Fakulteta za farmacijo, Ljubljana (FFALJ)
-
Priprava rdečega fluorescenčnega proteina z N-končnim imunoglobulin-vezavnim peptidom = Preparation of a red fluorescent protein with the N-terminal immunoglobulin-binding peptide : University Study Programme CosmetologyJašovič, VitaV celični in molekularni biologiji pogosto uporabljamo poročevalne proteine, s katerimi označujemo strukture v celicah ali tkivih. Gre pravzaprav za fluorokrome, pri katerih je ob osvetljevanju ... značilen pojav fluorescence, ko molekula absorbira svetlobo določene valovne dolžine in nato izseva svetlobo nižje energije, torej daljše valovne dolžine. Za označevanje celičnih struktur s poročevalnimi proteini moramo običajno v organizem vnesti njihov genski zapis. Rdeči fluorescenčni protein (RFP) v vzbujenem stanju fluorescira rdeče-oranžno, z maksimalnim vzbujanjem pri 558 nm ter emisijskim maksimumom pri 583 nm. Zaradi globljega prodiranja rdeče svetlobe skozi tkiva te fluorescenčne proteine uporabljamo pri mikroskopiji debelejših tkivnih vzorcev. V okviru diplomske naloge smo kot poročevalski protein uporabili RFP in mu na N-konec pripeli imunoglobulin-vezavni peptid min19Fc_Q6D z aminokislinskim zaporedjem GSYWYDVWF. Peptidi bi lahko postali alternativa bakterijskim imunoglobulin-vezavnim proteinom, ki jih uporabljamo kot specifične ligande protiteles (npr. pri afinitetni kromatografiji za čiščenje monoklonskih protiteles iz procesne tekočine), saj imajo le-ti številne prednosti. Z afinitetnim ligandom min19Fc_Q6D, ki izkazuje afniteto do regije Fc protiteles IgG, smo tvorili fuzijski protein min19Fc_Q6D-RFP, pri katerem smo lahko zaradi poročevalnega proteina z UV-detekcijo spremljali njegovo izražanje ter skušali vezavo na IgG vrednotiti s fluorescenčnoimunskim testom (FLISA). Gen za fuzijski protein smo pripravili z verižno reakcijo s polimerazo in ga vstavili v ekspresijski vektor. Rekombinantni protein smo uspešno izrazili v bakteriji Escherichia coli NiCo21. V nadaljevanju smo ga s pomočjo kovinsko-kelatne afinitetne kromatografije ter nadaljnjega razsoljevanja z gelsko izključitveno kromatografijo ustrezno očistili, izolirali ter ga pripravili za vrednotenje vezave na regijo Fc protiteles IgG. Interakcije s protitelesi nismo uspeli potrditi. Možne razlage za to so: i) RFP sterično ovira interakcijo med peptidom min19Fc_Q6D in protitelesi, ii) interakcija termodinamsko ni ugodna zaradi znižanja entropije, do katere bi prišlo ob vezavi, ali iii) test FLISA ni dovolj občutljiv, saj signal izhaja zgolj iz monosloja molekul na dnu vdolbinic mikrotitrske ploščice.Vrsta gradiva - diplomsko delo ; neleposlovje za odrasleZaložništvo in izdelava - Ljubljana : [V. Jašovič], 2020Jezik - slovenskiCOBISS.SI-ID - 27494403
Avtor
Jašovič, Vita
Drugi avtorji
Bratkovič, Tomaž, farmacevt |
Kruljec, Nika
Teme
Imunoglobulini |
Molekularna biologija |
Celična biologija |
Peptidi |
rdeči fluorescenčni protein |
fuzijski protein |
min19Fc_Q6D |
protitelesa
Signatura – lokacija, inventarna št. ... |
Status izvoda | Rezervacija |
---|---|---|
Knjižnica UNK 577.2 JAŠOVIČ VITA Priprava 0000000205 IN: 0016680 Knjižnica UNK 577.2 JAŠOVIČ VITA Priprava 205 IN: 0016680 |
prosto - za čitalnico
|
Vnos na polico
Trajna povezava
- URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto | Faktor vpliva | Izdaja | Kategorija | Razvrstitev | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Baze podatkov, v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov | Področje | Leto |
---|
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev | Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS |
---|---|
Jašovič, Vita | |
Bratkovič, Tomaž, farmacevt | 23598 |
Kruljec, Nika | 37497 |
Vir: Osebne bibliografije
in: SICRIS
Izberite prevzemno mesto:
Prevzem gradiva po pošti
Naslov za dostavo:
Med podatki člana manjka naslov.
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Gesla v Splošnem geslovniku COBISS
Izbira mesta prevzema
Gradivo iz matične enote je brezplačno. Če je gradivo na mesto prevzema dostavljeno iz drugih enot, lahko knjižnica to storitev zaračuna.
Mesto prevzema | Status gradiva | Rezervacija |
---|
Rezervacija v teku
Prosimo, počakajte trenutek.
Rezervacija je uspela.
Rezervacija ni uspela.
Rezervacija...
Članska izkaznica:
Mesto prevzema: