DIKUL - logo
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana (FFALJ)
  • Razvoj rekombinantnih sevov bakterije Lactococcus lactis s sposobnostjo dostave proteinskih zaviralcev citokinske osi IL-23/IL-17 = Development of recombinant Lactococcus lactis strains with the ability to deliver protein blockers of IL-23/IL-17 cytokine axis : enovit magistrski študij farmacija
    Klemenčič, Kaja, farmacevtka
    Patogeneza kronične vnetne črevesne bolezni (KVČB) temelji na prekomerni aktivaciji imunskega odziva zaradi neuravnotežene aktivnosti celic T pomagalk in regulatornih celic T. V črevesni sluznici ... bolnikov so odkrili povečano število celic Th17, za katere je značilno izločanje citokina IL-17. Njihovo ekspanzijo spodbuja citokin IL-23, celotna signalna pot pa se imenuje citokinska os IL-23/IL-17. Za zdravljenje hudih oblik bolezni so zato na voljo monoklonska protitelesa proti citokinom ali drugim vnetnim molekulam. Zaradi velike in nestabilne strukture, oteženega pridobivanja ter imunogenosti protiteles so v razvoju tudi majhni proteinski vezalci neimunoglobulinskega izvora. V izogib razgradnji proteinskih vezalcev lahko kot dostavni sistem uporabimo mlečnokislinske bakterije (MKB), saj številni sevi preživijo prehod skozi gastrointestinalni trakt. S tem lahko hkrati dosežemo sinergistično delovanje probiotičnih MKB in dostavljenih terapevtskih molekul v črevesu. V okviru magistrske naloge smo želeli razviti rekombinantne seve bakterije Lactococcus lactis s sposobnostjo dostave proteinskih vezalcev (ARS) receptorja za IL-17 (IL-17RA). Z metodami genskega kloniranja smo pripravili genske konstrukte ARS12, ARS14, ARS19 in ARS14CO v plazmidu pSDBA3b za predstavitev na bakterijski površini ali za izločanje v gojišče. Plazmid je vseboval gena za signalni peptid Usp45 in peptidno oznako Flag, v primeru površinske predstavitve pa še zapis za sidrno domeno cAcmA. Gene smo v bakterijah nadzorovano izražali z nizinom in izražene vezalce analizirali s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti NaDS (NaDS-PAGE) ter prenosom western - s protitelesi proti oznaki Flag. Pri tem smo zaznali le vezalce v fuziji s sidrno domeno cAcmA. S pretočno citometrijo smo nato potrdili površinsko predstavitev proteinov ARS12, ARS14 in ARS19. Nadalje smo želeli razviti še multifunkcionalne bakterije L. lactis, zmožne hkratnega izražanja vezalca IL-17A (finomera) in vezalcev IL-17RA (ARS14 ter ARS19) z namenom dosega sinergističnega učinka na vnetni proces v črevesu. Izražanje smo preverili z NaDS-PAGE in prenosom western - s protitelesi proti oznaki Flag, s katero so bili označeni vezalci ARS, ter protitelesi proti oznaki cMyc, s katero so bili označeni finomeri. Zaznali smo vezalce v fuziji s sidrno domeno cAcmA, pa tudi vezalec ARS14, ki so ga bakterije izločile v gojišče. V raziskovalnem delu smo torej dokazali sposobnost bakterij L. lactis za dostavo vezalcev IL-17A in IL-17RA, v nadaljevanju pa bo potrebno ovrednotiti še njihovo funkcionalnost ter jih testirati v mišjem modelu KVČB.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [K. Klemenčič], 2023
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 147969283

Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda Rezervacija
Knjižnica
emšf 0000000616 KLEMENČIČ KAJA Razvoj 0000001233
IN: 0017643 Knjižnica
emšf 616 KLEMENČIČ KAJA Razvoj 1233
IN: 0017643 		prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico