VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
  • Strukturno podprto načrtovanje, sinteza in vrednotenje novih zaviralcev indolamin 2,3-dioksigenaze in modulatorjev Toll-u podobnih receptorjev tipa 7 in 8 = Structure based design, synthesis and evaluation of novel indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors and Toll-like receptors 7 and 8 modulators : doktorska disertacija
    Dolšak, Ana, farmacevtka, 1993-
    Pri raziskovalnem delu v okviru doktorske disertacije smo se ukvarjali s tremi tarčami imunskega sistema - indolamin 2,3-dioksigenazo 1 (IDO1) in Toll-u podobnima receptorjema tipa 7 in 8 (TLR7 in ... TLR8). Medtem ko IDO1 sodeluje v imunomodulaciji preko metabolizma triptofana, sta TLR7 in TLR8 senzorja nukleinskih kislin patogenih organizmov. Vse tri tarče so udeležene v patologiji številnih bolezenskih stanj, med drugim tudi rakavih obolenj. Na tarči IDO1 smo se na podlagi spojine zadetka lotili sinteze analogov, za kar smo razvili večstopenjski sintezni postopek, s pomočjo katerega smo osnovni izoksazolo[5,4-d]pirimidin-4(5H)-onski skelet modificirali na dveh različnih mestih. Vsem pripravljenim spojinam smo ovrednotili zaviralno aktivnost s fluorescenčnim testom na izoliranem IDO1 ter nadalje preverili še selektivnost napram ostalima izoformama - indolamin 2,3-dioksigenazi 2 in triptofan 2,3-dioksigenazi. Spojine so izkazovale selektivno zaviranje IDO1 v nizkem mikromolarnem območju, najmočnejše med njimi so v svoji strukturi posedovale anilinski fragment, na para mestu substituiran s trifluorometilno, cikloheksilno ali metoksikarbonilno skupino. Aktivnim spojinam smo določili tudi citotoksični profil, spojini 23 kot najmočnejšemu zaviralcu IDO1 z IC50 vrednostjo 23 [mikro]M pa smo aktivnost ovrednotili še v celičnem zaviralnem testu. V sklopu raziskovalnega dela na TLR7 smo na podlagi treh spojin zadetkov pripravili dve seriji nizko molekularnih selektivnih agonistov TLR7 s kromeno[3,4-d]imidazol-4(1H)-onskim in 2-(trifluorometil)kinolin/ kinazolin-4-aminskim skeletom. Z uvedbo različnih substitucij na osnovni kromenoimidazolonski skelet smo dosegli premik iz antagonističnega v agonistično delovanje, spojina 26 pa predstavlja najmočnejšega agonista (EC50 = 1,8 [mikro]M) prve serije. Druga serija agonistov je na mestu 4 osnovnega skeleta posedovala sekundarni ali terciarni amin z vezano krajšo alkilno verigo ali večjim in rigidnejšim alifatskim obročem. Najboljši predstavnik te serije, spojina 46, je nadalje signifikantno inducirala sproščanje provnetnega citokina IL8 iz enojedrnih celic periferne krvi. Lotili smo se tudi sistematične študije značilnosti med strukturo in delovanjem negativnih modulatorjev TLR8. Za pripravo večje knjižnice analogov spojine zadetka s pirimidinskim skeletom, ki smo jo strukturno modificirali na treh različnih mestih, smo razvili dve sintezni poti. Potrdili smo, da so trifluorometilna skupina na mestu 6 in ostala dva substituenta na mestih 2 in 4 osnovnega 4-(furan-2-il)-6-(trifluorometil)pirimidinskega skeleta pomembni strukturni elementi pripravljene serije modulatorjev TLR8. Na mestu 2 je bila za modulacijo TLR8 ključna prisotnost benzilaminskega substituenta s para hidroksi ali hidroksimetilno skupino. Večje število sintetiziranih spojin je v nizkem mikromolarnem območju izkazovalo selektivno in koncentracijsko odvisno zaviranje TLR8-signalne poti na celični liniji HEK293. Najbolj perspektivni spojini 4-(furan-2-il)-2-(metilsulfonil)-6-(trifluorometil)pirimidin (15a) in (4-(((4-(furan-2-il)-6-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)metil)fenil)metanol (53) predstavljata pomembni kemijski probi za nadaljnjo optimizacijo do spojine vodnice z močnim imunomodulatornim delovanjem. V okviru raziskovalnega dela na TLR8 smo se lotili tudi računalniško-podprtega načrtovanja novih modulatorjev. Več kupljenim zadetkom iz virtualnega rešetanja smo ovrednotili jakost delovanja na TLR8 in preverili selektivnost napram TLR7. Pri tem smo prišli do nove spojine zadetka 3-(1-hidroksiheksan-2-il)-5-metilkinazolin-4(3H)-ona (T91), dualnega agonista TLR7 in TLR8, ki smo mu na enojedrnih celicah periferne krvi preverili sposobnost indukcije ekspresije provnetnih citokinov. Spojina T91 je signifikantno inducirala ekspresijo IL8, s čemer smo potrdili njeno imunomodulatorno delovanje. Raziskovalno delo smo zaključili z optimizacijo pogojev Suzuki reakcije, ene najpogosteje uporabljenih reakcij za tvorbo C-C vezi, ki smo jo sami uporabili za pripravo nekaterih negativnih modulatorjev TLR8. Osredotočili smo se na reakcijo med 2,4-dikloropirimidini in različnimi aril- ali heteroaril boronskimi kislinami. Med poglobljenim študijem reakcijskih pogojev smo preverili vpliv topila, katalizatorja, temperature in časa na potek reakcije, z uporabo mikrovalovnega sevanja pa smo razvili hiter in visoko učinkovit sintezni postopek za pripravo C4-substituiranih pirimidinov. Zaradi kratkega reakcijskega časa (15 min) in predvsem nizke porabe (0,5 mol %) katalizatorja tetrakis(trifenilfosfino)paladija (0) je postopek primeren za hitro in poceni regioselektivno pripravo substituiranih pirimidinov. V okviru doktorske disertacije smo uspešno načrtovali in sintetizirali nizkomolekularne zaviralce IDO1 ter modulatorje TLR7 in TLR8 z jakostjo delovanja v nizkem mikromolarnem območju. Za pripravo substituiranih pirimidinov smo razvili metodo Suzuki reakcije v mikrovalovnem reaktorju. Več modulatorjev TLR7 in TLR8 je induciralo sproščanje provnetnih citokinov. S pripravljenimi serijami spojin smo pomembno prispevali k razvoju spojin vodnic z imunomodulatornim delovanjem.
    Vrsta gradiva - disertacija ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [A. Dolšak], 2021
    Jezik - slovenski, angleški
    COBISS.SI-ID - 77698563

    Povezava(-e):

    Repozitorij Univerze v Ljubljani – RUL

Knjižnica/institucija Kraj Akronim Za izposojo Druga zaloga
Centralna tehniška knjižnica Univerze v Ljubljani Ljubljana CTK na dom 1 izv.
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Ljubljana FFALJ v čitalnico 1 izv.
Narodna in univerzitetna knjižnica, Ljubljana Ljubljana NUK v čitalnico 1 izv.
ni za izposojo 1 izv.
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico