VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
  • Vpliv glikozilacije in fosforilacije na celično lokalizacijo aktivne oblike cistatina F = The impact of glycosylation and phosphorylation on cellular localization of cystatin F active form : Uniform Master's Study Programme Pharmacy
    Lačen, Mojca
    Cistatin F je inhibitor cisteinskih peptidaz in spada v družino cistatinov tipa II. Od drugih cistatinov tega tipa se razlikuje po tem, da ima tri glikozilacijska mesta (na asparaginih na mestih 61, ... 62 in 115) in da se precejšen delež cistatina F nahaja v endosomih/lizosomih celic. Sintetizira se kot neaktiven dimer, povezan z dvema disulfidnima vezema. Cepitev 15 aminokislin na N-koncu olajša njegovo monomerizacijo in pretvorbo v aktivno obliko, ki inhibira cisteinske katepsine C, H in L, ki se nahajajo v endosomih/lizosomih. Pokazano je bilo, da stopnja glikozilacije vpliva na izločanje in privzem neaktivne oblike cistatina F in da je prehod cistatina F v celico in v endosome/lizosome omogočen z vezavo fosforiliranih glikanov na M6P-receptor. Namen magistrske naloge je bil ugotoviti ali stopnja glikozilacije vpliva na privzem, izločanje iz celice ter lokalizacijo tudi aktivne oblike cistatina F. Za ta namen smo naredili enojno, dvojno in trojno neglikozilirane mutante aktivne oblike cistatina F in preverili njihovo izražanje, izločanje in prevzem v celice HeLa, ki normalno ne izražajo cistatina F. S prenosom western smo določali ali se neglikozilirane aktivne oblike proteina izločajo iz transfeciranih celic, in obratno, ali se iz gojišča lahko privzemajo v celice. Lokalizacijo v celičnih organelih smo ugotavljali s pomočjo fluorescenčne konfokalne mikroskopije. Kot kontrolo smo uporabili polno glikoziliran aktivni cistatin F, ki po izražanju prehaja v endosome/lizosome ter se po transfekciji izloča v gojišče in tudi privzema nazaj v celico. Z uporabo neglikoziliranih mutant smo ugotovili, da se v celice privzema le skrajšan, na mestu 115 neglikoziliran cistatin F. To potrjujejo rezultati konfokalne mikroskopije, ki kažejo, da ta mutanta enako kot polno glikozilirana oblika, po transfekciji prehaja v endosome/lizosome. Druge neglikozilirane mutante, ki smo jih uporabili, se ne privzemajo v celice in se v celici po transfekciji ne nahajajo v endosomih/lizosomih. Se pa v gojišče poleg skrajšanega, na mestu 115 neglikoziliranega cistatina F, izločata tudi skrajšani in na mestih 61 in 62 neglikozilirani mutanti, kar kaže na to, da lahko glikozilacija na asparaginu 115 pripomore k prehodu proteina iz celice. Ugotovili smo, da ima glikozilacija tudi na asparaginih na mestih 61 in 62 velik vpliv na izločanje in privzem ter tudi na lokalizacijo aktivne oblike cistatina F v celicah HeLa, saj neglikozilirane mutante v veliko manjši meri ali pa sploh ne prehajajo membrane. Rezultati kažejo tudi na to, da morebitna O-glikozilacija ali fosforilacija nimata vpliva na prehod aktivne oblike cistatina F preko membran.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [M. Lačen], 2020
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 4878449

    Povezava(-e):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=113768

Knjižnica/institucija Kraj Akronim Za izposojo Druga zaloga
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Ljubljana FFALJ v čitalnico 1 izv.
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico