VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
  • Iskanje potencialnih peptidnih inhibitorjev rekombinantne 17ß-hidroksisteroid-dehidrogenaze iz glive Cochliobolus lunatus s hepapeptidnopredstavitveno bakteriofagno knjižnico = Hepapeptide phage display library as a tool for searching potential peptide inhibitors of recombinant 17ß-hydroxysteroid-dehydrogenase from the fungus Cochliobolus lunatus : diplomska naloga
    Furman, Tjaša
    17Ž-hidroksisteroid-dehidrogenaza iz glive Cochliobolus lunatus (17Ž-HSDcl) spada med regiospecifiène oksidoreduktaze in predstavlja modelni encim naddruzine kratkoveriznih dehidrogenazžreduktaz. V ... to naddruzino pristevamo tudi humane 17Ž-hidroksisteroid-dehidrogenaze, ki imajo pomembno vlogo pri uravnavanju aktivnosti steroidnih hormonov. Ker sodelujejo pri zadnji stopnji biosinteze spolnih hormonov iz holesterola, predstavljajo zanimivo ciljno mesto za uravnavanje koncentracije estrogenov in androgenov v organizmu. 17Ž-HSDcl smo izolirali iz bakterije Escherichia coli z vstavljenim plazmidom pGEX-17Ž-HSDcl, ki nosi genski zapis za fuzijski protein med 17Ž-HSDcl in glutation-S-transferazo. Izolirano in oèisèeno 17Ž-HSDcl smo uporabili pri selekciji bakteriofagnih klonov iz heptapeptidne predstavitvene knjiznice. Izselekcionirani kloni imajo izrazene heptapeptide, ki izkazujejo najveèjo afiniteto do vezave na 17Ž-HSDcl. Taksni peptidi, potencialni inhibitorji 17Ž-HSDcl, bi lahko predstavljali spojine vodnice v naèrtovanju peptidomimetiènih zaviralcev 17Ž-HSDcl, ki bi se lahko uporabljali pri hormonsko odvisnih oblikah raka, zdravljenju Alzheimerjeve bolezni in ostalih patoloskih stanjih, kjer so vpletene 17Ž-HSD. Selekcijo heptapeptidov smo prièeli z doloèitvijo optimalnih eksperimentalnih pogojev, pri katerih je 17Ž-HSDcl vezana na mikrotitrsko plosèico izkazovala najvisjo encimsko aktivnost, izmerjeno spektrofotometrièno po dodatku substrata. Nato smo izvedli dve selekciji, sestavljeni iz sestih oz. stirih selekcijskih stopenj. Selekcijski postopek je bil sestavljen iz inkubacije suspendiranih bakteriofagov nad imobilizirano 17Ž-HSDcl in sledeèim izpiranjem nevezanih delcev ter nespecifiène elucije vezanih bakteriofagov. Po titraciji eluiranih bakteriofagov smo z ELISA testom izbrali le tiste klone z najveèjo afiniteto do 17Ž-HSDcl. Iz teh klonov smo izolirali bakteriofagno DNA in ji doloèili nukleotidno zaporedje, ki smo ga prevedli v aminokislinsko. Ker med dobljenimizaporedji nismo zasledili nobenega motiva, ki bi se veèkrat ponovil,smo naredili se kvantitativni ELISA test. Tako smo ovrednotili dobljene peptide glede na afiniteto do 17Ž-HSDcl. Razvrstitev na ta naèin je bila mogoèa, ker so vsi vzorci vsebovali enako stevilo bakteriofagov. V nadaljevanju bi bilo potrebno sintetizirati peptide, ki pri kvantitativnem ELISA testu izkazujejo najveèjo afiniteto ter preizkusiti njihovo inhibitorno aktivnost do 17Ž-HSDcl. Z uporabo programa BLAST smo poiskali proteine, ki vsebujejo celotno dobljeno aminokislinsko zaporedje ali pa del le-tega. Poznavanje glivnih proteinov s katerimi 17Ž-HSDcl interagira bo prispevalo k razresevanju fizioloske vloge tega encima.
    Vrsta gradiva - diplomsko delo
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [Furman, T.], 2005
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 1842033

Knjižnica/institucija Kraj Akronim Za izposojo Druga zaloga
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Ljubljana FFALJ v čitalnico 1 izv.
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico