Akademska digitalna zbirka SLovenije - logo
VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
  • Priprava plazmidnih vektorjev za izbitje in prekomerno izražanje gena FUBP3 = Preparation of plasmid vectors for overexpressing and knockout of the FUBP3 gene : magistrska naloga : magistrski študijski program Laboratorijska biomedicina
    Srpčič, Anja, farmacevtka, 1996-
    V vsegenomskih asociacijskih študijah (GWAS) so do sedaj odkrili že več kot 150 genskih lokusov, povezanih z mineralno kostno gostoto. Ti genski lokusi predstavljajo potencialne označevalce za ... zgodnje odkrivanje osteoporoze ali pa potencialne nove tarče za zdravljenje. Eden izmed novo odkritih lokusov je enonukleotidni polimorfizem rs7851693 v intronu gena za FUBP3 (“Far upstream binding protein 3”). O vlogi proteina FUBP3 pri metabolizmu kosti ni še nič znanega. Zato smo v okviru magistrske naloge pripravili plazmidna konstrukta, s katerima bo v nadaljnjih študijah funkcijske genomike mogoče ovrednotiti vpliv spremenjenega izražanja gena FUBP3 na celične procese. Z metodo molekulskega kloniranja po Gibsonu smo sestavili plazmidni konstrukt za povečano izražanje gena FUBP3 (pFLAG-CMV-1-FUBP3) ter plazmidni konstrukt za izbitje gena FUBP3 s sistemom CRISPR/Cas9 (pX459-gRNA1-FUBP3). Za transfekcijo smo izbrali celični liniji HEK 293T, ki izvira iz človeških embrionalnih ledvičnih celic, in A549, ki izvira iz epitelijskih celic pljučnega adenokarcinoma. Po transfekciji konstrukta pFLAG-CMV-1-FUBP v celično linijo HEK 293T smo z metodo prenosa po westernu dokazali, da se izražanje proteina v celici poveča, kar kaže na uspešno pripravljen konstrukt. Spremembo, ki jo je v genomu celic HEK 293T povzročil vstavljeni vektor pX459-gRNA1-FUBP3 (metoda CRISPR/Cas9), smo ovrednotili z določitvijo nukleotidnega zaporedja tarčnega odseka genoma. Z metodo indirektne imunofluorescence smo določili lokalizacijo proteina v celicah. V celični liniji A549 se protein nahaja pretežno v citoplazmi. S plazmidnima konstruktoma, ki smo ju pripravili, smo postavili temelje za izvedbo različnih funkcijskih študij, na podlagi katerih bomo lahko lažje opredelili funkcijo gena FUBP3 in posledice njegove porušene regulacije.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [A. Srpčič], 2021
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 89672195

Knjižnica/institucija Kraj Akronim Za izposojo Druga zaloga
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Ljubljana FFALJ v čitalnico 1 izv.
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico