VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
13.
Optimizacija reakcije transkripcije in vitro s programom za načrtovanje eksperimentov = Optimization of in vitro transcription reaction with design of experiments : enoviti magistrski študijski program Farmacija : Uniform Master's Study Programme Pharmacy
Marušič, Tjaša, 1998-
Razvoj mRNA-cepiv med pandemijo SARS-Cov-2 je povzročil pravo revolucijo v medicini, pri čemer so se odprle neštete možnosti za različne terapevtske aplikacije molekule mRNA. Za učinkovito in poceni ...proizvodnjo čiste mRNA je ključnega pomena razumevanje procesnih parametrov transkripcije in vitro (IVT), reakcije, s katero pridobivamo terapevtsko mRNA. Med potekom reakcije poleg tarčne mRNA nastanejo tudi neželeni produkti, najbolj problematična je imunogena dvoverižna RNA (dsRNA). Nastanek le-te je odvisen od nukleotidnega zaporedja mRNA, vpliv pa imajo lahko tudi parametri reakcije IVT. S programom za načrtovanje eksperimentov MODDE smo za genski konstrukt eGFP (tj. gen za zeleni fluorescenčni protein) ustvarili model reakcije IVT. Spreminjali smo množinsko razmerje med Mg2+ in nukleotid trifosfati (NTP), koncentracijo NTP, matrične DNA in RNA-polimeraze T7 (RNAP). Koncentracijo nastale mRNA in porabo NTP smo spremljali s HPLC analitiko, vsebnost dsRNA v končnem produktu RNA pa z metodo točkovnega nanosa. Želeli smo raziskati, pri katerih pogojih bodo produkcija mRNA, izkoristek reakcije in stroškovna učinkovitost čim višji, vsebnost imunogene dsRNA pa čim nižja. Za ovrednotenje modela smo si pomagali s statistično analizo, ki nam jo omogoča program, in na podlagi rezultatov analize model izboljšali z dodatnimi eksperimenti. Rezultati so se izboljšanemu modelu dobro prilegali, poleg tega je imel model visoko napovedno moč, kar pomeni, da modelu lahko zaupamo in z njim napovemo nove rezultate. Pokazali smo, da za visoko produkcijo mRNA potrebujemo množinsko razmerje med Mg2+ in NTP okrog 1, visoke koncentracije plazmida in RNAP, tako prenizke kot previsoke koncentracije NTP pa produkcijo mRNA nižajo. Pokazali smo tudi, da višja produkcija mRNA ne pomeni nujno tudi dobre stroškovne učinkovitosti. Nadalje smo ugotovili, da višje množinsko razmerje med Mg2+ in NTP vodi v večjo vsebnost dsRNA v vzorcu, visoke koncentracije NTP pa jo znižajo. S tem smo pokazali, da se visoka produktivnost reakcije in nizka vsebnost dsRNA ne izključujeta. Optimalno šaržno reakcijo je model predvidel pri pogojih, ko množinsko razmerje med Mg2+ in NTP znaša 0,9, koncentracija NTP 10,4 mM, koncentracija plazmida 100 ng/μL in koncentracija RNAP 8,1 U/μL. V 90 min smo proizvedli 10 mg/mL mRNA z nizko vsebnostjo dsRNA in tako eksperimentalno pokazali, da se dobljeni rezultati ujemajo s predvidenimi. S pomočjo ugotovitev, ki smo jih pridobili na podlagi modela, smo nazadnje naredili načrt in izvedli reakcijo z dohranjevanjem ter tako še povečali produktivnost in stroškovno učinkovitost reakcije.
Vrsta gradiva - magistrsko delo
; neleposlovje za odrasle
Založništvo in izdelava - Ljubljana : [T. Valič], 2023
Bibliografsko gradivo je bilo uspešno dodano na polico.
Dodajanje bibliografskega gradiva na polico ni uspelo.
Gradivo je že na polici.
Trajna povezava
URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto
Faktor vpliva
Izdaja
Kategorija
Razvrstitev
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Izberite knjižnično izkaznico:
Baze podatkov,
v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov
Področje
Leto
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev
Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Citiranje
Funkcionalnost trenutno ni na voljo. Prosimo, poskusite kasneje.
