Akademska digitalna zbirka SLovenije - logo
(UL)
  • Vpliv mutacij v regiji G-kvadrupleksa promotorja gena TNFSF11 na njegovo aktivnost = The influence of mutations in the G-quadruplex region of TNFSF11 gene promoter on its activity : enovit magistrski študij farmacije
    Kovačič, Mateja, farmacevtka
    Vzrok za bolezni kosti je največkrat neravnovesje med razgradnjo in izgradnjo kostnine. Najbolj razširjena presnovna kostna bolezen je osteoporoza, ki lahko nastane zaradi motenj v dveh glavnih ... regulatornih mehanizmih. Prvi je sistem RANKL/RANK/OPG, ki je glavni pri nadzoru osteoklastogeneze, drugi pa je signalna pot Wnt, ki ima vlogo pri osteoblastogenezi. V magistrski nalogi smo se osredotočili na sistem RANKL/RANK/OPG. Pri neustreznem delovanju tega sistema lahko pride do povečanega izražanja proteina RANKL, ki se veže na membrano osteoklastov in poveča njihovo število ter aktivnost. Gen, ki kodira za protein RANKL, se imenuje TNFSF11. Promotorska regija gena TNFSF11 vsebuje regulatorne elemente in strukturo, imenovano G-kvadrupleks. Regulatorni elementi omogočajo vezavo različnih transkripcijskih dejavnikov, ki lahko pospešijo ali zavrejo izražanje gena TNFSF11. V magistrski nalogi smo proučevali, kakšen vpliv imajo spremembe v zaporedju G-kvadrupleksa na aktivnost promotorja gena TNFSF11. Pri delu smo rokovali s plazmidnim vektorjem pGL3, ki je vseboval del promotorske regije gena TNFSF11, v katerega smo vnesli mutacije na različnih mestih G-kvadrupleksa (RANG2713T, RANG2719T in RANG27T). Plazmide smo nato s transfekcijo vstavili v celice HeLa (celice raka materničnega vratu) in s pomočjo dvojnega luciferaznega testa izmerili vpliv na aktivacijo promotorja. Pri vseh pripravljenih plazmidih z vnesenimi spremembami je prišlo, glede na izvorni plazmid, do znižanja aktivnosti promotorja (pri mutacijah RANG2713T in RANG2719T se je aktivnost zmanjšala za faktor 0,2; pri RANG27T pa za faktor 0,4). Znižana aktivnost promotorja pa pomeni manjše izražanje proteina RANKL in posledično zmanjšano razgradnjo kosti. Proučevali smo tudi vpliv dveh genetskih sprememb v genu TNFSF11 % rs201748497 in rs200072190 % pri obeh smo zamenjali po en bazni par, kar je prav tako povzročilo znižanje aktivnost promotorja tega gena (pri rs201748497 se je aktivnost promotorja v primerjavi z izvornim plazmidom zmanjšala za faktor 0,9; pri rs200072190 pa za faktor 0,7). Iz dobljenih rezultatov lahko zaključimo, da vsaka sprememba, ki smo jo vnesli, vpliva na spremembo aktivnosti promotorja gena TNFSF11, posledično na izražanje proteina RANKL in s tem na nastanek osteoporoze. S tem smo doprinesli nove informacije o vplivu posameznih sprememb v genu TNFSF11, kar bi lahko pomagalo pri razvoju bolj učinkovitih in selektivnih učinkovin, ki bi se vezale bodisi na sam G-kvadrupleks ali kateri drugi sistem, ki sodeluje pri procesu kostne prenove (RANK/RANKL/OPG).
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [M. Kovačič], 2020
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 20895235

    Povezava(-e):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=117103

Knjižnica Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
emšf 616 KOVAČIČ MATEJA Vpliv 844
IN: 0016599 		prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico