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目的通过调查前噬菌体在多重耐药大肠杆菌中的分布特征、诱导分离以及前噬菌体中耐药基因与毒力基因的流行状况,为研究前噬菌体介导耐药基因在细菌的传播提供科学依据.方法挑选前期保存的2018-2019年广东省分离的131株禽源多重耐药大肠杆菌进行核酸提取及全基因组测序,将二代测序的结果组装拼接成全基因组序列,上传至噬菌体PHASTER网络数据库与数据库中已有的噬菌体基因组序列进行比对分析.利用CGE数据库比对耐药基因与毒力基因,从而获得在前噬菌体上耐药基因与毒力基因的分布情况.温和性噬菌体由丝裂霉素C诱导并使用双层平板法分离纯化.结果131株大肠杆菌药物敏感性试验的结果显示,氨苄西林、四环素、氟苯尼考、复方新诺明的耐药率均高达90％以上,其次是头孢类抗生素以及庆大霉素、环丙沙星、美罗培南和黏菌素均在50％左右,替加环素的耐药率达到了 0.2％,所有菌株都呈现出多重耐药的现象,均为多重耐药大肠杆菌.131株多重耐药大肠杆菌中共检出736个前噬菌体片段,其中包含329个完整型前噬菌体,其与40个已知数据库噬菌体物种以不同百分比匹配上;可疑型噬菌体有66个,其与20个已知数据库噬菌体物种以不同百分比匹配上;不完整型噬菌体有341个,其与52个已知数据库噬菌体物种以不同百分比匹配上,完整型前噬菌体的基因序列显示出与已知的噬菌体物种的序列相似性最高,平均为58.53％;131株大肠杆菌中平均前噬菌体数量为5.6个,平均总含量为152.4 kb.前噬菌体基因组占其宿主基因组的比例分布在0.58％-5.87％,以3.0％为主.前噬菌体基因组长度范围在2.8-107.9 kb,其中13.0 kb的前噬菌体出现的频次最高,占所有前噬菌体的9.1％.CGE比对结果表明,131株多重耐药大肠杆菌的基因组共在18株前噬菌体序列检测到耐药基因mdf(A)、1nu(G)和mcr-1,其中mdf(A)、1nu(G)和mcr-1检出数分别为16、1和1.71株多重耐药大肠杆菌前噬菌体中携带有6种不同的毒力基因,其中存在部分菌株携带2种或者3种毒力基因,有62株前噬菌体携带端粒酶RNA基因terC,16株前噬菌体携带血清存活率增加基因iss,外膜蛋白酶ompT、黏附素基因iha、cvaC和ABC转运蛋白基因mchF分别在2、2、1和1株前噬菌体中检出.mdf(A)和terC分别是前噬菌体中最常见的耐药基因和毒力基因.温和性噬菌体诱导试验结果显

S831.5; ... 噬菌体是地球上最丰富和最多样化的生物实体,其数量是细菌的10～100倍.它们感染易感细菌宿主,并通过转导作用在宿主细胞内繁殖或以前噬菌体形式整合自身基因至细菌基因组中,从而有助于它们在细菌宿主中的繁殖(短期)或进化(长期).利用荧光定量PCR方法(qPCR)对不同环境来源的噬菌体基因进行定量分析,发现其基因组中携带大量的耐药基因(ARG),其中检出率及丰度最高的为耐β-内酰胺抗生素的基因,主要为blaTEM、bla crx-M-groups、blaSHV、blaNDM和blaKPC,以及耐氟喹诺酮类药物的基因qnrA、qnrB和qnrS.且随着高通量测序方法的不断改进,用此方法针对不同样品的宏基因组测序结果分析也同样发现了高水平ARG的存在.这些结果表明噬菌体可能成为潜在的储存载体,促进抗生素耐药性的传播.本文将从荧光定量PCR(qPCR)方法和全基因组测序方法两方面综述全球不同环境样本中噬菌体基因组携带ARG的情况以及其多样性和丰度的研究进展,并讨论其潜在危害性,希望引起更多的关注. več

目的调查产生生物被膜的金黄色葡萄球菌流行病学特征,探究生物被膜形成能力与分子型之间的相关性,为治疗动物金黄色葡萄球菌感染提供理论依据.方法以广东省兽药研制与安全评价重点实验室保存的98株金黄色葡萄球菌为研究对象,用结晶紫半定量法测定所有菌株生物被膜形成能力,将产膜菌株进行22种常见抗菌药的最小抑菌浓度测定,通过金黄色葡萄球菌常见3种(spa、MLST和PFGE)分型方式进行分子分型,并分析产膜能力与分子型之间的相关性,最后通过全基因组测序技术分析生物被膜产生菌株中耐药基因和毒力基因携带状况.结果结晶紫半定量结果显示,98株金黄色葡萄球菌中能产生生物被膜的菌株共计23株,占23.47％.包括牛乳源22株(占比25.29％,22/87),其中14株(占比60.87％,14/22)来自浙江奶牛养殖场,8株(占比39.13％,8/22)来自福建奶牛养殖场,以及猪源1株(占比9.10％,1/11),来自广东屠宰场,说明牛乳源金黄色葡萄球菌产膜潜力高于猪源;将产膜能力划分为强、中、弱3个等级,23株产膜菌株中,其中强产膜菌株2株(占比8.70％,2/23),中产膜菌株9株(占比39.13％,9/23),以及弱产膜菌株12株(占比52.17％,12/23).药敏试验显示,牛乳源产膜菌株对所有受试抗菌药物敏感,而猪源产膜菌株对青霉素、阿莫西林、头孢噻呋、头孢西丁、恩诺沙星、环丙沙星、克林霉素、多西环素、红霉素、氟苯尼考、复方新诺明、泰妙菌素、替米考星13种抗菌药均表现出耐药;spa分型结果显示,98株金黄色葡萄球菌共获得8种spa型,产膜的23株金黄色葡萄球菌占其中3种:1株t2922型来自广东猪源,14株t2119来自浙江牛乳源,8株t189来自福建牛乳源;MLST分型结果显示,98株菌共分为9种ST型,其中6种ST型不具有产生生物被膜的能力,分别为ST398、ST522、ST705、ST1651、ST479和ST151,仅3种ST型的菌株具有生物被膜产生能力,分别为ST9、ST7和ST188.结果表明,强产膜菌株分子型主要为ST7-t2119,中产膜菌株主要为ST7-t2119和ST188-t189,弱产膜菌株为ST9-t2922、ST7-t2119和ST188-t189;同时结合PCA分析不同ST型组间差异性发现,弱产膜菌株的ST型能与中强产膜菌株很好的区分开来,只有特定ST型的金黄色葡萄球菌才具有产生生物被膜

目的研究并比较肌注氟苯尼考在2周龄健康和鸭疫里氏杆菌感染鸭体内的药代动力学特征。方法240只鸭随机分为2组,各120只鸭,其中一组用鸭疫里氏杆菌腿部感染,分别以30 mg·kg~（-1）体重单剂量肌内注射氟苯尼考,采血点为给药前和给药后5、10、15、20、30、45 min和1、1.5、2、4、8、10、14 ... h。采用高效液相色谱法（HPLC）测定血浆氟苯尼考的浓度,采用紫外检测器检测,检测波长为223 nm,流动相为乙腈和水,其体积比为26和74,流速为1 m L·min-1,色谱柱为Agilent C18（4.6 mm×150 mm,5μm）,进样量为20μL。药动学分析软件Win Nonlin 5.2.1以非房室模型拟合处理血药浓度-时间数据,计算相关的药动学参数,并用统计学软件SPSS17.0对药动学参数进行t检验统计学分析。结果氟苯尼考在健康鸭体内的峰浓度（Cmax）为（22.88±3.11）μg·m L-1,表观分布容积（Vd/F）为（2.39±0.81）L·kg~（-1）,体清除率（ClB/F）为（0.64±0.11）L·h-1·kg~（-1）,消除半衰期（t1/2β）为（2.57±0.51）h和药时曲线下面积（AUC）为（47.28±7.87）μg·m L-1·h;氟苯尼考在感染鸭体内的峰浓度（Cmax）为（19.77±1.82）μg·m L-1,表观分布容积（Vd/F）为（2.44±0.46）L·kg~（-1）,体清除率（ClB/F）为（0.63±0.08）L·h-1·kg~（-1）,消除半衰期（t1/2β）为（2.74±0.54）h和药时曲线下面积（AUC）为（48.11±6.62）μg·m L-1·h。统计分析氟苯尼考在健康鸭和感染鸭的药动学参数,结果表明,除了Cmax差异显著（P〈0.05）,其他参数差异均不显著（P〉0.05）。结论两者的主要药动学参数相比较,感染鸭体内的Cmax显著低于（P〈0.05）健康鸭体内的C_（max）,其他参数无显著性差异。氟苯尼考以30 mg·kg~（-1）体重肌内注射在健康和感染鸭体内具有吸收迅速,峰浓度高,体内分布广泛,消除较快的特点。 več

试验旨在建立二甲氧苄啶在猪粪便和尿液中的液相色谱串联质谱检测方法。尿液经乙酸乙酯液液萃取，有机层经氮气吹干、35％乙腈水复溶后上机检测；粪便样品经酸乙酯提取，MCX小柱净化后，洗脱液用氮气吹干，35％乙腈水复溶后上机检测。结果显示：猪粪便和尿液中二甲氧苄啶浓度分别在5～1000μg/L和10～1000μg/L范围内呈现良好的线性关系（r〉0．99），尿液、粪便中二甲氧苄啶的定量限分别为10μg/L和5μg/L，尿液添加浓度为10、100、1000μg/L时的回收率分别为79．6％、84.3％、90．2％，粪便添加浓度为10、100、1000μg／kg时的回收率分别为66．1％、65．1％、54．7％，批间、批内变异系数均小于14％，该方法定量限低，灵敏、准确，符合相关研究的要求。

对目前动物性食品中大环内酯抗生素的残留检测方法进行了研究与探讨，指出有必要进一步完善与发展动物性食品中大环内酯抗生素残留的检测方法。

将白介素-12（Interleukin-12,IL-12）联合雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）作为免疫佐剂,与猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductive and respiratory syndrome,PRRS）弱毒疫苗联合免疫小鼠后,评价其诱导产生的细胞免疫水平,探讨将IL-12和雷帕霉素作为PRRS弱毒疫苗免疫佐剂的可行性。首先将PRRS弱毒疫苗免疫小鼠,然后连续3 ... d注射（包括免疫当天）IL-12和不同剂量的雷帕霉素,通过ELISA试剂盒检测小鼠血清中IFN-γ的含量,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖,通过流式细胞仪检测记忆性CD8＋T细胞比例的变化。结果显示,将IL-12联合低剂量雷帕霉素作为PRRS弱毒疫苗免疫佐剂可明显促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,IFN-γ的分泌,,提高记忆性CD8＋T细胞的数量。说明IL-12联合低剂量雷帕霉素可增强PRRS弱毒疫苗诱导的细胞免疫应答,具有作为免疫佐剂的可行性。 več

【目的】研究并比较泰妙菌素混悬注射液和泰妙菌素注射液在猪体内的药物代谢动力学特征及生物利用度。【方法】7头健康猪,按随机拉丁方设计,进行单次给药剂量（10mg·kg^-1b.w）静注、肌注泰妙菌素注射液和肌注泰妙菌素注射混悬液,高效液相色谱串联质谱法测定猪血浆中泰妙菌素的浓度,罗红霉素作为内标,3P97药动学计算软件处理血浆药物浓度-时间数据。【结果】猪静注给药的药时数据符合无吸收三室开放模型,主要药动学参数为：t1/2β为2.04±0.23h,t1/2α为0.39±0.06h,t1/2π为0.12±0.04h,Vd为8.73±1.83L·kg^-1,AUC为3.78±0.52μg·mL^-1·h^-1,ClB为2.99±0.43L·kg^-1·h^-1）。猪肌注泰妙菌素注射液的药时数据符合一级吸收二室开放模型,主要的药物动力学参数分别为：t1/2Ka（0.06±0.01）h,t1/2β（3.67±0.41）h,Tmax（0.18±0.03）h,Cmax（1.32±0.25）μg·mL^-1,AUC（2.62±0.21）μg·mL^-1·h-^1,生物利用度为73.51%。猪肌注泰妙菌素混悬液的药时数据则符合一级吸收一室开放模型,主要的药物动力学参数为：t1/2Ka（0.04±0.01）h,t1/2Ke（2.90±0.43）h,Tmax（0.27±0.03）h,Cmax（0.7±0.11）μg·mL^-1,AUC（2.80±0.35）μg·mL^-1.h-1,生物利用度为75.73%。t检验比较肌注泰妙菌素注射液和泰妙菌素注射混悬液的主要药动学参数,结果表明,两者除达峰浓度Cmax有显著差异外,AUC、t1/2Ka、Tmax、t1/2Ke和生物利用度均无显著性差异。【结论】泰妙菌素注射混悬液肌注后在猪体内具有吸收迅速,体内分布广,达峰迅速,消除较快的药动学特征。

Q142%Q93; ... 为了评价恩诺沙星(enrofloxacin)对土壤微生物群落的影响,借助BIOLOG检测法比较了不同浓度恩诺沙星影响下的土壤微生物的群落特征.结果表明,各添加药物组与空白对照组的土壤微生物群落代谢多样性差异显著(P＜0.05),空白对照组土壤微生物在BIOLOG微平板上的平均每孔颜色变化率(AWCD)和微生物代谢多样性指数(丰富度和多样性)显著高于添加药物组;药物显著影响微生物群落对BIOLOG微平板中碳源的利用能力,较低浓度的恩诺沙星(0.01 μg/g)就显著影响了土壤微生物群落对α-Ketobutyric Acid、L-Phenylalanine、1-Erythritol、D-Xylose等碳源的利用代谢能力(P＜0.05),且土壤微生物群落利用各类碳源的能力随药物浓度加大而降低.由此可见,恩诺沙星在土壤中残留时对土壤微生物的影响不容忽视. več

利用高效液相色谱分离、电喷雾-线性离子阱质谱法（LC-ESI/LTQ）、电喷雾-离子阱/飞行时间串联质谱法（LC-ESI/IT-TOF）鉴定鸡血浆中乙酰甲喹及其代谢物的结构。分别采用Hypersil Gold和Symmetry ... ShieldTM色谱柱,以含有0.01%甲酸水溶液（A）和甲醇（B）为流动相,梯度洗脱,电喷雾离子源（ESI）正离子模式进行检测。鸡口服给药乙酰甲喹（20mg/kg）后,翅下静脉采血,待分析血浆用乙腈-乙酸乙酯（3：2,V/V）混合液提取,吹干。残渣用30%甲醇水溶液复溶,上机检测。用Shimadzu′s Composition分子预测软件推测分子离子及其子离子质量,Xcalibur2.0.7软件分析线性离子阱质谱仪测得质谱图。鉴定出5种主要代谢物,分别为3-甲基-2-（1-羟基）乙基-喹啉-N1,N4-二氧化物（M1）、3-甲基-2-（1-羟基）乙基-喹啉-N4-一氧化物（M2）、3-甲基-2-乙酰基-喹啉-N4-一氧化物（M3）、3-甲基-2-乙酰基-喹啉（M4）和3-羟甲基-2-（1-羟基）乙基-喹啉-N1,N4-二氧化物（M5）。同时根据推测结果对代谢物M1～M4进行化学合成,利用合成代谢物的谱学测定数据进一步确证推测代谢物的化学结构。本实验为研究乙酰甲喹体内代谢产物及代谢机理提供了便捷而有效的模式。 več