Akademska digitalna zbirka SLovenije - logo
(UL)
  • Povezava med uravnavanjem genov cirkadialnega ritma in homeostazo holesterola = The cross-talk between gene regulation of the circadian rhythm and cholesterol homeostasis : diplomska naloga
    Španinger, Klemen, 1981-
    Lanosterol-14 -demetilaza (CYP51) je encim, ki sodeluje v biosintezi holesterola pri zivalih. Bliznji promotor gena CYP51 vsebuje od cAMP-odvisne regulatorne elemente (CRE) ter od sterolov ... odvisni-regulatorni elementi (SRE) in GC-zaporedje. Ta regulatorna zaporedja so odgovorna za osnovno, od sterolov-odvisno ter od cAMP-odvisno prepisovanje sesalskih genov CYP51. Izrazanje gena CYP51 pa je tudi cirkadialno. Namen nasega dela je bil ugotoviti ali cirkadialni transkripcijski faktorji Clock, Bmal, Per1, Per2 in ICER, neposredno uravnavajo izrazanje holesterolnega gena CYP51 ter ali so cirkadialni geni uravnavani s povratno zanko holesterola oziroma s transkripcijskimi faktorji druzine SREBP (angl. Sterol Regulatory Element Binding Proteins). To smo zeleli preveriti z uporabo poroèevalskih vektorjev. Ugotovili smo, da transkripcijski faktorji druzine SREBP nimajo skoraj nobenega vpliva na prepisovanje in aktivnost lucifereaznega poroèevalca, katerega izrazanje je bilo pod kontrolo bliznjih promotorjev cirkadialnih genov Per1, Per2 in Bmal. Vpliv opazimo le pri dodatku transkripcijskih faktorjev SREBP-2 in SREBP-2gc na poroèevaleca Per1 in Bmal, vendar pa je odziv fiziolosko vprasljiv. Na tej stopnji se je pojavilo vprasanje ali poroèevalci Per1, Per2 in Bmal v bliznjem promotorskem podroèju vsebujejo vezavna mesta za transkripcijske faktorje SREBP. Zaradi tega smo naredili bioinformatièno analizo promotorjev. Ugotovili smo, da v bliznjih promotorjih ni vezavnih mest za transkripcijske faktorje SREBP. Drugi sklop poskusov pa jebil namenjen ugotavljanju vpliva cirkadialnih transkripcijskih faktorjev (Per1, Clock, Bmal, Cry1, ICER) na prepisovanje bliznjega promotorja èloveskega gena CYP51. Ob dodatku kombinacije cirkadialnih transkripcijskih faktorjev BmalžClock, ki delujeta kot heterodimer, smo prièakovali poveèano izrazanje luciferaznega poroèevalca CYP51, vendar pa s poskusi tega nismo uspeli potrditi. Ta rezultat smo potrdili s poskusom titracijskih transfekcij s transkripcijskima faktorjema Bmal in Clock. Zaznali pa smo zmanjsanega izrazanja poroèevalca CYP51 ob dodatku represornih cirkadialnih transkripcijskih faktorjev Per1 in Cry1. Pri promotorski analizi CYP51 pa smo ugotovili, da vezavnega mesta za heterodimer BmalžClock v oddaljenem promotorju gena CYP51 ni, kar je lahko vzrok za neodzivnost poroèevalca CYP51 na ta heterodimer. V tem sklopu poskusov smo tudi preverjali vpliv cirkadialnih transkripcijskih faktorjev v kombinaciji s SREBP-2 na odziv poroèevalca CYP51. Ugotovljeno je bilo, da ima le kombinacija Per1žCry1 ob prisotnosti SREBP-2 represorni uèinek na poroèevalec CYP51. Prav tako je bilo ugotovljeno, da ob dodatku kombinacije ICERžCREB pride do represije, kar lahkorazlozimo z moènejso vezavo ICER na mesto CYP51-CRE2. Poleg tega smo ugotovili se represorni uèinek kombinacije CREBžSREBP-2 ter se moènejso represijo kombinacije ICERžSREBP-2. Vzrok temu je lahko izpodrivanje na vezavnih mestih ter velikost transkripcijskih faktorjev. Nasi rezultati so pokazali, da bo potrebno za prouèevanje vpliva transkripcijskih faktorjev SREBP na cirkadialne gene pripraviti daljsa promotorska zaporedja genov Per1, Per2 in Bmal. Izziv za prihodnost pa predstavljajo tudi analiza vezavnih mest za razliène transkripcijske faktorje v oddaljenih promotorjih genov CYP51, Bmal in Per1.
    Vrsta gradiva - diplomsko delo
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [Španinger, K.], 2006
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 1889393

Knjižnica Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
dp 615 ŠPANINGER KLEMEN Povezava
IN: 0008801 		v pripravi - v obdelavi
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico