Konstrukcija plazmidov za hkratno inducibilno izražanje dveh rekombinantnih proteinov v mlečnoklislinskih bakterijah = Construction of plasmids for inducible coexpression of two recombinant proteins in lactic acid bacteria
Sluga, Janja, 1987-
Mlečnokislinske bakterije so grampozitivne bakterije, ki spremljajo ljudi že več stoletij in jih Svetovna zdravstvena organizacija priznava kot varne. Pojavljajo se kot sestavine prehrane, kot ...probiotiki, poleg tega so sestavni del posameznikove črevesne mikrobiote. S pomočjo genskega inženiringa lahko mlečnokislinske bakterije izkoristimo kot vektorje za dostavo antigenov, rekombinantnih proteinov in dostavo DNA z namenom cepljenja ali nevtralizacije vnetnih mediatorjev ter toksinov. Modelna bakterija Lactococcus lactis služi tudi kot gostiteljski organizem za izražanje rekombinantnih proteinov. V ta namen se pri bakteriji L. lactis najpogosteje uporablja z nizinom nadzorovan sistem za izražanje proteinov (NICE), ki ga je možno nadgraditi. Za izražanje rekombinantnih proteinov so namreč potrebni sodobni, izboljšani plazmidni vektorji. Med možnimi izboljšavami je zmožnost enostavne vstavitve več genov s ciljem hkratnega izražanja več proteinov. V raziskovalnem delu smo sistem NICE prilagodili za sočasno izražanje dveh proteinov. Uporabili smo plazmide pNZ8148, pJET1.2 in pGEM. Izbrane gene smo izrezali z restrikcijskimi encimi, jih ločili z agarozno elektroforezo in jih z ligacijo združili z genskimi konstrukti za izražanje željenih proteinov. Tako pripravljene laktokokne plazmide smo s tehniko elektroporacije vnesli v bakterijo L. lactis NZ9000. Pridobili smo plazmid pNZDual, ki vsebuje dva nizinska promotorja in dve klonirni mesti, plazmid pNZDualTT, pri katerem je plazmidu pNZDual dodan še en transkripcijski terminator ter plazmid pNZPolycist, ki vsebuje en sam nizinski promotor in dve klonirni mesti, ločeni z ribosom-vezavnim mestom. V novo nastale plazmide smo vstavili gene za dva modelna proteina, in sicer infrardeči fluorescenčni protein irfp713 (angl. infrared fluorescent protein; IRFP) in humani IgG-vezavni načrtovani protein z ankirinskimi ponovitvami (angl. designed ankyrin repeat protein; DARPIN) I07. Gene smo vstavili v plazmide v vseh možnih zaporedjih z namenom ocene vpliva na količino izražanja. Vrednotenje rezultatov je bilo opravljeno z meritvami absorpcije in fluorescence ter z metodama celične ELISE in pretočne citometrije. Ugotovili smo, da plazmid pNZDual z dvema promotorjema omogoča enakomerno izražanje obeh izbranih modelnih proteinov. S tem smo razvili novo serijo plazmidov za napredno gensko spreminjanje mlečnokislinske bakterije L. lactis.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [J. Sluga], 2022
Knjižnica emšf 0000000579 SLUGA J. Konst 0000001138 IN: 0017411
Knjižnica emšf 579 SLUGA J. Konst 1138 IN: 0017411
available - reading room
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
