DIKUL - logo
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana (FFALJ)
  • Vpliv različnih fluorokromov na učinkovitost znotrajceličnega označevanja transkripcijskega dejavnika FoxP3 in aplikacija v in vitro testu indukcije celic Treg = The influence of various fluorochromes on intracellular staining efficiency of the transcription factor FoxP3 and application in in vitro assay of Treg cell induction : magistrski študijski program Laboratorijska biomedicina
    Kramar, Eva
    Regulatorne limfocite T (Treg) uvrščamo v skupino CD4 pozitivnih limfocitov T. Sodelujejo pri uravnavanju imunskega sistema, in sicer tako, da preko različnih mehanizmov uravnavajo ravnotežje med ... imunskim odzivom in imunsko toleranco. V osnovi jih delimo na naravne Treg, ki nastanejo med limfopoezo v priželjcu, in na Treg, ki se inducirajo na periferiji. Prepoznamo jih lahko preko molekul, ki jih izražajo na svoji površini; le-te za namen laboratorijskih raziskav označimo s protitelesi konjugiranimi z različnimi barvili. Ena od molekul, ki nam omogoča prepoznavo Treg, je tudi znotrajcelični transkripcijski dejavnik FoxP3. FoxP3 ima ključno vlogo v razvoju in delovanju Treg in posledično igra pomembno vlogo v regulaciji tolerance do lastnega ter sodeluje pri preprečevanju avtoimunskih bolezni. V magistrski nalogi smo preučevali vpliv treh v pretočni citometriji najpogosteje uporabljenih fluorokromov (Alexa Fluor 488, fikoeritrin, alofikocianin) - opazovali smo zmožnost njihovega prehajanja preko permeabilizirane celične membrane in primernost za označevanje FoxP3. Ugotovili smo, da je za označevanje FoxP3 najprimernejše barvilo Alexa Fluor 488, saj nam daje največji odstotek FoxP3+ dogodkov. Izbrani fluorokrom smo v nadaljevanju uporabili za preučevanje indukcije FoxP3+ Treg v testu in vitro. Hkrati smo preučevali tudi pomen signalizacijske osi PD-1/PD-L1 v tem procesu. Za indukcijo FoxP3 Treg iz naivnih CD4 pozitivnih limfocitov T smo uporabili dendritične celice (DC), ki smo jih pridobili iz osamljenih monocitov in nato aktivirali na različne načine. Za aktivacijo DC smo uporabili lipopolisaharid in interferon-[gama] (IFN-[gama]) oziroma IFN-[gama] v različnih koncentracijah. Uspeli smo pokazati, da DC, ki jih aktiviramo s 1000 IU/mL IFN-[gama] inducirajo največji odstotek FoxP3+ limfocitov T. Prav tako smo pokazali, da dodatek nevtralizacijskega protitelesa, usmerjenega proti PD-L1, občutno zniža sposobnost z IFN-[gama]-tretiranih DC, da inducirajo FoxP3+ Treg. S tem smo pokazali povečano sposobnost z IFN-[gama]-tretiranih DC za indukcijo FoxP3+ Treg in pomembnost signalizacije PD-1/PD-L1 za njihov nastanek. Fenotip DC, tretiranih s 1000 IU/mL IFN-[gama], je prikazoval največje izražanje inhibitorne molekule PD-L1. S tem se nakazuje tolerogenost tako pripravljenih DC, ki jo povezujemo z visokim izražanjem inhibitornih molekul in istočasno nizkim izražanjem kostimulacijskih molekul.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [E. Kramar], 2021
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 59532547

    Povezava(-e):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=125999

Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda Rezervacija
Knjižnica
mlab 0000000616 KRAMAR EVA Vpliv 0000000255
IN: 0016910 Knjižnica
mlab 616 KRAMAR EVA Vpliv 255
IN: 0016910 		prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico