DIKUL - logo
(UL)
  • Vloga katepsina X v aktivaciji mikroglije, posredovani z agonisti TLR receptorjev = Role of cathepsin x in microglia activation mediated through TLR agonists : magistrska naloga : enovit magistrski študijski program Farmacija
    Pertoci, Vesna
    Dobro uravnavana aktivacija mikroglije je izjemnega pomena za zaščito centralnega živčnega sistema pred različnimi grožnjami. Slabo uravnavana in prekomerna aktivacija mikroglije privede do nastanka ... pretiranega vnetnega odziva, ki škoduje nevronom in povzroča nevrodegeneracijo, ki vodi v razvoj življenjsko ogrožajočih bolezenskih stanj, kot je Parkinsonova bolezen (PB). Predhodne raziskave so že pokazale, da aktivirana mikroglija v svojo okolico poleg vnetnih dejavnikov in citokinov sprošča tudi cisteinske katepsine, med njimi tudi katepsin X. Za slednjega je bilo pokazano, da je pomemben regulator nevrodegeneracije, povzročene z vnetnimi procesi, v katerih sodelujejo celice mikroglije. V sklopu magistrske naloge smo podrobneje raziskali vpliv aktivacije mikroglije na vnetni odziv preko sočasne aktivacije alfaToll-u alfa podobnih receptorjev (TLR), in sicer TLR3 in TLR4, obenem pa smo opredelili vlogo katepsina X v tem procesu. Poskuse smo izvedli na celičnem modelu aktivirane mikroglije z uporabo celic BV2, ki smo jih stimulirali z agonistoma receptorjev TLR3 in TLR4, in sicer s poly(I:C) in LPS. S pomočjo spektrofotometrije in pretočne citometrije smo preverili vpliv aktivacije mikroglije, v prisotnosti ali odsotnosti zaviralca katepsina X, AMS36, na celično preživetje in nivo vnetnega odziva. Spektrofotometrično smo določili tudi aktivnost kaspaze-3 in katepsina X, medtem ko smo izražanje katepsina X preverili z uporabo encimsko- imunskega testa na trdni podlagi (ELISA), njegovo znotrajcelično lokalizacijo pa z uporabo imunofluorescenčne konfokalne mikroskopije. Za določanje izražanja inducibilne NO sintaze (iNOS) smo uporabili prenos western. Sočasna aktivacija TLR3 in TLR4 z agonistoma poly(I:C) in LPS je v primerjavi z enostransko stimulacijo s posameznim agonistom izkazovala močnejši, sinergistični učinek na aktivacijo celic mikroglije BV2, opredeljeno preko merjenja koncentracije sproščenih vnetnih dejavnikov, in sicer dušikovega oksida (NO), interlevkina-6 (IL-6) in tumorje-nekrotizirajočega faktorja alfa (TNF-alfa). Meritve izražanja in aktivnosti katepsina X v celičnih lizatih in supernatantih aktivirane mikroglije so pokazale, da sočasna aktivacija TLR3 in TLR4 s poly(I:C) in LPS v približno enaki meri kot enostranska stimulacija z LPS značilno poveča nivo proteina kot tudi aktivnost katepsina X v supernatantih celic BV2, medtem ko se njegova aktivnost v celicah značilno zniža. Z opazovanjem znotrajcelične lokalizacije katepsina X smo pokazali, da ko-aktivacija celic mikroglije značilno poveča lokalizacijo katepsina X ob plazemski membrani in hkrati zmanjša lokalizacijo slednjega v lizosomskih veziklih, kar dodatno nakazuje na znotrajcelično translokacijo katepsina X v aktivirani mikrogliji. Z uporabo ireverzibilnega specifičnega zaviralca katepsina X, AMS36, smo v nadaljevanju potrdili vlogo katepsina X kot mediatorja aktivacije mikroglije, saj je prisotnost AMS36 pomembno zmanjšala koncentracijo sproščenih vnetnih dejavnikov NO, IL-6 in TNF-% iz ko-aktiviranih celic mikroglije, hkrati pa je AMS36 vplival tudi na zmanjšano izražanje iNOS po ko-stimulaciji mikroglije. Zaviranje katepsina X je zmanjšalo tudi delež celične smrti in apoptozo aktivirane mikroglije, spodbujene s sočasno stimulacijo z LPS in poly(I:C), hkrati pa je bil opazen vpliv AMS36 na povišano aktivnost kaspaze-3 v aktivirani mikrogliji. Nenazadnje smo na ko-kulturnem modelu celic mikroglije BV2 in nevronskih celic SH-SY5Y pokazali tudi zaščitno delovanje zaviralca katepsina X na nevronske celice. Dodatek AMS36 pred ko-stimulacijo celic mikroglije z LPS in poly(I:C) je namreč značilno zmanjšal degeneracijo nevronskih celic, ki so bile izpostavljene supernatantu aktivirane mikroglije. Rezultati, pridobljeni v sklopu magistrske naloge, torej nakazujejo na pomembno vlogo katepsina X pri ko-aktivaciji mikroglije in uravnavanju vnetnega odziva, zato katepsin X predstavlja pomembno tarčo pri načrtovanju strategij zdravljenja nevrodegenerativnih bolezni povzročenih z vnetjem, kot je PB.
    Type of material - master's thesis ; adult, serious
    Publication and manufacture - Ljubljana : [V. Pertoci], 2019
    Language - slovenian
    COBISS.SI-ID - 4737393

    Link(s):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=108321

Library Call number – location, accession no. ... Copy status
Faculty of Pharmacy, Lj. Knjižnica
emšf 542 PERTOCI VESNA Vloga 708
IN: 0016207 		available - reading room
loading ...
loading ...
loading ...

Shelf entry