The present study was performed to compare the expression of sperm proteins, i.e. triosephosphate isomerase (TPI) and acrosin binding protein (ACRBP) and seminal plasma proteins, i.e. glutathione ...peroxidase 5 (GPX5) and fibronectin 1 (FN1), in boar semen with good, moderate and poor freezability. The study was conducted by determining the protein contents in 32 sperm samples and 38 seminal plasma samples of semen. The ejaculated semen was divided into two portions: the first portion was centrifuged to separate the pellet of sperm from the seminal plasma and the second portion was cryopreserved. After thawing, the ejaculates were classified into three groups according to their post-thawed sperm motility: good (60.2 ± 1.7%), moderate (29.3 ± 2.0%) and poor (16.6 ± 2.2%) freezabilities. The expressions of GPX5 and FN1 in seminal plasma and TPI and ACRBP in sperm were determined using Western blot analysis. It was found that, for sperm proteins, the level of TPI was negatively correlated with the post-thawed total sperm motility (r = -0.38, P = 0.029). For seminal plasma proteins, the level of FN1 in the seminal plasma was positively correlated with the post-thawed total sperm motility (r = 0.37, P = 0.021) and progressive motility (r = 0.39, P = 0.016). The expression of GPX5 was not correlated with any of the frozen–thawed sperm qualities (P > 0.05). In conclusions, boar semen containing a high level of FN1 in seminal plasma has better freezability. Frozen–thawed sperm motility was positively correlated with the level of FN1 in boar seminal plasma and negatively correlated with TPI in boar spermatozoa.
Ova studija provedena je u svrhu usporedbe ekspresije proteina sperme, tj. trioza-fosfat izomeraze (TPI) i akrozin-vezujućeg proteina (ACRBP) te proteina sjemene plazme, tj. glutation peroksidaze 5 (GPX5) i fibronektina 1 (FN1), u sjemenu nerasta s dobrom, umjerenom i lošom sposobnošću smrzavanja. Studija je provedena ustvrđivanjem sadržaja proteina u 32 uzorka sperme i 38 uzoraka sjemene plazme sjemena. Ejakulirano sjeme podijeljeno je u dva dijela: prvi dio je centrifugiran za odvajanje taloga sperme od sjemene plazme, a drugi je dio je krioprezerviran. Nakon odmrzavanja u skladu s pokretljivošću spermija nakon odmrzavanja ejakulati su klasificirani u tri skupine: dobra (60,2 ± 1,7%), umjerena (29,3 ± 2,0%) i loša (16,6 ± 2,2%) sposobnost smrzavanja. Ekspresije GPX5 i FN1 u sjemenoj plazmi te TPI i ACRBP u spermi ustvrđene su „Western blot“ analizom. Za proteine sperme je otkriveno da je razina TPI nakon odmrzavanja negativno povezana s ukupnom pokretljivošću sperme (r = -0,38, P = 0,029). Za proteine sjemene plazme, razina FN1 u sjemenoj plazmi nakon odmrzavanja pozitivno je povezana s ukupnom pokretljivošću sperme nakon odmrzavanja (r = 0,37, P = 0,021) i progresivnom pokretljivošću (r = 0,39, P = 0,016). Ekspresija GPX5 nije povezana ni sa kakvim kvalitetama smrznute pa odmrznute sperme (P > 0,05). Zaključno, sjeme nerasta koje sadrži visoku razinu FN1 u sjemenoj plazmi ima bolju sposobnost smrzavanja. Pokretljivost sperme koja je smrznuta pa odmrznuta pozitivno je povezana s razinom FN1 u sjemenoj plazmi nerasta, a negativno s razinom TPI u spermijima nerasta.
ĮžangaPer pastaruosius 30 metų vis daugiau jaunų moterų suserga kolorektaliniu vėžiu. Tokioms pacientėms, nustačius didesnę nei pirmą tiesiosios žarnos vėžio stadiją, dažniausiai pasirenkamas ...kompleksinis gydymo metodas: derinamas chemospindulinis ir chirurginis gydymas. Todėl dauguma jauno amžiaus moterų po vėžio gydymo susiduria su nevaisingumo ir jatrogeninės ankstyvos menopauzės problema. Pacientės nepakankamai informuojamos apie neigiamą chemoterapijos ir radioterapijos poveikį reprodukcinei sistemai bei galimybes išsaugoti pakankamą reprodukcinės sistemos veiklą ir normalizuoti kiaušidžių funkciją po gydymo. Aprašome klinikinį atvejį norėdami supažindinti Lietuvos gydytojų visuomenę ir pacientus su vaisingumo ir kiaušidžių funkcijos išsaugojimo galimybe gydant tiesiosios žarnos vėžį – atliekant kiaušidžių transpoziciją bei kiaušidžių audinio krioprezervaciją.Klinikinis atvejis27 metų pacientei 2015 m. spalio 12 d. buvo diagnozuotas tiesiosios žarnos vėžys. Endoskopiniais ir radiologiniais tyrimais buvo nustatyta III klinikinė stadija. Daugiadalykio aptarimo metu buvo nutarta gydymą pradėti nuo priešoperacinės chemospindulinės terapijos, prieš tai atlikus laterokolinę kiaušidžių transpoziciją ir kiaušidžių audinio krioprezervaciją, kuri buvo atlikta 2015 m. lapkričio 25 d. Paskui pacientei buvo paskirtas priešoperacinis chemospindulinis gydymas. Jį baigus, konstatuotas patenkinamas terapinis efektas ir 2016 m. vasario 25 d. buvo atlikta laparoskopinė tiesiosios žarnos rezekcija. Navikas pašalintas radikaliai. Šiuo metu tęsiama adjuvantinė chemoterapija.IšvadosNaudojant kiaušidžių transpozicijos ir kiaušidės audinio krioprezervacijos metodus pacientei buvo suteikta galimybė išvengti gydymo sukeltos (jatrogeninės) ankstyvos menopauzės bei tikėtinai išsaugoti vaisingumo funkciją.
SAŽETAK
UvodPandemija COVID-19 dovela je do izazova u liječenju bolesnika kojima je potrebna transplantacija krvotvornih matičnih stanica (KMS). Porastom broja oboljelih širom svijeta smanjila se ...dostupnost KMS-a zbog infekcije darivatelja i ograničenja u međunarodnom prometu. Sukladno tomu, uveden je niz mjera u cilju zaštite bolesnika i darivatelja te osiguravanja dostupnosti transplantata tijekom pandemije. Cilj rada bio je prikazati utjecaj pandemije COVID-19 na prikupljanje alogeničnih KMS-a u KBC-u Zagreb.
MetodeProvedena je retrospektivna analiza podataka za razdoblje od 1. ožujka 2020. do 30. lipnja 2021. Podatci su prikupljeni iz bolničkoga informacijskog sustava te zapisnika sa sastanaka Povjerenstva za liječenje transplantacijom KMS-a KBC-a Zagreb.
RezultatiU navedenom razdoblju prvenstveno su korištene KMS iz periferne krvi, osim u slučaju snažne indikacije za primjenu koštane srži (KS). Pripravci alogeničnih KMS-a su prije početka kondicioniranja krioprezervirani kako bi se osigurala raspoloživost prema planu liječenja. Kod 13 bolesnika se odustalo od prikupljanja KMS-a jer su dobili COVID-19. Alogenične KMS su prikupljene od srodnih i nesrodnih darivatelja iz Hrvatskog registra dobrovoljnih darivatelja KMS-a i Svjetskog udruženja darivatelja koštane srži za ukupno 135 bolesnika. Koštana srž je prikupljena za 12,5% bolesnika i svi pripravci su transplantirani. Šesnaest bolesnika je transplantirano s perifernim KMS umjesto KS. Transplantirano je 94,1% pripravaka perifernih KMS-a, od kojih je 17 transplantirano s odgodom zbog infekcije darivatelja i/ili bolesnika bolešću COVID-19 prije ili nakon prikupljanja KMS-a. Od ukupno 118 transplantata perifernih KMS-a, 100 (84,7%) ih je krioprezervirano u 540 vrećica. Sedam (5,9%) krioprezerviranih transplantata perifernih KMS-a nisu infundirani zbog progresije bolesti (5), infekcije primatelja bolešću COVID-19 (1) i loše vijabilnosti stanica (1).
ZaključakPandemija COVID-19 nepovoljno je utjecala na prikupljanje i transplantaciju KMS-a uz brojne organizacijske i logističke izazove. Krioprezervacija alogeničnih KMS-a omogućila je uspješno odvijanje transplantacijskog liječenja, iako je nažalost praćena rizikom da neki od tih pripravaka kasnije ne budu infundirani, što izlaže darivatelje riziku nepotrebnog prikupljanja i povećava troškove liječenja.
U suvremenom svijetu učestalost parova koji ne uspijevaju na prirodan način ostvariti potomstvo u stalnom je porastu. Razlozi za neplodnost su mnogi, a najčešći jest visoka dob majke. Medicinski ...pomognuta oplodnja također omogućuje da osobe koje boluju od malignih bolesti zamrznu spolne stanice te kasnije ostvare potomstvo. Dva temeljna oblika liječenja neplodnosti obuhvaćaju intrauterinu inseminaciju i izvantjelesnu oplodnju.
Postoje izvješća da je bojanje Coomassie plavom učinkovita i jeftina metoda procjene integriteta akrosome spermija. Međutim, ne postoje izvješća o bojanju Coomassie plavom za procjenu integriteta ...akrosome krioprezervirane sperme nerasta. Nadalje, informacije u svezi podudarnosti između bojanja Coomassie plavom i fluorescein izotiocijanatom konjugiranim s aglutininom kikirikija i etidij homodimerom (FITC-PNA/ EthD-1) za procjenu integriteta akrosome spermija nisu dostupne niti za jednu vrstu. Stoga je ova studija provedena za određivanje učinkovitosti i podudarnosti između metoda bojanja Coomassie plavom i bojanja FITC-PNA/EthD-1 za procjenu integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta. U eksperiment je uključeno ukupno 25 uzoraka sjemena. Sjeme je krioprezervirano uporabom razrjeđivača na bazi laktoze i žumanjka i pohranjeno u 0,5 PVC-pajete. Svojstva pokretljivosti i gibanja spermija ustvrđena su uporabom sustava za računalno potpomognutu analizu spermija. Vijabilnost spermija i integritet njihove stanične membrane procijenjeni su uporabom SYBR-14/EthD-1, odnosno hipoosmotskim testom bubrenja. Integritet akrosome smrtznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjen je uporabom bojanja FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom. Procijenjena je povezanost između integriteta akrosome sperme ustvrđene pomoću bojanja FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom te podudarnost između dviju metoda mjerenja. Prosječni postotak integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta ustvrđene bojanjem FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom bio je 48,8 ± 12,6 %, odnosno 52,6 ± 13,6% (P>0,05). Zanimljivo, vijabilnost spermija korelirala je s integritetom akrosome procijenjenom uporabom Coomassie plavom (r=0,609, P=0,002), ali nije korelirala kada je procjenjivana uporabom FITC-PNA/EthD-1 bojanja (P>0,05). Međutim, integritet akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjen bojanjem FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom značajno je korelirao (r=0,448, P=0,025, n=25). Uz to, podudarnost između bojanja Coomassie plavom i FITC-PNA za procjenu integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta ustvrđena Bland- Altmanovim grafikonom bila je prihvatljiva. Zaključno, integritet akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjena bojanjem Coomassie plavom značajno je korelirao s onim dobivenim FITC-PNA/EthD- 1 metodom bojanja te su te dvije metode pokazale dobru podudarnost. Uz to, značajna povezanost između integriteta akrosoma smrznute pa odmrznute sperme nerasta koja je ustvrđena bojanjem Coomassie plavom i drugih parametara kakvoće sperme ukazuju na to da je bojanje Coomassie plavom učinkovita metoda procjene integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme u svinja.
Equex pasta je neprožimajuće kriozaštitno sredstvo (CPA) za koje je dobro poznato da poboljšava preživljavanje spermija nakon odmrzavanja tijekom krioprezervacije sjemena nerasta. Međutim, Equex ...pasta koju proizvodi tvrtka Nova Chemical Sales Inc. (MA, SAD) trenutno nije dostupna na tržištu. Cilj ove studije bio je odrediti optimalnu koncentraciju Minitube Equex paste (Minitube, Tiefenbach, Njemačka) za krioprezervaciju sjemena nerasta u usporedbi s Nova Equex STM pastom (kontrola). Prikupljeno je petnaest ejakulata 12 zrelih nerasta metodom manualne fiksacije penisa. Svaki ejakulat bio je raspodijeljen i krioprezerviran u osnovnom razrjeđivaču za duboko zamrzavanje III – razrjeđivač trinatrijev citrat s dodatkom žutanjka jajeta (TEY) plus 9,0 % glicerola, razvrstano u četiri skupine (tj. skupine I, II, III i IV). Skupina I: 1,5 % Nova Equex STM pasta (kontrola) i tri različite koncentracije Minitube Equex paste (Skupina II: 1,5 %; Skupina III: 1,7 %; i Skupina IV: 1,9 %) dodano je osnovnom razrjeđivaču za duboko zamrzavanje III. Nakon zamrzavanja i odmrzavanja, karakteristike pokretljivosti spermija procijenjene su pomoću analizatora sperme Sperm Class Analyzer® inkubirano na 37 °C, 0 (10 min), 1 i 2 h nakon odmrzavanja. U Skupini IV, 0 h nakon odmrzavanja, brzina i krivulja brzine bile su značajno više nego u Skupinama II i III (P < 0,05), ali se nisu razlikovale od Skupine I. Nadalje, 1 h nakon odmrzavanja, LIN (linearnost) u Skupini IV bila je veća nego u Skupini II (P < 0,05), ali se nije razlikovala od ostalih skupina. Zaključno, najprikladnija koncentracija Minitube Equex paste u ovom protokolu bila je 1,9 % uz dodatak 9,0 % glicerola u TEY razrjeđivaču za zamrzavanje III, zbog sukladnosti između podataka iz priručnika i zamijećenih rezultata karakteristika pokretljivosti spermija.
Svrha ovoga preglednog članka je prikazati suvremene mjere za prevenciju porasta predovulacijskog progesterona (P) i njegovih nepovoljnih učinaka kod stimulacije jajnika u postupku izvantjelesne ...oplodnje. Unatrag 20-ak godina porast predovulacijskog P tema je brojnih rasprava, jer njegova uloga nije u potpunosti razjašnjena u pogledu utjecaja na ishod trudnoće nakon postupka izvantjelesne oplodnje. Neka istraživanja nisu utvrdila nikakvu povezanost između porasta predovulacijskog P u odnosu na uspješnost postupka izvantjelesne oplodnje neovisno o razini P, dok nasuprot tome, većina drugih istraživanja izvješćuje o nepovoljnim učincima povišene koncentracije P. Suvremene strategije u prevenciji porasta predovulacijskog P uključuju individualizirani pristup primjenom blažih stimulacijskih protokola te raniju primjenu humanog korionskog gonadotropina za indukciju ovulacije kod bolesnica koje dobro reagiraju na stimulaciju, odgodu prijenosa svježih zametaka s 3. na
5. dan i krioprezervaciju svih zametaka uz transfer odmrznutih embrija u prirodnom ciklusu. Neophodna su daljnja istraživanja koja će potvrditi postojeće prevencijske metode ili omogućiti primjenu novih strategija, sa svrhom onemogućavanja nepovoljnog utjecaja porasta predovulacijskog P na ishod trudnoće nakon postupka izvantjelesne oplodnje.
Svrha istraživanju bila je ustanoviti učinkovitost ultrabrze vitrifikacije u otvorenoj rastegnutoj slamci na vitalnost konjskih zametaka, prijenosom vitrificiranih pa otopljenih zametaka u ...sinkronizirane primateljice. Istraživanje je provedeno na stadu Welsh poni kobila. Davateljicama zametaka maternice su transcervikalno bile ispirane 6,75 dana nakon ovulacije, a zametci su nakon vitrifikacije bili pohranjeni u spremnik s tekućim dušikom. Nakon odmrzavanja, zametci su bili prenijeti u sinkronizirane primateljice. Maternice primateljica bile su ispirane petoga dana nakon prijenosa odmrznutih zametaka. Ukupno je bilo preneseno dvadeset zametaka, a ispiranjem maternica primateljica dobiveno je devet zametaka što iznosi 56% s obzirom da je u jedne primateljice ispiranjem ustanovljen endometritis. Od zametaka dobivenih ispiranjem primateljica, sedam (44%) je imalo morfološki normalno razvijene zametne mjehure. Na osnovi provedenih istraživanja zaključeno je da su rezultati ostvareni vitrifikacijom u otvorenoj rastegnutoj slamci ohrabrujući, ali bi ih s obzirom na mali broj prenijetih zametaka trebalo potvrditi na većem uzorku, posebice sa zametcima odabranoga promjera te brojem ždrebadi.
Upotreba tehnika kulture in vitro povećava mogućnosti prikupljanja, ex situ čuvanja i razmjene biljnih vrsta koje tvore kratkoživuće sjeme kao i vegetativno propagirajućih vrsta. ln vitro tehnike ...čuvanja, u koje ubrajamo održavanje kultura usporenim rastom (srednjerodno čuvanje) i krioprezervaciju (dugorodno čuvanje) pružaju veliku prednost u čuvanje takvih problematičnih vrsta. Također, in vitro tehnike pružaju mogućnost eliminacije patogena i prema tome omogućuju čuvanje i razmjenu zdravog biljnog materijala.
PDF
