Iskanje selektivnih inhibitorjev trombina in pankreasne lipaze s pomočjo peptitdnopredstavitvene bakterijske knjižnice in izolacija inhibitorjev trombina iz izbranih vrst bazidiomicet = Searching for selective inhibitors of thrombin and pancreatic lipase with bacterial random peptide display library and isolation of thrombin inhibitors from selected basidiomycetes : doktorska disertacija
Doljak, Bojan
V razvitem svetu predstavljajo bolezni srca in ozilja glavnino zdravstvenih tezav in so tudi eden najpogostejsih vzrokov smrti. Med dejavnike tveganja za nastanek srèno-zilnih bolezni spadajo tudi ...motnje v strjevanju krvi in prekomerna telesna masa. Trombin ima kot serinska proteaza pri tem kljuèno vlogo, saj sodeluje pri procesih strjevanja krvi in razvoju tromboze. Pankreasna lipaza pa je najpomembnejsi encim pri razgradnji zauzitih trigliceridov v tankem èrevesu. Zaradi omenjenih vlog predstavljata encima primerni prijemalisèi za inhibicijo. Razvoj nizkomolekularnih inhibitorjev trombina je zaradi pogostosti srèno-zilnih bolezni postalo pomembno podroèje farmacevtskih raziskav. Prav tako se inhibitorji pankreasne lipaze v novejsem èasu veliko uporabljajo pri terapiji debelosti. S selektivnim inhibitorjem trombina in pankreasne lipaze bi lahko tako preventivno kot terapevtsko prepreèevali omenjene zdravstvene zaplete. K iskanju inhibitorjev smo izbrali dva pristopač klasiènega - iskanje v naravnih virih in sodobnega - uporabo peptidnopredstavitvene bakterijske knjiznice FliTrx.S pomoèjo spektrofotometriène amidolitiène metode s kromogenimi substratoma S-2238 (za trombin) in BAPNA (za tripsin) ter hidrolitiène metode s kromogenim substratomPNP (za pankreasno lipazo) smo izvedli resetanje (screening) metanolno vodnih, metanolnih in diklorometanskih izvleèkov izbranih vrst bazidiomicet in nekaterih rastlin. Glive so farmakolosko gledano relativno neraziskano in zato obetavno podroèje za iskanje novih uèinkovin. Na osnovi rezultatov resetanja lesnih gliv in selektivne inhibitorne aktivnosti na trombin razvili metodo izolacije uèinkovine s pomoèjo stolpène in tankoplastnekromatografije iz dlakave slojevke (Stereum hirsutum) in diseèe tramovke (Gloeophyllum odoratum). Pri obeh bazidiomicetah nam je uspelo izolirati aktivno frakcijo, doloèitev kemijske strukture je v teku. Pri resetanju lesnih gliv na trombin in tripsin so izmed 97 izvleèkov izkazali najveèjo inhibitorno aktivnost metanolni izvleèki Poria monticola, Laetiporus sulphureus, Antrodia vaillantii in Serpula lacrymans (prve tri spadajo v druzino Coriolaceae). Izvleèki omenjenih gliv izkazujejo vsaj 90 % inhibitornoaktivnost trombina, medtem ko je inhibitorna aktivnost na tripsin 20 %.Peptidno predstavitvena bakterijska knjiznica FliTrx omogoèa nov pristop k spoznavanju interakcij med proteini. Razliène kombinacije dodekapeptidov (1.7x108) so predstavljene na povrsini bakterijske celice tako, da so vgrajenev disulfidno zanko tioredoksina, ki je vstavljen v flagelin, glavni strukturni protein bakterijskih bièkov. Kot tarèna proteina za proces biopanning-a smo uporabili humani trombin in prasièjo pankreasno lipazo. Najprej smo optimizirali pritrditev tarènih molekul na povrsino mikrotitrskih plosèic. Nato smo v selekcijskem procesu, sestavljenim iz petih ciklov inkubacije peptidne knjiznice z imobiliziranima tarènima proteinoma in sledeèim izpiranjem nevezanih celic, selekcionirali tiste bakterijske klone, katerih peptidi so se najmoèneje vezali na tarèna proteina. Iz posameznih klonov smo izolirali plazmidno DNA s kodirajoèim zapisom za izrazeni dodekapeptid in doloèili nukleotidno zaporedje tega fragmenta. Na osnovi aminokislinskih zaporedij smo raèunsko izselekcionirali pentapeptidne motive, ki teoretièno izkazujejo najveèjo afiniteto do omenjenih dveh encimov. Izselekcionirani pentapeptidi lahko predstavljajo spojine vodnice v naèrtovanju peptidomimetiènih zaviralcev trombina in pankreasne lipaze.
Type of material - dissertation
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [B. Doljak], 2002
GS II 0000548377 glavno skladišče
GS II 548377 glavno skladišče
available - reading room
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
Naročanje gradiva za izposojo v čitalnice
Naročanje kopij člankov
Urnik dostave gradiva z oznako DS v signaturi