VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
13.
Molekulsko kloniranje in izražanje rekombinantne indolamin 2,3-dioksigenaze 1 v bakteriji Escherichia coli = Cloning and expression of recombinant indolamine 2,3-dioxygenase 1 in Escherichia coli : enoviti magistrski študijski program Farmacija
Petrač, Mirjam
Temelj magistrske naloge je bila priprava ekspresijske kasete, molekulsko kloniranje, izražanje ter izolacija in čiščenje humanega proteina indolamin 2,3-dioksigenaze 1 (IDO1). Rekombinanten encim bo ...omogočil razvoj in vrednotenje novih zaviralcev encima IDO1, potencialno uporabnih za zdravljenje nekaterih rakavih bolezni. IDO1 je normalno prisoten encim v človeških celicah. Njegova naloga je indukcija primarne poti katabolizma triptofana. Pri tem nastanejo presnovki, med katerimi so nekateri tudi toksični. Skozi pot metabolizma triptofana in nastanek kinurenina, ki je ligand za arilni ogljikovodikov receptorjev (AhR) pride do prikritja tumorja imunskemu sistemu. Tako je omogočena njegova rast in razvoj. Rekombinantni humani IDO1 (rhIDO1) smo izražali v celicah Escherichia coli NiCo21. V vektor pET-28 smo vstavili gen za IDO1, ki smo mu na 5'-konec pripeli nukleotidno zaporedje, kodirajoče heksahistidinski rep in peptidno zaporedje, ki ga selektivno cepi trombin. Plazmid smo s toplotnim šokom vstavili v ekspresijski bakterijski sev. Celice smo namnožili in z dodatkom induktorja IPTG inducirali izražanje rhIDO1. Skozi poizkuse smo iskali najustreznejše pogoje (temperatura, čas indukcije, koncentracija glukoze, vrsta gojišča...) s ciljem optimizacije izražanja z vidika kakovosti in količine produkta. Za čiščenje smo uporabili večstopenjski kromatografski proces (kovinsko-kelatno afinitetno kromatografijo, gelsko filtracijo in kationsko izmenjevalno kromatografijo). Čistoto produkta smo med izolacijo spremljali s polialkrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata. Koncentracijo produkta smo ocenili spektrofotometrično in z metodo po Bradfordu. Na koncu smo aktivnost proteina preverili z biokemijskim testiranjem. Uspešno smo izrazili in izolirali rhIDO1. Čeprav je produkt vseboval določen delež nečistot in je izkazoval nižjo aktivnost v primerjavi s komercialnim standardom, ga kljub temu lahko uporabljamo za vrednotenje potencialnih zaviralcev rhIDO1 v encimskih testih.
Vrsta gradiva - magistrsko delo
; neleposlovje za odrasle
Založništvo in izdelava - Ljubljana : [M. Petrač], 2020
Bibliografsko gradivo je bilo uspešno dodano na polico.
Dodajanje bibliografskega gradiva na polico ni uspelo.
Gradivo je že na polici.
Trajna povezava
URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto
Faktor vpliva
Izdaja
Kategorija
Razvrstitev
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Izberite knjižnično izkaznico:
Baze podatkov,
v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov
Področje
Leto
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev
Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Citiranje
Funkcionalnost trenutno ni na voljo. Prosimo, poskusite kasneje.
