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应用锁式探针结合斑点杂交技术检测甜瓜细菌性叶斑病
徐瑞 胡白石 田艳丽 黄艳宁 谢进 曹亮 彭斯文 朱校奇
中国农业科学,
2017
4
Journal Article
Recenzirano
【目的】甜瓜细菌性叶斑病是危害甜瓜的重要种传细菌病害,是由丁香假单胞杆菌流泪病致病变种甜瓜菌株（Pseudomonas syringae pv.lachrymans）引起的。论文旨在建立高效、快捷、操作简单的检测技术以防止此病原菌传播。【方法】以Gen Bank公布的甜瓜细菌性叶斑病菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate ...
dehydrogenase,GAPDH）基因序列为靶标,设计甜瓜细菌性叶斑病菌特异性锁式探针,建立锁式探针与斑点杂交技术结合的检测体系。以保存的目的菌株为材料,提取DNA作为模板进行锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,并将锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应的反应温度和反应时间分别进行优化。利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应分别对健康的甜瓜种子、带有甜瓜细菌性叶斑病的甜瓜种子、无菌水及25株其他参试菌株进行检测,测定该体系的特异性。将甜瓜细菌性叶斑病菌的DNA按10倍梯度稀释,依次稀释为1 ng·μL-1、100 pg·μL-1、10 pg·μL-1、1 pg·μL-1、100 fg·μL-1、10 fg·μL-1和1 fg·μL-1作为模板,利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,测定灵敏度。将探针与斑点杂交技术结合建立高通量检测体系,将上述反应过程中的扩增产物固定于尼龙膜上,将锁式探针上Zipcode序列的反向互补序列合成c Zipcode（检测探针）,检测探针（c Zipcode）用地高辛标记后与产物进行杂交。锁式探针结合斑点杂交技术分别进行特异性检测和灵敏度测定。探针与斑点杂交技术结合建立的高通量检测体系进行人工模拟种子带菌检测,进一步验证该体系的可靠性。利用建立的高通量检测方法对205份市售疑似带病的甜瓜种子进行检测。【结果】锁式探针特异性测定结果表明,26株甜瓜细菌性叶斑病菌均能得到一条105 bp的特异性条带,而剩余25株参试菌株及无菌水均无扩增产物产生。灵敏度测定结果表明,当目的菌株的浓度稀释为1 pg·μL-1时均能检测到一条105 bp的特异性条带,所以探针的检测灵敏度为1 pg·μL-1。探针与斑点杂交技术结合建立的检测甜瓜细菌性叶斑病菌高通量体系能将甜瓜细菌性叶斑病与所有的参试菌种区分开,26株甜瓜细菌性叶斑病菌杂交后出现了显色反应,而25株参试菌株及无菌水均没有发生显色。锁式探针结合斑点杂交的灵敏度检测同样
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Dostopno za:
UL
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应用锁式探针结合斑点杂交技术检测甜瓜细菌性叶斑病
徐瑞 胡白石 田艳丽 黄艳宁 谢进 曹亮 彭斯文 朱校奇
中国农业科学,
2017, Letnik:
50, Številka:
4
Journal Article
Recenzirano
【目的】甜瓜细菌性叶斑病是危害甜瓜的重要种传细菌病害,是由丁香假单胞杆菌流泪病致病变种甜瓜菌株（Pseudomonas syringae pv.lachrymans）引起的。论文旨在建立高效、快捷、操作简单的检测技术以防止此病原菌传播。【方法】以Gen Bank公布的甜瓜细菌性叶斑病菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate ...
dehydrogenase,GAPDH）基因序列为靶标,设计甜瓜细菌性叶斑病菌特异性锁式探针,建立锁式探针与斑点杂交技术结合的检测体系。以保存的目的菌株为材料,提取DNA作为模板进行锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,并将锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应的反应温度和反应时间分别进行优化。利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应分别对健康的甜瓜种子、带有甜瓜细菌性叶斑病的甜瓜种子、无菌水及25株其他参试菌株进行检测,测定该体系的特异性。将甜瓜细菌性叶斑病菌的DNA按10倍梯度稀释,依次稀释为1 ng·μL^-1、100 pg·μL^-1、10 pg·μL^-1、1 pg·μL^-1、100 fg·μL^-1、10 fg·μL^-1和1 fg·μL^-1作为模板,利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,测定灵敏度。将探针与斑点杂交技术结合建立高通量检测体系,将上述反应过程中的扩增产物固定于尼龙膜上,将锁式探针上Zipcode序列的反向互补序列合成c Zipcode（检测探针）,检测探针（c Zipcode）用地高辛标记后与产物进行杂交。锁式探针结合斑点杂交技术分别进行特异性检测和灵敏度测定。探针与斑点杂交技术结合建立的高通量检测体系进行人工模拟种子带菌检测,进一步验证该体系的可靠性。利用建立的高通量检测方法对205份市售疑似带病的甜瓜种子进行检测。【结果】锁式探针特异性测定结果表明,26株甜瓜细菌性叶斑病菌均能得到一条105 bp的特异性条带,而剩余25株参试菌株及无菌水均无扩增产物产生。灵敏度测定结果表明,当目的菌株的浓度稀释为1 pg·μL^-1时均能检测到一条105 bp的特异性条带,所以探针的检测灵敏度为1 pg·μL^-1。探针与斑点杂交技术结合建立的检测甜瓜细菌性叶斑病菌高通量体系能将甜瓜细菌性叶斑病与所有的参试菌种区分开,26株甜瓜细菌性叶斑病菌杂交后出现了显色反应,而25株参试菌株及无菌水均没有发生显色。锁式探针结合斑点杂
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地理信息服务的智能化无缝聚合方法研究
俞志强 司文才 李东阳 付仲良
测绘地理信息,
2015
6
Journal Article
地理信息服务的多源、异构和分布式特征是制约地理信息共享的关键问题。研究了一种多源、分布式和异构地理信息服务的智能化无缝聚合方法,提出了一种混合服务聚合模式,实现了按网络环境、数据范围、位置和优先级等条件对符合OGC标准或WSDL/WADL描述的各种数据服务、处理服务等分布式、异构地理信息服务的智能调度和动态组合。在安吉美丽乡村地理信息服务平台中,通过对本地与天地图和百度等服务资源的聚合应用,验证了本文方法的有效性。
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我国快递业发展问题及路径探析
赵迪; 王跃华; 张思文 ...
中国市场,
2021
25
Magazine Article
目前我国快递业爆炸式发展,但同时面临着治安问题、服务专业性问题、配送问题和包装问题.快递业想要在激烈的竞争中站稳脚跟,就必须发展自己的核心竞争力,解决现有的问题.文章根据我国快递业的发展现状,提出切实可行的发展策略,我国快递业势必迎来又一个黄金时期.
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