ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Vpliv glikozilacije in fosforilacije na celično lokalizacijo aktivne oblike cistatina F = The impact of glycosylation and phosphorylation on cellular localization of cystatin F active form : Uniform Master's Study Programme Pharmacy
Lačen, Mojca
Cistatin F je inhibitor cisteinskih peptidaz in spada v družino cistatinov tipa II. Od drugih cistatinov tega tipa se razlikuje po tem, da ima tri glikozilacijska mesta (na asparaginih na mestih 61, ...62 in 115) in da se precejšen delež cistatina F nahaja v endosomih/lizosomih celic. Sintetizira se kot neaktiven dimer, povezan z dvema disulfidnima vezema. Cepitev 15 aminokislin na N-koncu olajša njegovo monomerizacijo in pretvorbo v aktivno obliko, ki inhibira cisteinske katepsine C, H in L, ki se nahajajo v endosomih/lizosomih. Pokazano je bilo, da stopnja glikozilacije vpliva na izločanje in privzem neaktivne oblike cistatina F in da je prehod cistatina F v celico in v endosome/lizosome omogočen z vezavo fosforiliranih glikanov na M6P-receptor. Namen magistrske naloge je bil ugotoviti ali stopnja glikozilacije vpliva na privzem, izločanje iz celice ter lokalizacijo tudi aktivne oblike cistatina F. Za ta namen smo naredili enojno, dvojno in trojno neglikozilirane mutante aktivne oblike cistatina F in preverili njihovo izražanje, izločanje in prevzem v celice HeLa, ki normalno ne izražajo cistatina F. S prenosom western smo določali ali se neglikozilirane aktivne oblike proteina izločajo iz transfeciranih celic, in obratno, ali se iz gojišča lahko privzemajo v celice. Lokalizacijo v celičnih organelih smo ugotavljali s pomočjo fluorescenčne konfokalne mikroskopije. Kot kontrolo smo uporabili polno glikoziliran aktivni cistatin F, ki po izražanju prehaja v endosome/lizosome ter se po transfekciji izloča v gojišče in tudi privzema nazaj v celico. Z uporabo neglikoziliranih mutant smo ugotovili, da se v celice privzema le skrajšan, na mestu 115 neglikoziliran cistatin F. To potrjujejo rezultati konfokalne mikroskopije, ki kažejo, da ta mutanta enako kot polno glikozilirana oblika, po transfekciji prehaja v endosome/lizosome. Druge neglikozilirane mutante, ki smo jih uporabili, se ne privzemajo v celice in se v celici po transfekciji ne nahajajo v endosomih/lizosomih. Se pa v gojišče poleg skrajšanega, na mestu 115 neglikoziliranega cistatina F, izločata tudi skrajšani in na mestih 61 in 62 neglikozilirani mutanti, kar kaže na to, da lahko glikozilacija na asparaginu 115 pripomore k prehodu proteina iz celice. Ugotovili smo, da ima glikozilacija tudi na asparaginih na mestih 61 in 62 velik vpliv na izločanje in privzem ter tudi na lokalizacijo aktivne oblike cistatina F v celicah HeLa, saj neglikozilirane mutante v veliko manjši meri ali pa sploh ne prehajajo membrane. Rezultati kažejo tudi na to, da morebitna O-glikozilacija ali fosforilacija nimata vpliva na prehod aktivne oblike cistatina F preko membran.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [M. Lačen], 2020
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
