Hemimetabolous, or incompletely metamorphosing, insects are phylogenetically basal. These insects include many deleterious species. The cricket, Gryllus bimaculatus, is an emerging model for ...hemimetabolous insects, based on the success of RNA interference (RNAi)-based gene-functional analyses and transgenic technology. Taking advantage of genome-editing technologies in this species would greatly promote functional genomics studies. Genome editing using transcription activator-like effector nucleases (TALENs) has proven to be an effective method for site-specific genome manipulation in various species. TALENs are artificial nucleases that are capable of inducing DNA double-strand breaks into specified target sequences. Here, we describe a protocol for TALEN-based gene knockout in G. bimaculatus, including a mutant selection scheme via mutation detection assays, for generating homozygous knockout organisms.
Bu çalışmada, Ankara Üniversitesi Ziraat Fakültesi Zootekni Bölüm İşletmesinde yetiştirilen Saanen–Kilis melezi Akkeçi’lerden ve Konya–Ermenek yöresi özel işletmelerdeki Kıl keçi’lerden temin edilen ...toplam 30 adet süt örneğinden genomik DNA izolasyonu yapılmıştır. Genomik DNA izolasyonu, fenol–kloroform ile Chelex® 100 ekstraksiyon yöntemleri kullanılarak yapılmıştır. Her iki yöntemle elde edilen genomik DNA’nın konsantrasyonu ve saflık derecesi, 260 ve 280 nm UV ışığı altında absorbans değerlerinden hesaplanmış ve karşılaştırılmıştır. Fenol–kloroform ekstraksiyon yöntemi ile elde edilen DNA konsantrasyonu ortalama, 2406±322 µg/mL ve saflık derecesi A260/A280oranında ortalama, 1.816±0.038 olarak bulunmuştur. Bu durum fenol-kloroform ekstraksiyon yöntemiyle genomik DNA’nın saf olarak elde edildiğini göstermektedir. Chelex® 100 ekstraksiyon yönteminde ise DNA konsantrasyonu ortalama, 590.0±54.9 µg/mL ve elde edilen genomik DNA’nın saflık derecesi ortalama, 1.311±0.012 olarak bulunmuştur. Bu sonuç Chelex® 100 ekstraksiyonu ile elde edilen DNA örneklerinde protein kontaminasyonu olduğunu göstermekte ve DNA’ların çok saf elde edilemediğini ifade etmektedir. Fenol–kloroform ekstraksiyon yöntemi ile elde edilen genomik DNA, % 1.0 ’lik agaroz jelinde tek bant olarak görülmüştür. Ancak Chelex® 100 ekstraksiyon yöntemi ile elde edilen DNA miktarı az olduğu için agaroz jelinde görüntü alınamamıştır
