Le titrage des anticorps antitétaniques est réalisé par les plateaux techniques des EFS (PT) dans le but de rechercher des donneurs dont le titre d’anticorps est supérieur ou égale à 8
UI/ml dans le ...plasma. Différentes trousses sont utilisées : Elisa antitoxine tétanique de type IgG (
The Binding Site), Elisat (Diagast), Tétanus Toxoid IgG Elisa (Diamed), Elisa IgG Tétanos (Ingen). Les résultats obtenus par ces différents réactifs s’avérant discordants lors des contrôles effectués par le LFB, il est apparu nécessaire d’harmoniser les pratiques de sélection. Pour ce faire, une étude des différentes trousses a été initiée.
L’évaluation a été réalisée en utilisant différents échantillons : (1) le témoin seuil de référence (PST) utilisé par les PT ; (2) un sérum de titre fort ; (3) une gamme de dilution de l’étalon national. Elle a porté sur les paramètres suivants : (1) robustesse avec l’évaluation de la contamination et de l’effet de bord ; (2) linéarité et répétabilité (huit dépôts de chaque standard, PST et points de gamme) ; (3) reproductibilité ; (4) homogénéité. Après dilution automatique des échantillons, les plaques sont ensuite traitées selon le protocole du fabricant par le gestionnaire.
À partir de ces tests ont été calculés : le CV en pourcentage de répétabilité et de reproductibilité, les valeurs des standards fournis ainsi que le biais par rapport au TSR et l’incertitude de mesures.
Cette étude a permis de situer chaque trousse par rapport au PST et de préciser les variations qui entourent chaque résultat pouvant expliquer les discordances de conformité des plasmas dont le titre est proche du seuil de sélection.
Antitetanus antibodies titration is carried out by French National Blood Services (FNBSs) with the aim of seeking donors whose title of antibodies are greater or equal to 8
IU/ml. Different kits are used: ELISA antitetanus toxoid IgG (The Binding Site), ELISAT (Diagast), tetanus toxoid IgG ELISA (Diamed), ELISA IgG tetanus (Ingen). As the results obtained using these different reagents show some discrepancies with the control results carried out by the
Laboratoire Français des Biotechnologies (LFB), it appeared necessary to harmonize the selection practices. With this intention a study of the different kits was initiated.
Different samples were used during this evaluation: (1) the Reference Control (RC) used by the FNBS; (2) a serum sample of high title; (3) a range of dilution of national standard. The following tests were carried out: (1) robustness with the evaluation of the contamination and the board effect; (2) linearity and repeatability (eight deposits of each standard, RC and points of national standard dilutions); (3) reproducibility; (4) homogeneity. After automatic dilution of the samples, the plates were then processed according to the protocol of the manufacturer.
The study gives the CV in percentage of repeatability and reproducibility, the values of the standards provided as well as the biais compared to the RC and the uncertainty of measurements.
This study gave the possibility to rank each kit compared to RC and to specify the variations which surround each result. This variation can explain the discrepancy of conformity of plasma when title is close to the threshold of selection.
La sensibilité analytique représente la limite de détection d'un réactif définie par la plus petite quantité, obtenue par dilutions, du marqueur cible pouvant être détectée. En sérologie virale, les ...réactifs permettent la mise en évidence d'une ou plusieurs spécificités. Pour les recherches d'antigènes ou d'anticorps monospécifiques (présence d'un seul marqueur cible), cette sensibilité dilutionnelle établissant la sensibilité analytique peut être comparée d'un réactif à l'autre. Pour les réactifs qui dépistent plusieurs spécificités anticorpales (présence de plusieurs marqueurs cibles), la sensibilité dilutionnelle ne permet plus de comparer les sensibilités des réactifs entre eux, du fait d'une sensibilité dilutionnelle dépendant des caractéristiques de la phase solide du réactif d'une part et de l'échantillon dilué d'autre part. Cette sensibilité dilutionnelle réactif et échantillon dépendante est la raison pour laquelle il est difficile de préparer des contrôles de qualité internes et externes et des panels qui soient appropriés pour tous les réactifs.
The analytical sensitivity represents the detection limit of a reagent, based on the smallest amount, obtained after dilutions, of the target marker that can be detected. In viral serology, reagents can screen one or several specificities. For single specific antigens or antibodies (presence of only one target marker) reagents, this dilutional sensitivity substantiates the analytical sensitivity which permits to compare a reagent with another one. For reagents which detect a number of antibody specificities (presence of several target markers), dilutional sensitivity does not allow to compare reagent sensitivities between them owing to the fact that the dilutional sensitivity is subordinated to the characteristics of the surface coating on one hand and the diluted sample on the other hand. This dilutional sensitivity, reagent and sample dependent, is the reason why it is difficult to prepare internal or external quality controls as well as panels which are adapted to all reagents.
Sécurité des produits sanguins labiles et parvovirus B19 Lefrère, J.-J.; Maniez-Montreuil, M.; Morel, P. ...
Transfusion clinique et biologique : journal de la Société française de transfusion sanguine,
10/2006, Letnik:
13, Številka:
4
Journal Article
Recenzirano
Plus d'un quart de siècle après la découverte du parvovirus B19 (B19), la question de la sécurité des produits sanguins labiles (PSL) vis-à-vis de ce virus et celle de son dépistage transfusionnel ...éventuel ne sont pas résolues. Bien que son mode de contamination habituel soit la voie aérienne, le virus peut être transmis par un PSL. La prévalence estimée des dons de sang virémiques est comprise entre 1/625 et 1/50 000, taux qui dépende de la sensibilité de la technique de détection et de la période de l'année, en raison de l'existence de pics épidémiques. Les pathologies liées au virus sont souvent bénignes, mais une contamination transfusionnelle peut avoir des conséquences graves chez trois types de receveurs : (i) ceux atteints d'hémolyse chronique et non encore immunisés, chez lesquels le B19 peut être responsable d'une anémie centrale profonde ; (ii) les malades immunodéprimés, chez lesquels, la virémie peut devenir chronique et s'accompagner d'une anémie intense, voire d'une aplasie ; (iii) les femmes enceintes non immunisées, chez lesquelles le fœtus court un risque d'anasarque. Il pourrait ainsi être proposé de réserver, pour ces trois catégories de receveurs, des PSL sélectionnés comme issus de dons recueillis en dehors de la phase hautement virémique de primo-infection. L'identification de tels dons pourrait certes s'effectuer par un dépistage génomique viral (DGV) du B19, mais une autre possibilité, plus simple et moins coûteuse, serait de sélectionner les donneurs immunisés et se situant à distance de leur propre primo-infection, autrement dit des sujets immunisés, positifs pour l'anticorps IgG spécifique et négatifs pour l'anticorps IgM ou positifs pour l'IgG à deux reprises avec un recul de quelques mois. Il reste le problème, non encore résolu, du risque transfusionnel, chez les receveurs immunodéprimés, des virémies basses chroniques telles qu'on les observe chez environ 1 % des donneurs positifs pour l'IgG anti-B19. Leur dépistage, qui ne pourrait reposer que sur un DGV de très haute sensibilité, n'aurait quelque légitimité que si l'infectiosité des PSL dont ils sont issus était démontrée. Dans la négative, le dépistage des dons à risque d'avoir été collectés pendant la phase de primo-infection à travers la seule recherche de la présence de l'IgG spécifique sur quelques mois et dont les PSL seraient utilisés chez les receveurs à risque définis plus haut apparaît comme une stratégie préventive suffisante.
More than 25 years after the discovery of the parvovirus B19 (B19), the issue of the safety of blood components and the screening of this virus in blood donations is still debated. Although more often transmitted by respiratory route, B19 may also be transmitted by transfusion of blood components. This risk of exposure has been estimated to a frequency ranging from 1/625 to 1/50,000, according to the sensitivity of the detection methods and to seasonal epidemiologic circumstances. Usually, B19 is responsible for benign pathologies. However, such an infection can have a serious clinical outcome in three categories of susceptible recipients: (i) patients with shortened red cell survival (thalassemia major, sickle cell disease, other hemolytic diseases); (ii) immunocompromised patients (previously exposed to B19 or not) (iii) and pregnant women (not previously exposed the B19), with a risk of hydrops fetalis or of intrauterine death. Selected blood components, not collected during the short but highly viremic pre-seroconversion phase, could be reserved for these three groups of at-risk recipients. The screening of such viremic donations could be performed with nucleic acid testing (NAT), but an alternate strategy could be the selection of B19 immunised donors far from the primo-infection (positive for B19 IgG and negative for B19 IgM, or only positive for IgG at two controls distant of several months). However, the existence of persistently B19-infected individuals carrying B19 DNA despite the presence of specific IgG (estimated at 1% of blood donors) could constitute a potential threat for transfused immunocompromised recipients. The screening of such donors, which could be performed through a very highly sensitive NAT, would be justified only if the infectivity of such blood donations is demonstrated. If not, a screening of blood donors positive for B19 IgG would be a sufficient preventive measure.
Antitetanus antibodies titration is carried out by French National Blood Services (FNBSs) with the aim of seeking donors whose title of antibodies are greater or equal to 8 IU/ml. Different kits are ...used: ELISA antitetanus toxoid IgG (The Binding Site), ELISAT (Diagast), tetanus toxoid IgG ELISA (Diamed), ELISA IgG tetanus (Ingen). As the results obtained using these different reagents show some discrepancies with the control results carried out by the Laboratoire Français des Biotechnologies (LFB), it appeared necessary to harmonize the selection practices. With this intention a study of the different kits was initiated.
Different samples were used during this evaluation: (1) the Reference Control (RC) used by the FNBS; (2) a serum sample of high title; (3) a range of dilution of national standard. The following tests were carried out: (1) robustness with the evaluation of the contamination and the board effect; (2) linearity and repeatability (eight deposits of each standard, RC and points of national standard dilutions); (3) reproducibility; (4) homogeneity. After automatic dilution of the samples, the plates were then processed according to the protocol of the manufacturer.
The study gives the CV in percentage of repeatability and reproducibility, the values of the standards provided as well as the bias compared to the RC and the uncertainty of measurements.
This study gave the possibility to rank each kit compared to RC and to specify the variations which surround each result. This variation can explain the discrepancy of conformity of plasma when title is close to the threshold of selection.
Plusieurs études internationales ont décrit une prévalence élevée de la mutation précore G1896A (PC) chez les donneurs de sang. Nous avons mené un projet en collaboration avec l’Institut national de ...transfusion sanguine sur la prévalence des génotypes et des mutants précore chez les donneurs de sang en France.
L’effectif comprenait 100 donneurs de sang nouvellement dépistés AgHBs positifs. La mutation PC a été recherchée par trois méthodes différentes : une technique de PCR temps réel (PCR TR) développée dans notre laboratoire et ciblée sur la mutation PC, le séquençage direct et l’hybridation moléculaire inverse (Kit Inno-LIPA HBV Precore, INNOGENETICS
®).
La moyenne d’âge dans la population étudiée était de 30 ans (extrêmes 18–64). L’origine géographique était africaine dans 42 % des cas. La prévalence de la mutation G1896A isolée ou associée à du virus précore sauvage était de 57 % en technique Inno-LIPA et de 59 % par séquençage ou PCR TR. Les donneurs infectés par un virus précore muté avaient des charges virales VHB significativement plus basses que les patients porteurs d’un virus sauvage (3,19 Log
10 UI/ml versus 4,93 Log
10 UI/ml,
p < 0,05).
Nous confirmons les données de la littérature à savoir une prévalence relativement élevée de mutation PC chez les donneurs de sang français. Sachant que ces sujets sont la plupart du temps asymptomatiques et avec des charges virales VHB inférieures au seuil défini par l’EASL pour le portage inactif, la question du rôle de la mutation G1896A dans la sévérité des lésions hépatiques reste à préciser.
To screen hepatitis B virus (HBV) genotypes and associated basal core promoter (BCP; T1762A/A1764) and precore (PC; A1896) mutations among the 100 HBV surface antigen (HBsAg) positive voluntary blood donors in France.
HBV genotypes were determined by using direct sequence analysis. Three methods were used to detect G1896A mutation: non-commercial real-time PCR (PCRTR°, line probe assay (InnoLiPA HBV PreCore, INNOGENETICS
®) and direct sequencing of precore gene. HBV viral load was quantified with two commercial real-time PCR (COBAS
® AmpliPrep/COBAS
® TaqMan
® HBV Test/Roche and Real Time HBV/M2000/Abbott).
The mean age of donors was 30 (18–64). Patients were from Africa (42%), Europa (50%), and Asia (8%). HBV/D was the most predominant (37%) genotype followed by HBV/A (31%) and HBV/E (22%). PC and BCP mutants were found in 57% with Inno-LIPA HBV test and 59% with both PCRTR and sequencing methods. A significant difference in the viral load of blood donors with wild and PC mutants was observed with the Taqman Cobas real time PCR (3,19 Log
10 UI/ml versus 4,93 Log
10 UI/ml,
p < 0.05). Precore phenotype determination was in agreement with the three PC mutation detection methods in 56% of cases.
Non-Caucasian genotype E was present in the French blood donors. PC mutation was more common than BCP mutations in this study. As HBV infected blood donors were more often asymptomatic carriers, we could speculate that the G1896A mutation may favour the asymptomatic state, supporting previous observations.
PDF
