Od 2007. do 2011. godine na virus virusnog proljeva goveda (VPG) pretraženi su uzorci pet slezena i 1937 uzoraka seruma podrijetlom iz 9 stada mliječnih goveda. Imunoperoksidaznim testom (IP) u 13 je ...uzoraka dokazan necitopatogeni biotip virusa VPG te je potvrđena perzistentna zaraza. Iz svih pet uzoraka slezena izdvojen je citopatogeni virus VPG. U svrhu genotipizacije vlastitih izolata virusa VPG, iz nadtaloga inficiranih staničnih kultura izdvojena je virusna RNK i umnožena lančanom reakcijom polimerazom uz prethodnu reverznu transkripciju (RT-PCR). Umnoženi odsječci 5’-UTR i gena Npro su potom sekvencirani. Filogenetska analiza hrvatskih izolata virusa VPG pokazala je da svi pretraženi izolati pripadaju genotipu 1; 11 izolata svrstano je u podtip 1b, a 7 u 1f. Filogenetska analiza na temelju spojene 5’-UTR/Npro genske sekvencije potvrdila je rezultate genotipizacije pretraženih izolata. Na Npro dijelu genoma utvrđeno je pet aminokiselinskih promjena osebujnih za hrvatske izolate iz podtipa 1f.
U radu su prikazani rezultati istraživanja broja somatskih stanica, udjela živih stanica te staničnih subpopulacija (CD45, granulocita, monocita/makrofaga, CD4, CD8 i B limfocita) u mlijeku ...nezaraženih četvrti vimena krava (n = 7) te u sekretu mliječne žlijezde iz četvrti vimena zaraženih bakterijom S. aureus (n = 18). Subpopulacije stanica označene su monoklonskim protutijelima neizravnim postupkom i analizirane protočnim citometrom. Udjeli epitelnih stanica, polimorfonuklearnih granulocita, monocita i limfocita utvrđeni su svjetlosnim mikroskopom u obojenim razmascima staničnoga taloga. Vrijednosti broja somatskih stanica, postotaka stanica označenih monoklonskim protutijelima specifičnim za biljeg CD45, granulocite, CD4 i CD8 biljeg, statistički su se razlikovale između zaraženih i nezaraženih četvrti vimena. Udjeli pojedinih stanica dobiveni brojenjem svjetlosnim mikroskopom statistički su se razlikovali između zaražene i nezaražene skupine. Postoci granulocita unutar zaražene skupine krava statistički su bili povezani s dobi krave i s bređosti. Unutar iste skupine krava uočena je statistički značajna razlika u zastupljenosti limfocita s izraženim biljegom CD8 između krava oteljenih na farmi i uvezenih životinja. Vrijednosti udjela epitelnih stanica dobivenih određivanjem pomoću svjetlosnog mikroskopa i stanica bez CD45 biljega bile su umjereno povezane (Pearsonov r = 0,47). Vrijednosti broja granulocita dobivenih dvjema različitim metodama također su bile umjereno povezane (Pearsonov r = 0,52).
In the period from 2009 to 2013, bacteriological testing was conducted on 336 sheep, goat and cattle samples. Using classical bacteriological and molecular procedures, B. melitensis was confirmed in ...14 (4.2 %) samples. Brucella was isolated in the Karlovac, Lika-Senj and Split-Dalmatia Counties. Brucella isolates were genotyped using the MLVA method and compared with isolates from neighbouring Bosnia and Herzegovina (BH). A total of 14 isolates (strains) originating from Croatia and 25 from BH were analysed. Complete matches between Croatian and BH isolates were found in two genotype groups. Overall, the MLVA analysis indicated that the Croatian and BH genotypes of B. melitensis from animals were highly homogenous. The Hunter Gaston diversity index (HGDI) showed that diversity was found among the 16 tested loci for 5 loci of panel 2B (Bruce 04, 07, 09, 16, 30). The discriminating loci are optimal for the use in epidemiological investigation of B. melitensis infections in these two countries. Key words: multiple locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA), B. melitensis, ruminants, Croatia U razdoblju od 2009. do 2013. u Hrvatskoj je izvrsena bakterioloska pretraga uzoraka ukupno 336 ovaca, koza i goveda. Klasicnim bakterioloskim i molekularnim postupcima B. melitensis je potvrdena u 14 (4,2%) izolata. Brucele su izdvojene u Karlovackoj, Licko-senjskoj i Splitsko-dalmatinskoj zupaniji. Analiza broja uzastopnih ponavljanja na vise lokusa (engl. multiple locus variable number of tandem repeat analysis, MLVA) primijenjena je radi genotipizacije i usporedbe s izolatima iz susjedne Bosne i Hercegovine. Ukupno je analizirano 14 izolata podrijetlom iz Hrvatske i 25 iz susjedne Bosne i Hercegovine. U dva slucaja genotipovi izolata iz Hrvatske u potpunosti su se poklapali s genotipovima u Bosni i Hercegovini. Koristenjem metode MLVA utvrden je visok stupanj homogenosti izolata u ove dvije zemlje. Od koristenih 16 MLVA lokusa raznolikost je utvrdena samo na 5 lokusa panela 2B (Bruce 04, 07, 09, 16, 30) sto je potvrdeno racunanjem HGDI indeksa. Koristenje ovih 5 razlikovnih lokusa optimalno je za provodenje epidemioloskih istrazivanja u Hrvatskoj i Bosni i Hercegovini. Kljucne rijeci: MLVA, B. melitensis, prezivaci, Hrvatska
Background: Melitococcosis is one of the most widespread zoonoses worldwide. In the period from 2009 to 2013, comprehensive
melitococcosis testing was conducted in the Republic of Croatia.
Methods ...and results: During the testing, the Rose Bengal test was applied to 344019 blood samples of sheep and goats, and
positive reactions were confirmed in 1143 (0.3%) of samples. The complement fixation test (confirmatory test) was conducted on
43428 samples, with positive reactions confirmed in 768 (1.8%) of samples. The organs and tissues of 336 sheep and goats were
inspected bacteriologically, and Brucella sp. was isolated in 15 (4.5%) of samples. Positive serological and bacteriological reactions
were confirmed in the Karlovac, Lika-Senj and Split-Dalmatia Counties. Bacteriological and molecular techniques (Bru-up/Bru-low
and Bruce-Ladder) in isolates proved the presence of Brucella melitensis biovar 3.
Conclusion: On the basis of this study, it can be concluded that Croatia has a favourable situation concerning the infection of
ruminants with B. melitensis, and that ongoing controls of the disease are necessary.
Tuberkuloza goveda je kronična bolest zoonotskog karaktera koja se javlja u goveda i velikog broja domaćih i divljih životinja. U ovom je radu opisana tuberkuloza goveda izazvana vrstom M. caprae u ...šest malih domaćinstava u Bosni i Hercegovini. Za dokazivanje bolesti i determinaciju uzročnika rabljen je komparativni tuberkulinski kožni test (TKT), patomorfološki i mikrobiološki nalaz te molekularne metode. Dvadeset i osam krava iz pet domaćinstava na području Livna (25/28 životinja) i jednog domaćinstva na području Viteza (3/28 životinja) bilo je eutanazirano nakon što su bile pozitivne na komparativni TKT test. Jedanaest životinja iz pet domaćinstava na području Livna (9/11 životinja) i jednog domaćinstva na području Viteza (2/11 životinja) bilo je razuđeno u terenskim uvjetima. Na svim truplima bile su uočene lezije osebujne za tuberkulozu na limfnim čvorovima torakalne šupljine i na plućima. Histopatološkom pretragom, bojenjem hematoksilin eozinom bila je potvrđena prisutnost specifičnih granulomatoznih lezija dok je bojenje po Ziehl Neelsenu pokazalo prisutnost veoma malog broja acidorezistentnih bakterija. Na bakteriološku pretragu dostavljeni su medijastinalni limfni čvorovi od sedam razuđenih životinja (dvije životinje s područja Viteza i pet životinja iz pet domaćinstava s područja Livna). Acidorezistentne bakterije bile su izdvojene iz pet od sedam uzoraka dostavljenih na pretragu, i to od jedne životinje s područja Viteza i četiri životinje iz četiri domaćinstva s područja Livna. Svi su izolati identificirani kao M. caprae. MIRU tipizacijom ustanovili smo dva različita, za Bosnu i Hercegovinu jedinstvena genotipa M. caprae. Naši nalazi predstavljaju prvi dokaz tuberkuloze goveda uzrokovane vrstom M. caprae u Bosni i Hercegovini.
Meticilin-rezistentni sojevi bakterije Staphylococcus aureus (MRSA) izdvajaju se u cijelom svijetu i otporni su na različite antimikrobne lijekove. Infekcije svinja sojevima MRSA-e prvi su put ...opisane u Nizozemskoj 2005. s pretpostavkom da su svinje izvor infekcije MRSA-om za ljude. Uzorke prašine prikupljali smo sa šest velikih svinjogojskih farmi u Hrvatskoj iz objekata u kojima su smještene rasplodne životinje. Na svakoj farmi uzeli smo pet ili šest brisova. Od ukupno uzorkovana 32 brisa, iz osam brisova s četiri farme izdvojili smo ružičaste kolonije na MRSA selektivnom agaru. Kod svih izolata koji su rasli na MRSA selektivnom agaru kao ružičaste kolonije izdvojen je gen mecA. Svi izolati bili su otporni na penicilin, ampicilin, oksacilin, oksitetraciklin i streptomicin, a osjetljivi na vankomicin, ciprofloksacin, florfenikol i sulfametoksazol s trimetoprimom.
In the period 2008-2011, a program of diagnostics and control of swine brucellosis was conducted in the remaining two farms of the Turopolje pig breed, including a total of 729 samples of porcine ...blood. Serological diagnostics were carried out by means of the Rose Bengal test (RBT), complement fixation test (CFT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Agreement between serological methods was determined by the Kappa test. Almost perfect agreement was found between the results obtained by the CFT and RBT methods (0.764-0.936), while the agreement between the results obtained by RBT and CFT in comparison with the ELISA test results was substantial (0.547-0.767; 0.647-0.843). In addition, in 2009 and 2011, samples from 50 pigs were subjected to bacteriological tests, and a total of 15 isolates were obtained. Bacteriology was conducted with various time delays from the determination of positive serological reactions, and the method efficacy was determined considering the duration of the infection in pigs. The average efficacy of the isolation of Brucella (B.) suis ranged between 10-43.3 % (P = 0.01) and was significantly higher in acute brucellosis. Isolation was successful for all age categories, regardless of their sexual maturity. Molecular identification confirmed B. suis bv. 2 for the first time in this breed. The extensive breeding of Turopolje pigs and daily contact with live reservoirs of the disease agents are the reasons why the disease cannot be completely eradicated according to the test-and-remove principle. A condition for the successful control and eradication of brucellosis in a Turopolje pig herd is to ensure the conditions for individual and permanent supervision of each breeding pig. Key words: swine brucellosis, Brucella suis, Turopolje pig, Croatia U razdoblju od 2008. do 2011. godine proveden je program dijagnostike i kontrole bruceloze u preostala dva uzgoja turopoljskih svinja na ukupno 729 uzoraka krvi. Seroloska dijagnostika provedena je rose bengal testom (RBT), reakcijom vezanja komplementa (RVK) i imunoenzimskim testom (ELISA). Medusobna podudarnost metoda odredena je kappa testom. Izmedu rezultata dobivenih primjenom RVK i RBT utvrdena je vrlo visoka podudarnost (0,764-0,936). Nesto niza, ali jos uvijek visoka podudarnost utvrdena je izmedu rezultata dobivenih RBT i RVK u usporedbi s rezultatima dobivenim ELISA testom (0,547-0,767; 0,647-0,843). Takoder, tijekom 2009. i 2011. godine bakterioloski je pretrazen materijal podrijetlom od 50 svinja te je ukupno izdvojeno 15 izolata. S razlicitim vremenskim odmakom od utvrdenih pozitivnih seroloskih reakcija ucinjena je i bakterioloska pretraga te odredena uspjesnost metode s obzirom na starost infekcije u uzgoju. Prosjecna uspjesnost izdvajanja vrste Brucella (B.) suis varirala je od 10-43,3 % (P = 0,01), te je bila znacajno veca pri akutnoj brucelozi. Izdvajanje uzrocnika bilo je uspjesno u svih dobnih kategorija, bez obzira na spolnu zrelost svinja. Molekularnom identifikacijom prvi je put u ove pasmine potvrdena infekcija vrstom B. suis bv. 2. Ekstenzivni nacin uzgoja turopoljske svinje i svakodnevni kontakt sa zivim rezervoarima uzrocnika odreduju da se bolest ne moze u potpunosti iskorijeniti prema principu pretrazi i ukloni. Preduvjet uspjesne kontrole i eradikacije bruceloze u stadu turopoljskih svinja jest osiguravanje uvjeta individualnog i trajnog nadzora nad svakom rasplodnom svinjom. Kljucne rijeci: bruceloza svinja, Brucella suis, turopoljska svinja, Hrvatska
U radu je primjenom klasičnih i molekularnih metoda istražena osjetljivost koagulaza-negativnih stafilokoka iz tradicionalnih fermentiranih kobasica na antimikrobne spojeve. Pomoću disk-difuzijskog i ...epsilometar testa ispitana je osjetljivost izolata na vankomicin, ampicilin, eritromicin, tetraciklin, gentamicin i oksacilin. Metodom je PCR u izolatima određena prisutnost gena za rezistenciju, i to mecA, ermB, tetK i tetM. Utvrđene su sljedeće vrste koagulaza-negativnih stafilokoka: Staphylococcus epidermidis (69 %), S. capitis (5 %) i S. warneri (2.5 %). Ukupno je 44,4 % izolata S. epidermidis pokazalo fenotipsku rezistenciju na tetraciklin i eritromicin. Prisutnost gena tetK ili tetM potvrđena je u 8 izolata S. epidermidis. Iako S. epidermidis nije uobičajeni uzročnik trovanja hranom, njegova je prisutnost u hrani važna za javno zdravstvo zbog mogućeg širenja antimikrobne rezistencije. Dobiveni rezultati pokazuju da spontanom fermentacijom mesa mogu nastati proizvodi opasni za zdravlje potrošača.
Cilj ovog rada bio je istražiti utjecaj dezinfekcije kože krmača držanih u komercijalnim uzgojnim uvjetima na broj bakterija porodice Enterobacteriaceae i vrste Escherichia coli. Istraživanjem je ...bilo obuhvaćeno 30 krmača na svinjogojskoj farmi. Ventralni dio trupa krmača, s mliječnim žlijezdama, dezinficiran je neposredno prije stavljanja prasadi pod krmače. Obrisci površine kože dobiveni su korištenjem celuloznih spužvica i kvantitativno analizirani prema standardnim metodama ISO 21528-2:2004 i ISO 16649-2:2001. Prosječni broj enterobakterija i bakterija Escherichia coli bio je značajno manji nakon dezinfekcije (p<0,001), koja je rezultirala smanjenjem broja bakterija za 98,4%, odnosno 98,8%.
Bakterije roda Brucella su fakultativni unutarstanični mikroorganizmi. Maleni su, gram-negativni, aerobni štapići, koji uzrokuju brucelozu, zaraznu bolest domaćih, divljih životinja i ljudi. Postoji ...više vrsta, ali za humanu i veterinarsku medicinu najvažnije su: Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella abortus, Brucella ovis i Brucella canis. Cilj ovoga rada je usporediti klasične bakteriološke tehnike s lančanom reakcijom polimeraze u identifikaciji izolata Brucella sp. izdvojenih iz ljudi i životinja u Republici Hrvatskoj. Identifikacija je provedena na 47 izolata izdvojenih iz različitih vrsta životinja i ljudi serološki pozitivnih na brucelozu. Bakteriološka identifikacija zasnivala se na usporedbi ponašanja dobivenih kultura s poznatim obrascima ponašanja referentnih sojeva. Nakon izdvajanja Brucella bakteriološkim postupcima iz materijala, metodom lančane reakcije polimerazom utvrđivana je pripadnost rodu i pojedinim vrstama. Dokazana je prisutnost različitih vrsta Brucella sp. u ljudi, domaćih i divljih životinja u Republici Hrvatskoj te da se identifikacija istih mora temeljiti na kombinaciji klasičnih i molekularnih metoda dijagnostike.
