a su ejecucion, presenta simpleza, rapidez, no presenta una manipulacion excesiva que pueda provocar contaminacion cruzada y no requiere sacrificar a los individuos sospechosos. Con respecto al rango y precocidad de deteccion, permite detectar el virus, tanto en peces sintomaticos como portadores, ademas detecta al patogeno en fases tempranas de la infeccion, en los individuos mas suceptibles. Todo esto permite proyectar al metodo como una alternativa interesantisima en el area del diagnostico viral en peces
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