Le développement de thérapies ciblées anticancéreuses vise à réduire les effets secondaires des drogues chez les patients. Ce projet vise à développer des aptasomes vecteurs d’agents thérapeutiques ...ciblant CD44 (Ag surexprimé à la surface de nombreuses tumeurs) et radiomarqués pour étude de leur biodistribution en TEP.
Un film lipidique incluant du DSPE-PEG(2000)-NH2 est hydraté pour formuler des liposomes aminés, puis un groupement pSCN-Bn-NOTA est conjugué aux amines sur les liposomes (Lip-NOTA). Après optimisation des conditions de chélation (111In et CuII, en CCM absorbance et conductimétrie), l’aptamère anti-CD44 Apt1 est inséré sur la couche externe des liposomes pour introduire la fonction de ciblage (Apt1-Lip-NOTA). Enfin, sont évaluées la toxicité liée à la capture du CuII (test MTT) et la captation spécifique des Apt1-Lip-NOTA en présence d’Apt1 sur des cellules tumorales (FACS après introduction de fluorescéine à la surface des aptasomes).
Les analyses DLS et Zeta montrent les introductions successives du NOTA et de Apt1 : diamètre croissant (autour de 100nm), chutes du potentiel Zeta. Un agent fluorescent spécifique des oligonucléotides corrobore l’introduction d’Apt1. Les conditions de chélation optimales (40°C, pH neutre, métal et Lip-NOTA équimolaires) ont permis un rendement de marquage>97 %. La toxicité du cuivre chélaté en surface des liposomes est négligeable (survie cellulaire>85 % à 72h). En FACS, le signal reste proche de l’auto-fluorescence en l’absence d’Apt1 et, en sa présence, on observe un shift en fluorescence montrant l’accumulation des liposomes sur la lignée CD44+ (MDA-MB-231). Ces résultats seront corroborés en microscopie confocale.
Les aptasomes sont prêts pour radiomarquage au 64Cu pour études de biodistribution dans 3 modèles murins (sain, xénogreffes de patients CD44− ou CD44+ Institut Curie) afin de vérifier l’accumulation accrue des Apt1-Lip-NOTA dans les tumeurs CD44+ par rapport à l’effet EPR (Lip-NOTA).
Internal tandem duplications (ITDs) of the FLT3 gene have been observed in about 35% of APL cases. If FLT3-ITD is associated with a worse outcome in patients with acute myeloid leukemia (AML) in ...general, its prognostic value in acute promyelocytic leukemia (APL) is still a matter of debate. We investigated incidence, associated clinical features, and prognostic implication of FLT3-ITD, but also FLT3-D835 point mutation and N-Ras or K-Ras mutations in 119 APL patients, all prospectively enrolled in the two consecutive APL-93 and APL-2000 trials. Mutation incidences were 38, 20, and 4%, for FLT3-ITD, FLT3-D835, and Ras, respectively. The presence of FLT3-ITD was associated with high white blood cell count, high Sanz index, M3-variant subtype, and V/S PML-RAR alpha isoforms. Complete remission (CR), induction death, and death in CR rates were not affected by FLT3 or Ras mutations, as well as cumulative incidence of relapse. However, a trend for a shorter overall survival (P=0.09) was observed in FLT3-ITD patients, because of a very poor postrelapse survival (P=0.02). This feature, which has been also reported in patients with AML in general, is suggestive of an underlying genetic instability in FLT3-ITD patients, leading to the acquisition of additional unknown bad-prognosis gene mutations at relapse.
Treatment with retinoic acid (RA) is effective to restore radioactive iodine uptake in metastases of a small fraction of thyroid cancer patients. In order to find predictive markers of response, we ...took advantage of two thyroid cancer cell lines, FTC133 and FTC238, with low RA-receptor (RAR)β expression but differing in their response to RA. We report that in both cell lines, RA signalling pathways are functional, as transactivation of an exogenous RARβ2 promoter is effective in the presence of pharmacological concentrations of all-trans RA, and enhanced in RA-resistant FTC238 cells after ectopical expression of RARβ, suggesting a defective endogenous RARβ2 promoter in these cells. Further analyses show that whereas the RARβ2 promoter is in an unmethylated permissive status in both FTC133 and FTC238 cells, it failed to be associated with acetylated forms of histones H3 or H4 in FTC238 cells upon RA treatment. Incubation with a histone deacetylase inhibitor, alone or in combination with RA, restored histone acetylation levels and reactivated RARβ and differentiation marker Na+/I−symporter gene expression. Thus, histone modification patterns may explain RA-refractoriness in differentiated thyroid cancer patients and suggest a potential benefit of combined transcriptional and differentiation therapies.
L’évaluation isotopique du site de destruction plaquettaire par l’étude de la séquestration des plaquettes autologues marquées à l’oxinate d’indium-111 peut être utile dans le purpura thrombopénique ...immunologique (PTI) pour orienter la décision de la splénectomie. En effet, deux études indépendantes ont suggéré qu’une séquestration purement splénique pouvait être un important facteur prédictif de réponse complète à long terme après splénectomie. Un nombre croissant de patients reçoivent des agonistes du récepteur de la thrombopoiëtine (R-TPO) mais ces traitements ne sont pas curatifs et cela n’exclut donc pas d’envisager la splénectomie au cours de l’évolution du PTI. Les agonistes du R-TPO augmentent la production plaquettaire en induisant une prolifération et une différentiation de la lignée mégacaryocytaire, ceci pourrait interférer avec la durée de vie plaquettaire moyenne (DVPM), la production plaquettaire et le site de destruction plaquettaire. L’objectif de cette étude était donc d’évaluer ces paramètres et l’évolution clinique des patients sous agonistes du R-TPO ayant réalisé une étude cinétique des plaquettes marquées à l’oxinate d’indium-111.
À partir d’une base de données clinique prospective du département de biologie cellulaire de l’hôpital de Saint-Louis, nous avons sélectionné rétrospectivement des patients adultes présentant un PTI définis selon les critères internationaux entre 2008 et 2016 ayant bénéficié d’une mesure isotopique de la durée de vie plaquettaire 1. Nous avons exclu les patients ayant reçu moins de 3 Mbeq d’oxinate d’indium-111. Les données des dossiers médicaux ont été collectées en utilisant un formulaire standardisé. La réponse (R) au traitement était définie par l’obtention de plaquettes>30 G/L et l’absence de critères d’échec clinique (hémorragie). La réponse complète (RC) était définie par un chiffre de plaquette>100 G/L. Les résultats de l’étude cinétique des patients traités par agoniste du R-TPO ont été comparé avec ceux des patients ne recevant aucun traitement au moment de l’examen.
Deux cent cinquante-trois patients ont été inclus. Au moment de l’étude cinétique, 24 patients (10 hommes/14 femmes) avec une médiane d’âge de 63 ans 22–83 étaient traités par agonistes du R-TPO (romiplostim n=10, eltrombopag n=14) et 229 (81 hommes/148 femmes) n’avaient pas de traitement. Les agonistes du R-TPO étaient associés à une faible dose de corticostéroïdes (<15mg) chez 6 patients, à la dapsone chez 1 patient et à des immunoglobulines intraveineuses dans les deux semaines précédant l’étude cinétique chez 2 patients. Douze patients avaient un PTI chronique, 9 un PTI persistant, et 3 un PTI nouvellement diagnostiqué. Le chiffre médian de plaquettes était de 62×109/L 22–175. La durée de vie plaquettaire moyenne (DVPM) médiane (norme : 7–10) était diminuée dans les deux groupes mais était significativement augmentée chez les patients non traités (R-TPO : 1,44jours 0,4–7,5 vs 2,3jours 0,4–11, p=0,004). Le ratio de renouvellement plaquettaire était augmenté dans les deux groupes (R-TPO : 48 % 11–173 mais étaient significativement plus bas chez les patients non traités (R-TPO : 48 % 11–173 vs 30 % 0,8–247. Le ratio de production plaquettaire était significativement augmenté en médiane chez les patients traités par R-TPO comparativement aux patients non traités (R-TPO : 2 0,1–5,0 vs 0,84 0,1–85,0). La répartition des sites de séquestration plaquettaire était identique dans les deux groupes pour la séquestration splénique (R-TPO : 12 50 % vs 112 49,1 %), et la séquestration hépatique (R-TPO : 2 20 % vs 9 3,9 %). La splénectomie a été réalisée chez 9 des 12 patients avec séquestration splénique pure. Après un suivi médian de 26 mois extrêmes : 0–53, 8 (88 %) patients présentaient une RC et 1 avait rechuté 5 mois après splénectomie.
Notre étude montre qu’en dépit d’une production et d’un renouvellement plaquettaire augmenté, la durée de vie plaquettaire et la répartition des sites de séquestration splénique est interprétable chez les patients sous agonistes du R-TPO. Sur ce faible effectif de patients, la séquestration splénique pure est également prédictive d’une bonne réponse à la splénectomie.
PDF
