Razvijena je multirezidualna metoda za određivanje 25 pesticida u vinima plinskom kromatografijom vezanom sa spektrometrijom masa. Optimirana je ekstrakcija na čvrstoj fazi uz sorbens OASIS HLB te ...postupak ekstrakcije QuEChERS s težištem na optimizaciji koncentracije dodanih soli radi podešavanja raspodjele analita između dviju faza. Za svaki postupak priprave uzorka provedena je validacija za crno i bijelo vino kao dvije zasebne matrice uzorka. Granice određivanja pesticida za oba postupka bile su u rasponu od 0,01 g L1 do 250 g L-1. Preciznost, izražena kao relativna standardna devijacija, bila je <20 %, dok je točnost, izražena kao analitički povrat, za većinu pesticida bila u rasponu od 70 % do 120 %. Ispitan je utjecaj matrice na određivanje pesticida pri čemu je izračunata djelotvornost postupaka priprave uzorka. U okviru validacije metoda procijenjena je mjerna nesigurnost koja je bila <50 % za većinu pesticida. Predloženim analitičkim postupcima analizirana su 63 uzorka različitih vina da bi se dobio prvi uvid u koncentracije ostataka pesticida u vinima s područja Hrvatske.
A new multiresidue method was developed for determination of 25 pesticides in wines by gas chromatography mass spectrometry. Two sample preparation procedures were optimized; solid phase extraction using OASIS HLB and QuEChERS procedure, where salt concentrations were optimised in order to adjust the distribution of pesticides between two immiscible phases. Method validation, including uncertainty estimation (<50 % for most pesticides), was performed independently for red and white wine as two different matrices and for each sample preparation procedure. Limits of quantification were between 0,01 g L-1 and 250 g L-1. The recoveries of most pesticides were between 70 % and 120 % with relative standard deviations <20 %. The matrix effect was investigated and the quality of sample preparation procedures has been evaluated in terms of extraction efficiency. The proposed analytical procedures were applied to 63 Croatian wine samples of different varieties in order to provide the first insight into pesticide residue concentrations in Croatian wines.
U ovom je radu predstavljena metoda određivanja šest ergot alkaloida i njihovih izomera pomoću tekućinske kromatografije i spektrometrije masa s ionskom stupicom. Uzorci su pročišćeni ekstrakcijom ...čvrstom fazom na kolonama punjenim aluminijevim oksidom. Ovisno o vrsti analita i volumenu standarda, određeni su sljedeći parametri: iskorištenje metode od 63,0 do 104,6 %; relativna standardna devijacija manja od 18 %; linearni raspon od 1 do 325 μg/kg te koeficijent linearne korelacije veći od 0,98. Metoda je primijenjena za određivanje udjela ergot alkaloida u 65 uzoraka proizvoda od raži (34 uzorka brašna, 12 uzoraka mekinja, 18 uzoraka raži i 1 uzorak pahuljica). U većini su uzoraka, a osobito u raženom brašnu, pronađene mjerljive količine alkaloida. Osim toga, prisutnost je alkaloida utvrđena i u sklerociju ergota izoliranom iz zrna raži. Njihov je ukupan udjel iznosio gotovo 0,01 % (97,9 mg/kg). Najviše je pronađeno ergokristina (45,6 %, odnosno 44,7 mg/kg), koji nije čest sastojak prehrambenih proizvoda, a najmanje ergokorninina (0,2 %, tj. 0,2 mg/kg).
Optimirana su dva reakcijska protokola za sintezu 3,4-dihidropirimidinonskih spojeva (3,4-DHPM) temeljena na primjeni aluminijevog(III) tetrafluorborata heksahidrata i bakrovog(II) besilata ...tetrahidrata. Neovisno o karakteristikama reaktanata, postignuta su vrlo dobra reakcijska iskorištenja. Utvrđeno je kako se reakcija katalizirana s Al(H2O)6(BF4)3 odvija preko takozvanog ureido-krotonata, dok mehanizam reakcije katalizirane s Cu(C6H5SO3)2×4H2O uključuje nastajanje N-aciliminijevog iona. Enantioselektivnom kromatografskom analizom 3,4-DHPM spojeva na polisaharidnim kiralnim nepokretnim fazama (KNF), uz pokretne faze različitih polarnosti, najbolja odjeljivanja postignuta su na 3,5-dimetilfenilkarbamoil amiloznoj KNF te je određen različit mehanizam kiralnog prepoznavanja uz etanol ili propan-2-ol kao modifikatore. Uz etanol kao modifikator kiralnom prepoznavanju doprinosi para-supstitucija arilnog prstena 3,4-DHPM-a, neovisno da li je riječ o elektron odvlačećoj ili elektron donirajućoj skupini, vodikova veza između NH skupine u DHPM prstenu i C=O skupine na KNF te vodikova veza između C=O skupine DHPM prstena i NH skupine na KNF. - interakcije analita i KNF su ključni mehanizam zadržavanja samo za drugoizlazeće enantiomere. Uz propan-2-ol utvrđeno je kako se najbolje kiralno prepoznavanje postiže za para-metoksi supstituirani 3,4-DHPM te da je vodikova veza u kojoj sudjeluje NH skupina DHPM prstena slabija od one u kojoj sudjeluje C=O skupina. S propan-2-olom - interakcije analita i KNF ne doprinose kiralnom prepoznavanju.
Abstract Two reaction protocols based on use of hexaaquaaluminium(III) tetrafluoroborate and copper(II) benzensulphonate tetrahydrate are optimized for synthesis of 3,4-dihydropyrimidinone (3,4-DHPM). Regardless the characteristics of reactants, high yields were achieved. While reaction catalyzed by Al(H2O)6(BF4)3 includes formation of ureido-crotonate, reaction catalyzed by Cu(C6H5SO3)2×4H2O includes formation of acylimino intermediate. According to results obtained by enantioselective chromatographic analysis of 3,4-DHPM compounds on different polysaccharide chiral stationary phases (CSPs), the best resolutions are achieved using 3,5-dimethylphenyl carbamoyl amylose CSPs. Also, different mechanism of chiral recognition is established while using ethanol or propan-2-ol as modifier. With ethanol as modifier, chiral recognition is contributed by para-substitution of aryl ring of 3,4-DHPM, with both electron-withdrawing and electron-donating substituents, by hydrogen bond between NH group of DHPM ring and C=O group of CSP and by hydrogen bond between C=O group of DHPM ring and NH group of CSP. - interactions of analyte and CSP play significant role in retention mechanism of second elution enantiomers. With propan-2-ol, the best chiral recognitions are achieved for para-methoxy substituted 3,4-DHPM. In case of this modifier, hydrogen bond which involves NH group of DHPM ring is weaker than one that includes C=O group. With propan-2-ol - interactions of analyte and CSP do not contribute to chiral recognition.
Pripravljeno je dvadeset i pet modelnih β-aminoalkohola (β-aa) podijeljenih u tri skupine sobzirom na način sinteze. Prva skupina spojeva sintetizirana je katalitičkom amonolizom racemičnih derivata ...stiren-oksida (43a-50a), druga skupina amonolizom glicidil-fenil-etera (57-65), a treća amonolizom simetričnih meso-epoksida (71-78). Sintetizirani spojevi suracemične smjese R- i S-enantiomera. Razvijene su enantioselektivne tekućinsko kromatografske metode za njihovo odjeljivanje na četiri „kiralne kolone“, uz detekciju spojeva UV-detektorom s nizom fotodioda. Za svaku kombinaciju sastava pokretne faze i polisaharidne kiralne nepokretne faze razmatrani su enantio-kromatografski pokazatelji (k1, α, Rs). Za potvrdu redoslijeda ispiranja enantiomera (R- ili S-) s kolone, pripravljeni su enantiomerno čisti predstavnici triju skupina β-aa. Na temelju rezultata enantioselektivne analize predloženi su mogući mehanizmi kiralnog prepoznavanja modelnih β-aa. Primjenjivost razvijenih metoda potvrđena je odjeljivanjem enantiomera četiriju kardiovaskularnih lijekova čija je djelatna tvar po sastavu β-aa: atenolola, sotalola, bisoprolola i karvedilola. Kolona Chiralcel OD pokazala se učinkovitom za odvajanje enantiomera kako modelnih β-aa tako i kardiovaskularnih lijekova.
Synthesis of twenty five model β-amino alcohols (β-aa) is described. Based on the synthetic approach applied for preparation, three classes of β-aa are identified: the first class is made by catalytic amonolysis of racemic derivatives of styrene oxide (43a-50a), the second by amonolysis of ethyl glycidyl ether (57-65) and the third by amonolysis of symmetric mesoepoxides(71-78). Prepared compounds were racemic mixtures of R- and S- enantiomers and efficient analytical methods for enantioseparation were developed using “chiral columns” connected with high performance liquid chromatograph and UV diode-array detector. For each combination of mobile phase composition and polysaccharide-based stationary phase, enantio-chromatographic parameters were studied (k1, Rs, α). For confirmation of enantiomerelution order (R- or S-) from the column, enantioenriched representative compounds were synthetized. Based on the enantioselective chromatography results mechanisms of chiral recognition of β-aa were proposed. Applicability of developed enantioselective methods was confirmed on four cardiovascular drugs with β-aa moiety: atenolol, sotalol, bisoprolol, carvedilol. It was found that the best enantioseparation of model β-amino alcohols and tested cardiovascular drugs was obtained with Chiralcel OD column.
Aromatično bilje sadrži prirodne antioksidanse poput fenolnih spojeva koji su zbog pozitivnog utjecaja na zdravlje privukli pozornost javnosti i znanstvenika. Istražen je fenolni sastav pet vrsta ...biljaka: končare (Filipendula ulmaria), bijeloga gloga (Crataegus monogyna), troskota (Polygonum aviculare), petoprsta (Potentilla anserina) i purpurne iglice (Pelargonium purpureum). Za određivanje koncentracije i sastava fenolnih spojeva upotrijebljena je visokodjelotvorna tekućinska kromatografija obrnutih faza, a za određivanje sastava fenolnih spojeva, nakon supstitucije vodikova atoma sa -SiMe3 skupinom, primijenjena je plinska kromatografija u kombinaciji s masenom spektrometrijom, kojom je utvrđeno da je došlo do konverzije iz nehlapljivih derivata u hlapljive derivate i iz termolabilnih derivata u termotolerantne derivate. Da bi se dobili derivati željenih svojstava, optimirani su koncentracija reagensa, temperatura i vrijeme reakcije. Primjenom Rancimat metode (kao supstrat je upotrijebljeno suncokretovo ulje) dokazana su antioksidativna svojstva sušenog bilja i ekstrakta dobivenog s metanolom. Primjenom Folin-Ciocalteau metode spektrofotometrijski je određen ukupni udjel fenola u ekstraktima, koji je iznosio 7,2-28,2 mg/mL (izraženo kao galna kiselina). Antimikrobna aktivnost ekstrakata dokazana je disk-difuzijskom metodom, pri čemu je ustanovljeno da su ekstrakti više utjecali na rast Gram-(+) bakterija nego na rast Gram-(-) bakterija.
U cilju ujednačavanja kriterija kod identifikacije plinskih ulja i sprječavanju njihovog nenamjenskog korištenja, u zemljama EU plinska ulja označavaju se indikatorom -Euromarkerom. To je fiskalni ...marker definiran Europskom direktivom (2006/428/EC) za plinska ulja i kerozin 1. Referentna metoda za indikator u Europskoj uniji je HPLC metoda dok je u RH važećim zakonskim aktima propisana HRN 1110 (UV/Vis spektrofotometrija) te spomenuti indikator 2. U radu su na temelju ispitanih parametara validacije UV/Vis spektrofotometrijske metode i kromatografske metode (HPLC) 3 opisane njihove prednosti i nedostaci.
Kvantitativni podatak o sadržaju aromatskih ugljikovodika važan je za razumijevanje utjecaja pojedinog tehnološkog procesa u preradi nafte na proizvodnju različitih komercijalnih tekućih naftnih ...goriva, a poznavanjem sastava aromata moguće je predvidjeti kvalitetu i ekološku prihvatljivost određenog naftnog proizvoda. Naftaleni su di-aromatska skupina ugljikovodika koja, za razliku od mono-aromata, jako doprinosi dimljenju i čađenju goriva za mlazne motore te se stoga njihov sadržaj redovito prati.
U radu je prikazano poboljšanje postojećeg postupka ispitivanja naftalena u gorivima za mlazne motore suvremenom standardnom analitičkom tehnikom. Izvedeno je usporedno ispitivanje sadržaja naftalena u uzorcima goriva UV spektrofotometrijom koju propisuje INA norma i tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti (HPLC) te su izračunati testovi signifikantnosti. Eksperimentalnim i računskim ispitivanjima ustanovljeno je da su dobiveni rezultati usporedivi.
U radu je opisana priprava poroznih nanočestica metoprolol tartarata pomoću sušenja sprejanjem, koristeći amonijev karbonat za stvaranje pora. Da bi se spriječilo oslobađanje metoprolol tartarata u ...gornjem dijelu GI trakta, nanočestice su obložene polimerom Eudragit S100. Nanočestice podjednake veličine mogu se dobiti polaganim uklapanjem ljekovite tvari. Mikromeričke studije potvrdile su da su nanočestice zasebne i tečne. Proučavan je utjecaj sredstva za stvaranje pora na količinu uklopljenog lijeka, poroznost i in vitro oslobađanje. Povećanje količine sredstva za stvaranje pora povećava količinu uklopljenog lijeka, poroznost i brzinu oslobađanja ljekovite tvari. Oslobađanje metoprolola slijedi kinetiku nultog reda.
Kloramfenikol je jedan od antibiotika sa širokim spektrom djelovanja. Zbog toksičnih svojstava zabranjena je njegova primjena u Hrvatskoj i u Europskoj uniji u prehrambenim namirnicama.
Ekstrakcija ...uzorka i čišćenje temeljeni su na modificiranoj AOAC-ovoj metodi 993.32. Tijekom HPLC-MS-analize uporabljena je kolona ODS Hypersile s gradijentnim programom kombinacije acetonitrila u vodi. Primijenjena je negativna ionizacija elektroraspršivanjem (neg ESI) molekula kloramfenikola i nakon toga praćenje tri odabrane karakteristične mase iona m/z 321, 323 i 325 radi detekcije, identifikacije i kvantifikacija analita.
Također, kao dodatni kriterij ispitan je i uspoređen odnos intenziteta te tri odabrane veličine u realnim uzorcima i u uzorku mlijeka nacijepljenog s kloramfenikolom prema teorijskoj vrijednosti karakterističnoj za prirodnu raspodjelu izotopa kada su dva atoma klora adicijski vezani u molekuli analita.
Postignuta je granica detekcije 0,1 µg kg-1- kloramfenikola u mlijeku. Srednja vrijednost iskorištenja bila je 94 %, a koeficijent korelacije kalibracijskih krivulja pri dvije m/z bio je veći od 0,99.
Ovom metodom analizirano je oko 40 uzoraka mlijeka i mliječnih proizvoda pri čemu su samo tri uzorka bila pozitivna s vrijednostima kloramfenikola 0,37, 0,29, 0,39 µg kg--1- mlijeka, dok su u ostalim uzorcima količine kloramfenikola bile ispod granice detekcije.
Sažetak Upalna bolest crijeva je kroniĉni upalni poremećaj gastrointestinalnog trakta za koji se smatra da je rezultat meĊudjelovanja genskih i okolišnih ĉimbenika. Genetiĉka israţivanja su pokazala ...da postoji povezanost gena koji sudjeluju u regulaciji glikozilacije IgG-a i upalne bolesti crijeva. N-glikozilacija IgG-a utjeĉe na njegovu strukturu i imunološku funkciju. U ovoj disertaciji analizirana je N-glikozilacija IgG-a kod 804 pacijenta s upalnom bolesti crijeva i zdravih ispitanika, što je dosad najveće istraţivanje glikana u upalnoj bolesti crijeva. Pokazano je da su galaktozilirane glikoforme IgG-a statistiĉki znaĉajno manje zastupljene kod pacijenata koji boluju od Crohnove bolesti i ulceroznog kolitisa u odnosu na zdrave ispitanike. Monosijalinizirane glikoforme su statistiĉki znaĉajno manje zastupljene kod pacijenata koji boluju od Crohnove bolesti. Uoĉena je veća zastupljenost glikoformi s raĉvajućim GlcNAc-om u upalnoj bolesti crijeva u odnosu na zdrave ispitanike. IgG ima potencijal kao dijagnostiĉki i prognostiĉki biomarker za upalnu bolest crijeva. Tijekom studije evaluirana je metoda HILIC-UPLC, te je razvijena, optimirana i validirana nova visoko-protoĉna metoda priprave N-glikana za analizu tekućinskom kromatografijom. Poboljšanje metodologije će omogućiti toĉniju i informativniju analizu N-vezanih glikana u budućnosti.
Inflammatory bowel disease is chronic inflammatory disorder of the gastrointestinal tract which is considered to be the result of the interaction of genetic and environmental factors. Genetic studies have shown pleiotropy between IgG glycosylation and inflammatory bowel disease. IgG N-glycosylation affects its structure and immune function. IgG N-glycosylation in 804 inflammatory bowel disease patients and healthy controls was analyzed within this dissertation, which makes it the largest study of glycans in inflammatory bowel disease. The results demonstrated statistically significant decrease in IgG galactosylation in Crohn's disease and ulcerative colitis compared to healthy controls, as well as statistically significant decrease in IgG monosialylation in Crohns disease. Increase in proportion of structures with bisecting GlcNAc was observed in inflammatory bowel disease patients compared to healthy controls. Therefore, IgG has a potential as diagnostic and prognostic biomarker for inflammatory bowel disease. Within this dissertation HILIC-UPLC method was validated, and new high-throughput preparation method for N-glycan analysis by liquid chromatography was developed, optimized, and validated. Improved methodology will enable more accurate and informative N-glycan analysis in the future.
PDF
