Razvoj kromatografske metode za določanje rezidualne plazmidne DNA v procesnih vzorcih mRNA = Chromatografic method development for determination of residual plasmid DNA in mRNA process samples : univerzitetni študijski program druge stopnje Laboratorijska biomedicina
Leban, Marta, farmacevtka
Nedavni klinični uspehi tehnologije mRNA pri obvladovanju pandemije covid-19 so sprožili številne inovacije v proizvodnih in analitskih tehnologijah za tovrstno terapevtsko obliko. mRNA nastane pri ...encimski transkripciji plazmidne DNA s pomočjo polimeraze, v procesu brez celic, imenovanem in vitro transkripcija. Po transkripciji se plazmidna DNA obravnava kot nečistoča, ki nastane med procesom, in jo je potrebno odstraniti. Za ta namen se uporabljajo različni pristopi, kot je encimska razgradnja z deoksiribonukleazami, kromatografska ločba ali obarjalne tehnike. Trenutne regulativne zahteve so 10 ng rezidualne DNA na en odmerek – ta se giblje med 30 in 100 µg mRNA. Morebitno rezidualno plazmidno DNA v mRNA vzorcih je potrebno spremljati s primerno analitsko tehniko. Trenutna metoda za kvantifikacijo rezidualne DNA je kvantitativna verižna reakcija s polimerazo, ki je precej draga, zahteva poznavanje plazmidnega zaporedja in jo je relativno težko interpretirati. Glede na predstavljeno problematiko je osrednja tematika magistrske naloge razvoj metode HPLC, ki je bolj enostavna, dovolj selektivna, točna, natančna in občutljiva (10 ng rezidualne plazmidne DNA), da zadostuje regulativnim zahtevam. Rezultate smo vzporedno primerjali tako z zgoraj omenjeno metodo kot tudi z agarozno gelsko elektroforezo, ki je sicer metoda izbire za preverjanje prisotnosti in celovitosti nukleinskih kislin. Poleg razvoja metode pa smo optimizirali tudi pripravo vzorcev z uporabo čim manjše količine encima RNaseA (0,4 ng/µg mRNA) in čim krajšim časom inkubacije (0,5 h). Pridobljeni rezultati kažejo na uspešen razvoj metode, saj se vsebnost rezidualne plazmidne DNA v analiziranih mRNA vzorcih sklada po vseh izbranih metodah.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [M. Leban], 2023
Knjižnica mlab 0000000543 LEBAN MARTA Razvoj 0000000346 IN: 0017836
Knjižnica mlab 543 LEBAN MARTA Razvoj 346 IN: 0017836
available - reading room
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
