Background: Identification, quantification and typing of MProteins (MP) play an important role in the diagnosis, classification and monitoring of monoclonal gammopathies both of malignant origin (eg. ...Multiple Myeloma) and of unknown origin. Previous evidence attests that MGUS (Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance) detected by agarose gel electrophoresis has a prevalence of 3.2% in the general population. Therefore, our study aimed to verify this data by means of capillary zone electrophoresis (CZE).
Methods: CZE was performed to evaluate the prevalence of M-Protein (MP) in 44.474 consecutive outpatients of all ages with a prescription for serum protein electrophoresis over a 2-year period (2008 and 2009). All MPs that were identified were then typed by immunofixation electro pho - resis on agarose gel (IFE).
Results: In subjects aged over 50 (23.408, i.e., 52.6% of the whole cohort) MP ≤30 g/L (MGUS) was identified in 6.0% of cases, with a frequency nearly double than that previously reported. The population was then divided into ten-year age groups: the 71-80 age group had the highest percentage of MP (29%), followed by 61-70 (27%), 51-60 (18%), 81-90 (12%), 41-50 (8%), 31-40 (3%), >90 (2%) and <30 (1%). The frequency of MP types (IFE) was the same in each age group, with IgG Kappa being the most represented class.
Conclusions: According to the high MGUS prevalence observed in this study, these results may be useful especially for general practitioners, because the identification even of small MP (analytical sensitivity: 0.5 g/L) may help optimize clinical management.
Uvod: Identifikacija, kvantifikacija i tipizacija M-proteina (MP) imaju važnu ulogu u dijagnostikovanju, klasifikovanju i praćenju monoklonskih gamapatija kako malignog (npr. multipli mijelom) tako i nepoznatog porekla. Prethodni dokazi pokazuju da monoklonska gamapatija neodređenog značaja (MGNZ) koja se otkriva elektroforezom na agaroznom gelu ima prevalenciju od 3,2% u opštoj (populaciji. Stoga je cilj ove studije bio da verifikuje navedene podatke putem elektroforeze kapilarne zone.
Metode: Kapilarna elektroforeza je izvršena da bi se utvrdi- la prevalencija M-proteina (MP) kod 44.474 uzastopnih kliničkih pacijenata svih uzrasta kod kojih je u toku dve godine (2008. i 2009) prepisana elektroforeza proteina u serumu. Identifikovani su svi MP a zatim tipizirani imunofiksacionom elektroforezom na agaroznom gelu.
Rezultati: Kod ispitanika sfarijih od 50 godina (23.408, tj. 52,6% ukupnog broja) MP <30 g/L (MGNZ) idenfifikovan je u 6,0% slučajeva, sa gotovo dva puta većom učestalošću nego što je prethodno procenjeno. Populacija je zatim podeljena na starosne grupe raspona po deset godina: grupa 71-80 imala je najved procenat MP (29%), a slede grupe 61-70 (27%), 51-60 (18%), 81-90 (12%), 41-50 (8%), 31-40 (3%), > 90 (2%) i < 30 (1%). Učestalost tipova MP (imunofiksaciona elektroforeza na agaroznom gelu) bila je isfa u svim starosnim grupama, dok je najzastupljenija klasa bila IgG Kappa.
Zakljiučak: Na osnovu velike uo~ene prevalencije MGNZ, zaključujemo da ovi rezultati mogu biti naročito korisni za lekare op{te prakse, po{to identifikacija čak i malih MP (analitička osetljivost: 0,5 g/L) može doprineti optimizaciji kliničkog menad`menta.
Proteome analysis has emerged as a powerful tool to decipher (patho) physiological processes, resulting in the establishment of the field of clinical proteomics. One of the main goals is to discover ...biomarkers for diseases from tissues and body fluids. Due to the enormous complexity of the proteome, a separation step is required for mass spectrometry (MS)-based proteome analysis. In this review, the advantages and limitations of protein separation by two-dimensional gel electrophoresis, liquid chromatography, surface-enhanced laser desorption/ionization and capillary electrophoresis (CE) for proteomic analysis are described, focusing on CE-MS. CE-MS enables separation and detection of the small molecular weight proteome in biological fluids with high reproducibility and accuracy in one single processing step and in a short time. As sensitive and specific single biomarkers generally may not exist, a strategy to overcome this diagnostic void is shifting from single analyte detection to simultaneous analysis of multiple analytes that together form a disease-specific pattern. Such approaches, however, are accompanied with additional challenges, which we will outline in this review. Besides the choice of adequate technological platforms, a high level of standardization of proteomic measurements and data processing is also necessary to establish proteomic profiling. In this regard, demands concerning study design, choice of specimens, sample preparation, proteomic data mining, and clinical evaluation should be considered before performing a proteomic study.
Analiza proteoma je postala je moćno sredstvo za dešifrovanje (pato)fizioloških procesa, što je za rezultat imalo uspostavljanje oblasti kliničke proteomike. Jedan od glavnih ciljeva je otkrivanje biomarkera oboljenja iz tkiva i telesnih tečnosti. Zbog ogromne složenosti proteoma, pri proteomskoj analizi zasnovanoj na masenoj spektrometriji potrebno je izvršiti separaciju. U radu su opisane prednosti i ograničenja proteomske analize pri separaciji proteina putem dvodimenzionalne gel elektroforeze, tečne hromatografije, SELDI i kapilarne elektroforeze (KE), sa fokusom na KE-MS. KE-MS omogućava separaciju i detekciju proteoma male molekularne težine u biološkim tečnostima uz visoku reproducibilnost i preciznost u samo jednom koraku radnog postupka i za kratko vreme. Pošto pojedinačni senzitivni i specifični biomarkeri možda i ne postoje, strategija za premošćivanje te dijagnostičke praznine pomera se sa detekcije pojedinačnog analita na simultanu analizu više analita koji zajedno čine obrazac specifičan za dato oboljenje. Takvi pristupi, međutim, nose sa sobom dodatne izazove, koje ćemo predstaviti u ovom radu. Pored izbora odgovarajućih tehnoloških platformi, neophodan je visok nivo standardizacije proteomskih merenja i obrade podataka kako bi se vršilo profilisanje proteoma. U tom pogledu, zahtevi koji se tiču nacrta studija, izbora primeraka uzoraka, analize proteomskih podataka i kliničke evaluacije trebalo bi da budu razmotreni pre izvođenja proteomske studije.
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- Earlier pharmacological studies allowed characterization of the three main
imidazoline receptors classes: I1-, I2- and I3-IR. ...Activation of both
I1-imidazoline receptors and α2-adrenergic receptors (α2-AR) is
responsible for central sympathoinhibitory action and lowering of the blood
pressure. Compounds such as moxonidine and rilmenidine are more selective
for I1-imidazoline receptors and have produced less side effects than
clonidine and other nonselective imidazoline receptors ligands. In the
framework of this doctoral dissertation, quantitative structure
activity/selectivity relationships of imidazoline and α2-adrenergic
receptors ligands, as well as quantitative structure retention/mobility
relationships of these compounds in the reversed-phase high performance
liquid chromatography (RP-HPLC) and in capillary electrophoresis (CE) were
performed. Appropriate mathematical models able to predict biological
activity and retention/mobility of newly synthesized compounds, potential
ligands of imidazoline and α2-adrenergic receptors were developed. QSAR
(Quantitative Structure Activity Relationship) analysis was used to define
molecular parameters responsible for a high I1-receptors binding affinity
and high I1/α2-selectivity. The theoretical approach indicates that an
increase in lipophilicity (logD7,4) and molar refractivity together with a
decrease in an average N-charge in the heterocyclic moiety are responsible
for a better binding affinity of an active site in the I1-receptors, whereas
lipophilicity (logP) and HOMO energy are the important descriptors of the
I1/α2-selectivity. Optimization of the experimental conditions for a rapid
and efficient separation of 11 imidazoline and α2-adrenergic receptors
ligands was performed by capillary electrophoresis. An influence of the
buffer pH and concentration, temperature, voltage and various concentrations
of α-, β- and γ-cyclodextrins (CD) on the electrophoretic mobility and
resolution of compounds in the mixture has been examined. At the beginning
of this theoretical study and in order to generate information about
interactions occurring between analytes and cyclodextrins in the given CE
systems, complexation of ligands with α-, β-, and γ-CD was examined by a
semi-empirical PM3 method. Linear and nonlinear methodologies have been
applied to building the QSMR (Quantitative Structure Mobility Relationship)
models, with an aim to define quantitative relationships between the
chemical structure and the electrophoretic mobility of the investigated
compounds in the presence of α-, β- and γ-cyclodextrin. Optimal QSMR models
revealed an important role of the ligand-CD complex descriptors in
predicting the migration behavior of the analyzed compounds in the given CE
systems. At an initial step of the development of the CE method, the
proposed multi-target QSMR model can be used as a fast screening model for
an assessment of the migration time of the related antihypertensives in the
presence of three different cyclodextrins, and for selection of the best
cyclodextrin for the separation of the analyzed compounds. An impact of the
ionization degree (under the acidic, neutral and basic conditions) of
imidazoline and a-adrenergic receptors ligands on the retention in the
reversed-phase liquid chromatography and on mobility in capillary
electrophoresis has been examined. The most significant molecular
descriptors in the selected QSRR {Quantitative Structure Retention
Relationship) models pointed out that an important knowledge concerning the
retention behaviour can be derived from the 0D-, 1D- and 2D-descriptors,
which provide an information about chemical composition of the compounds,
their molecular properties (lipophilicity), and molecular branching. On the
other hand, a reliable prediction of electrophoretic mobility can be
performed by calculating the appropriate 2D- and 3D-descriptors, which
provide an information on molecular size and complexity, and also on the
influence of the charge transfer and the electronic properties on the
migration behaviour. Correlations between the retention parameters obtained
by the RP-HPLC technique at the three different pH values (4,4; 7,4 and 9,1)
and the calculated lipophilicity parameters (logD4,4, logD7,4 and logD9,1)
were examined. The presented approach can be applied for preliminary
assessment of lipophilic properties of the related compounds. Capillary
electrophoresis was applied to determine the acid-base ionization constants
of 10 imidazoline and α2-adrenergic receptors ligands. On the basis of the
results obtained, it is possible to accurately determine the degree of drug
ionization at the different physiological and analytical pH values.- Na osnovu farmakoloških studija do danas je izvršena karakterizacija tri
osnovne klase imidazolinskih receptora: I1-, I2- i I3-IR. Aktivacija
I1-imidazolinskih i α2-adrenergičkih receptora (α2-AR) je odgovorna za
centralnu inhibiciju simpatikusa i sniženje krvnog pritiska. Jedinjenja sa
većom selektivnošću za I1-receptore, kao što su moksonidin i rilmenidin,
pokazala su manji stepen neželjenih efekata koji nastaju aktivacijom
(α2-adrenergičkih receptora. U ovoj doktorskoj disertaciji izvršeno je
ispitivanje kvantitativnih odnosa strukture, aktivnosti i selektivnosti
liganada imidazolinskih i α2-adrenergičkih receptora, kao i ispitivanje
kvantitativnih odnosa strukture i retencije/pokretljivosti ovih jedinjenja u
reverzno-faznoj tečnoj hromatografiji i kapilarnoj elektroforezi (CE).
Formirani su odgovarajući matematički modeli na osnovu kojih je moguće
izvršiti predviđanje biološke aktivnosti i retencije/pokretljivosti novih
jedinjenja, potencijalnih liganada imidazolinskih i α2-adrenergičkih
receptora. QSAR (Quantitative Structure Activity Relationship) analizom su
definisani molekulski parametri odgovorni za postizanje visokog afiniteta
vezivanja jedinjenja za I1-imidazolinske receptore kao i za postizanje
I1/α2-selektivnosti. Dobijeni rezultati su ukazali da porast lipofilnosti
(logD7,4) i molarne refraktivnosti, zajedno sa smanjenjem naelektrisanja na
atomima azota heterociklusa dovodi do snažnijeg afiniteta ka I1-IR, dok su
lipofilnost (logP) i HOMO energija važni deskriptori I1/α2-selektivnosti.
Izvršena je optimizacija eksperimentalnih uslova za brzo i efikasno
razdvajanje smeše 11 imidazolinskih i α2-adrenergičkih liganada metodom
kapilame elektroforeze. Ispitan je uticaj koncentracije i pH vrednosti
pufera, temperature, napona i različitih koncentracija α-, β- i
γ-ciklodekstrina (CD) na elektroforetsku pokretljivost i rezoluciju
jedinjenja u smeši. Na početku teorijske studije, sa ciljem da se dobiju
informacije 0 interakcijama između analita i ciklodekstrina u datim
elektroforetskim sistemima, kompleksiranje analiziranih liganada sa α-, β- i
γ-CD je ispitano semi-empirijskim PM3 metodom. Primenom linearnih i
nelinearnih statističkih metoda formirani su QSMR {Quantitative Structure
Mobility Relationship) modeli kojima su defmisani kvantitativni odnosi
između hemijske strukture i elektroforetske pokretljivosti jedinjenja u
prisustvu α-, β- i γ-CD. Formirani QSMR modeli ukazali su na važnu ulogu
deskriptora ligand-ciklodekstrin kompleksa u predviđanju migracionog
ponašanja ispitivanih jedinjenja u datom elektroforetskom sistemu. Predložen
je i multi-target QSMR model koji može biti korišćen u inicijalnoj fazi
razvoja metode kao brz screening model za procenu migracionog vremena
srodnih antihipertenziva u prisustvu α-, β- i γ-CD i za odabir optimalnog
ciklodekstrina kojim se postiže razdvajanje analiziranih jedinjenja. Ispitan
je uticaj stepena jonizacije (kisele, neutralne i bazne sredine) liganada
imidazolinskih i α-adrenergičkih receptora na retenciju u reverzno-faznoj
tečnoj hromatografiji pod visokim pritiskom (RP-HPLC) i pokretljivost u
kapilarnoj elektroforezi. Najznačajniji molekulski deskriptori u formiranim
QSRR (Quantitative Structure Retention Relationship) modelima ukazali su da
se važni podaci o retencionom ponašanju mogu dobiti na osnovu OD-, 1D- i
2D-deskriptora koji nose informacije o hemijskom sastavu jedinjenja,
molekulskim osobinama (lipofilnosti) i račvanju molekule. Sa druge strane,
pouzdano predviđanje elektroforetske pokretljivosti može se izvršiti
računanjem odgovarajućih 2D- i 3D-deskriptora od kojih većina daje
informacije o molekulskoj veličini i kompleksnosti, kao i o uticaju
naelektrisanja i elektronskih osobina na migraciono ponašanje. Ispitana je
korelacija retencionih parametara određenih RP-HPLC metodom pri tri
različite pH vrednosti (4,4; 7,4 i 9,1) sa teorijski izračunatim parametrima
lipofilnosti (logD4,4, logD7,4 i logD9,1). Dobijeni rezultati su ukazali da se
ovaj pristup može primeniti za preliminamu procenu lipofilnih karakteristika
srodnih jedinjenja. Metodom kapilame elektroforeze određene su
kiselinsko-bazne konstante jonizacije 10 liganada imidazolinskih i
α2-adrenergičkih receptora na osnovu kojih je moguće precizno odrediti
stepen jonizacije leka pri različitim fiziološkim i analitičkim pH
vrednostima.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Pozadina ispitivanja. Sorbat i benzoat su važni konzervansi u prehrambenim proizvodima, ali mogu imati genotoksični učinak i time ugrožavati zdravlje potrošača. Stoga je svrha ovoga rada bila ...odrediti masene udjele sorbata i benzoata u brazilskim uzorcima senfa, kečapa i umaka od rajčica pomoću validirane kapilarne elektroforeze u trajanju ispod minute.
Eksperimentalni pristup. U radu je jednostavnim postupkom pripreme uzoraka i kapilarnom elektroforezom ispitana prisutnost sorbata i benzoata u gotovim umacima. Metoda je prije toga validirana u skladu s preporukama europske mreže organizacija koje se bave kemijskim analizama Eurachem, a njezina ekološka prihvatljivost ocijenjena je pomoću analitičke eko-ljestvice (tzv. Eco-Scale).
Rezultati i zaključci. Ispitane su te potvrđene prikladnost metode za analizu ispitanih uzoraka i njezina usklađenost s principima zelene kemije. Osim toga, dobiveni rezultati pokazuju da je od 30 obrađenih komercijalnih uzoraka njih šest imalo netočnu deklaraciju ili njihov sastav nije bio u skladu s europskim ili brazilskim zakonodavstvom, što potvrđuje neprestanu potrebu za procjenom kakvoće i nadzorom prehrambenih proizvoda.
Novina i znanstveni doprinos. Vrlo je malo radova dosad objavljeno na temu istraživanja konzervansa poput sorbata i benzoata u senfu, kečapu i umaku od rajčica, što naglašava značaj i doprinos dobivenih rezultata ovom području znanosti.
Provider: - Institution: University of Zagreb. Faculty of Pharmacy and Biochemistry. Department of pharmaceutical analysis. - Data provided by Europeana Collections- Kardiovaskularne bolesti su ...vodeći uzrok smrtnosti u svijetu, a jednim od glavnih rizičnih čimbenika za njihov razvoj smatra se hiperlipidemija. Postoji nekoliko skupina hipolipemika, a najvažniji su statini, jedni od najčešće propisivanih lijekova uopće. Oni djeluju kao reverzibilni kompetitivni inhibitori HMG-CoA reduktaze, enzima koji katalizira limitirajući korak u biosintezi kolesterola. Svi statini još uvijek nemaju službene farmakopejske monografije, pa postoji velika potreba za razvojem analitičkih metoda za njihovu identifikaciju i određivanje sadržaja u aktivnim ljekovitim tvarima i gotovim ljekovitim oblicima. Terapija statinima je svakodnevna i dugoročna, pa je procjena njihove čistoće od velikog značaja, odnosno razvoj selektivnih i osjetljivih metoda za karakterizaciju, identifikaciju i određivanje sadržaja onečišćenja je neophodan.
Crvena fermentirana riža sadrži 14 monakolina koji imaju hipolipemički učinak, a najvažniji je monakolin K, poznat kao lovastatin. Na tržištu se nalaze brojni dodaci prehrani s crvenom fermentiranom rižom. Nažalost, nadležne nacionalne agencije diljem svijeta upozoravaju na lošu kvalitetu dodataka prehrani te potrebu za njihovim pojačanim nadzorom i redovitom kontrolom.
Cilj ovog istraživanja stoga je bio razviti nove, brze, selektivne, osjetljive, precizne i točne analitičke metode za identifikaciju i određivanje sadržaja statina, karakterizaciju i kvantifikaciju onečišćenja atorvastatina, najčešće korištenog lijeka iz skupine statina, te određivanje aktivnih i toksičnih sastavnica crvene fermentirane riže. U radu su korištene sofisticirane analitičke tehnike: kapilarna elektroforeza (CE), tekućinska kromatografija visoke djelotvornosti (HPLC) i masena spektrometrija (MS). Ukupno je razvijeno, validirano i uspješno primijenjeno 6 novih analitičkih metoda. Predložena CE metoda predstavlja jedinstvenu brzu analitičku metodu za analizu bilo kojeg od šest statina registriranih u Europskoj uniji. Određen je sadržaj četiriju onečišćenja atorvastatina te je strukturno karakterizirano i identificirano još osam prisutnih onečišćenja primjenom HPLC-DAD-MSn metode. Rezultati provedene analize proizvoda s crvenom fermentiranom rižom pokazuju značajna odstupanja u sadržaju lovastatina od deklariranih vrijednosti te između pojedinih serija proizvodnje, što upućuje na potrebu za strožom, detaljnijom i češćom kontrolom, u svrhu osiguranja djelotvornog, sigurnog i kvalitetnog proizvoda.- Cardiovascular diseases are the leading cause of death in the world and one of the major risk factors for their development is considered hyperlipidemia. Statins are most commonly used drugs in the treatment of hyperlipidemia, and are one of the most often prescribed drugs in general. Statins act by competitively inhibiting HMG-CoA reductase, the rate limiting enzyme in the cholesterol biosynthesis. Not all statins have official pharmacopoeia monographs, so new analytical methods for their identification and determination in active pharmaceutical ingredients and finished drug products are highly required. Statin therapy is long-term and they are used on daily basis, so their purity assessment is of great importance. Hence, development of selective and sensitive methods for characterization, identification and determination of their impurities is indispensable.
Red fermented rice contatins 14 monacolins with hypolipemic effect, and the most important one is monacolin K, also known as lovastatin. There are numerous dietary supplements containing red fermented rice on the market. Unfortunately the relevant national agencies around the world warn of dietary supplements' poor quality and the need for their increased supervision and regular inspection.
Therefore, the aim of this research was to develop new, fast, selective, sensitive, precise and accurate analytical methods for the identification and determination of statins, characterization and quantification of atorvastatins impurities, which is the most commonly used statin drug, and determination of active and toxic ingredients in red fermented rice. Highly sophisticated analytical techniques were used: capillary electrophoresis (CE), high performance liquid chromatography (HPLC) and mass spectrometry (MS). In total 6 new analytical methods were developed, validated and successfully applied. The proposed CE method represents a universal fast analytical method for the analysis of any of the six statins registered in the European Union. The content of four atorvastatin impurities was determined and eight other impurities were structurally characterized and identified by HPLC-DAD-MSn method. The results of the red fermented rice products analysis indicated significant deviations in lovastatin content from declared values and among different batches. This suggests the need for tighter, more detailed and more frequent control in order to ensure effectiveness, safety and quality of these products.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
PDF
