A floração in vitro é uma técnica utilizada no melhoramento genético que acelerar gerações e favorecer a fixação mais rápida de novos caracteres de interesse agronômico e do mercado. O estudo visou estabelecer um protocolo para a floração in vitro de Den- drobium nobile, através dos efeitos combinados de temperatura e do regulador de crescimento thidiazuron (TDZ). Os experimentos foram realizados em incubadora tipo BOD a 18, 21, 24 °C e, em sala de crescimento a 26 °C. As concentrações de TDZ testadas foram de 0,0, 0,5, 1,0 e 2,0 mg L-1. A maior porcentagem de brotos floridos de 13,70% ocorreu na concentração de 2 mg L-1 de TDZ cultivados em temperatura de 18 °C. O florescimento in vitro de D. nobile foi promovido em plantas cultivadas em ½ MS suplementadas com 30 g L-1 de sacarose, 5,5 g L-1 de ágar, 100 mL L-1 de água de coco, pH 6,0 e 2,0 mg L-1 de TDZ em tempera- tura controlada de 18 °C e fotoperíodo de 16 h. O protocolo de indução de florescimento in vitro da espécie D. nobile poderá ser utilizado ou aprimorado para estudos futuros.