Heterologna ekspresija iz promotorja Gal1 v načrtovanih mutantah kvasovke Saccharomyces cerevisiae = Heterologous expression in designed mutant strains of yeast Saccharomyces cerevisiae using the Gal1 promoter : doktorska disertacija
Novak Štagoj, Mateja, biotehnologija, 1976-
Preiskovanje velikega stevila razliènih sevov kvasovke Saccharomyces cerevisiaezahteva hitro, zanesljivo in natanèno doloèitev gostote celic. Kvantifikacija celic z barvanjem s kalkofluorjem je ...odlièna izbira pri visoko procesivnih metodah, ki temeljijo na merjenju fluorescence v mikrotitrski plosèici. Ugotovili smo visoko stopnjo korelacije med optièno gostoto, merjenopri 600 nm (A600), in fluorescenco barvila Kalkofluor belo M2R, vezanega na celièno povrsino kvasovk, pri èemer smo z enotno kolièino barvila izmerili od 1,5*105 do 1,0*108 celic v mikrotitrski luknjici. Dokazali smo, daje metoda hitra, enostavna in natanèna ter uporabna za stevilne seve v razliènih rastnih fazah in metabolnih okolisèinah. Z namenom izboljsanja rekombinantne produkcije, smo nadalje razvili fluorescentno metodo za spremljanje in ovrednotenje prispevkov razliènih genskih delecij na ekspresijoproteina iz promotorja GAL1. Z uporabo mikrotitrskega èitalca smo neposredno izmerili fluorescenco v zivih celicah in doloèili raven sinteze poroèevalske molekule v 28 izbranih mutantah. V mutiranem sevu gal1 smo opazili najvisje, 2,4-kratno poveèanje produkcije zeleno-flurescirajoèega proteina (GFP). Izbitje gena GAL80 je v primerjavi z izogenim sevom povzroèilo1,3-kratno povisanje fluorescence. Sintezo GFP pa je popolnoma iznièilo izbitje genov GAL3, GAL4 in MTH1. Zmanjsano rast v gojisèu z galaktozo so poleg tega pokazale se mutante gal7, gal10 in gal3. Druge genetske pertubacije so raven heterologne sinteze le malo zmanjsale. Dokazali smo, da je fluorescenèna metoda uporabna za spremljanje vpliva genov, ki so vkljuèeni v uravnavanje promotorja GAL1. Rezultati preiskovanja so prispevek kpoznavanju uravnavanja promotorja GAL1, obenem pa nudijo tudi moznost uèinkovitejse manipulacije sistema GAL. Nadalje smo pripravili nov sev S. cerevisiae, v katerem smo gen za galaktokinazo GAL1 zamenjali z genom za transkripcijski aktivator GAL4. GAL-rekombinantni sev poleg konstitutivno izrazajoèega gena vsebuje se dodaten gen, GAL4, spojen z naravnim promotorjem GAL1. Da bi preuèili, ali ćgratuiranać indukcija kot tudi uravnavana prekomerna ekspresija pozitivnega regulatorja izboljsa produkcijo proteina, smo v divji tip, v gal1 in v GAL-rekombinantni sev vnesli ććlow-ćć in ććmulti-copyććvektorje,ki vsebujejo gen za GFP. V mutanti gal1, ki je nosila vcelici veè kopij vektorja, smo opazili 3,3-kratno zvisanje produkcije GFP. Fluorescenca v GAL-rekombinantnem sevu je bila v primejavi z divjim tipom visja za kar 4,6-krat. Opisani sev tako lahko uporabimo za visoko ekspresijo heterolognih genov, ki so uravnavani z galaktozno - inducibilnim promotorjem.Nazadnje smo se osredotoèili na vlogo galaktokinaze, Gal1p, prvegaencima Leloir-jeve metabolne poti, pri izrazanju genov, ki so uravnavanis promotorji GAL. Pokazali smo, da sta za encimsko aktivnost v III. konzervativni regiji GLSSSAAF nujna dva aminokislinska preostanka, S171 in A172. Transkripcijsko aktivacijo genov GAL smo v celicah, ki ne izkorisèajo galaktoze, ovrednotili z merjenjem intenzitete fluorescence in z metodo pretoène citometrije. Dokazali smo, da upadanje induktorja - galaktoze ni glavni omejitveni dejavnik ravni izrazanja genov GAL
Vrsta gradiva - disertacija
; neleposlovje za odrasle
Založništvo in izdelava - Ljubljana : [M. Novak Štagoj], 2006
GS II 0000623707 glavno skladišče
GS II 623707 glavno skladišče
prosto - za čitalnico
Vnos na polico
Dodajanje gradiva na polico je uspelo.
Dodajanje gradiva na polico je spodletelo.
Dodajanje gradiva na polico ni bilo potrebno.
Bibliografsko gradivo je bilo uspešno dodano na polico.
Dodajanje bibliografskega gradiva na polico ni uspelo.
Gradivo je že na polici.
Trajna povezava
URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto
Faktor vpliva
Izdaja
Kategorija
Razvrstitev
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Izberite knjižnično izkaznico:
Baze podatkov,
v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov
Področje
Leto
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev
Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Citiranje
Funkcionalnost trenutno ni na voljo. Prosimo, poskusite kasneje.
Naročanje gradiva za izposojo v čitalnice
Naročanje kopij člankov
Urnik dostave gradiva z oznako DS v signaturi