ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Razvoj rekombinantnih sevov bakterije Lactococcus lactis s sposobnostjo dostave proteinskih zaviralcev citokinske osi IL-23/IL-17 = Development of recombinant Lactococcus lactis strains with the ability to deliver protein blockers of IL-23/IL-17 cytokine axis : enovit magistrski študij farmacija
Klemenčič, Kaja, farmacevtka
Patogeneza kronične vnetne črevesne bolezni (KVČB) temelji na prekomerni aktivaciji imunskega odziva zaradi neuravnotežene aktivnosti celic T pomagalk in regulatornih celic T. V črevesni sluznici ...bolnikov so odkrili povečano število celic Th17, za katere je značilno izločanje citokina IL-17. Njihovo ekspanzijo spodbuja citokin IL-23, celotna signalna pot pa se imenuje citokinska os IL-23/IL-17. Za zdravljenje hudih oblik bolezni so zato na voljo monoklonska protitelesa proti citokinom ali drugim vnetnim molekulam. Zaradi velike in nestabilne strukture, oteženega pridobivanja ter imunogenosti protiteles so v razvoju tudi majhni proteinski vezalci neimunoglobulinskega izvora. V izogib razgradnji proteinskih vezalcev lahko kot dostavni sistem uporabimo mlečnokislinske bakterije (MKB), saj številni sevi preživijo prehod skozi gastrointestinalni trakt. S tem lahko hkrati dosežemo sinergistično delovanje probiotičnih MKB in dostavljenih terapevtskih molekul v črevesu. V okviru magistrske naloge smo želeli razviti rekombinantne seve bakterije Lactococcus lactis s sposobnostjo dostave proteinskih vezalcev (ARS) receptorja za IL-17 (IL-17RA). Z metodami genskega kloniranja smo pripravili genske konstrukte ARS12, ARS14, ARS19 in ARS14CO v plazmidu pSDBA3b za predstavitev na bakterijski površini ali za izločanje v gojišče. Plazmid je vseboval gena za signalni peptid Usp45 in peptidno oznako Flag, v primeru površinske predstavitve pa še zapis za sidrno domeno cAcmA. Gene smo v bakterijah nadzorovano izražali z nizinom in izražene vezalce analizirali s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti NaDS (NaDS-PAGE) ter prenosom western - s protitelesi proti oznaki Flag. Pri tem smo zaznali le vezalce v fuziji s sidrno domeno cAcmA. S pretočno citometrijo smo nato potrdili površinsko predstavitev proteinov ARS12, ARS14 in ARS19. Nadalje smo želeli razviti še multifunkcionalne bakterije L. lactis, zmožne hkratnega izražanja vezalca IL-17A (finomera) in vezalcev IL-17RA (ARS14 ter ARS19) z namenom dosega sinergističnega učinka na vnetni proces v črevesu. Izražanje smo preverili z NaDS-PAGE in prenosom western - s protitelesi proti oznaki Flag, s katero so bili označeni vezalci ARS, ter protitelesi proti oznaki cMyc, s katero so bili označeni finomeri. Zaznali smo vezalce v fuziji s sidrno domeno cAcmA, pa tudi vezalec ARS14, ki so ga bakterije izločile v gojišče. V raziskovalnem delu smo torej dokazali sposobnost bakterij L. lactis za dostavo vezalcev IL-17A in IL-17RA, v nadaljevanju pa bo potrebno ovrednotiti še njihovo funkcionalnost ter jih testirati v mišjem modelu KVČB.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [K. Klemenčič], 2023
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
