Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- niepublikowana praca doktorska- promotor: Piotr Kowalski- All metadata published by Europeana are available free of restriction ...under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- Praca wykonana w Katedrze i Zakładzie Biologii i Genetyki- All metadata published by Europeana are available free of restriction ...under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Metoda komete je brza, jednostavna i osjetljiva genotoksikološka metoda za mjerenje stupnja oštećenja DNK molekule u pojedinačnim stanicama bilo koje životinjske ili biljne vrste i tkiva. Rezultati ...elektroforeze cijeloga staničnoga genoma (koji poprima oblik repa kometa) obraduju se računalom, analizom denzitometrijskih i geometrijskih parametara koji opisuju cijelu pojavu kometa. Optička gustoća kometa, obojenog fluorescentnom bojom rabi se za kvantifikaciju sadržaja DNK i definira stupanj oštećenja DNK. Mogućnost uporabe ove metode u raznim područjima daje joj veliki potencijal kako u istraživanjima genotoksičnih tvari za čovjeka tako i u istraživanjima onečišćenja okoliša.
Fazeolin je glavni skladišni protein graha. Sastoji se od kompleksa heterogenih glikoproteina s različitim sastavom polipeptida, koje kodira porodica gena. Analizom fazeolina jednodimenzionalnom ...elektroforezom (SDS-PAGE) mogu se dobiti podaci o raznolikosti divljih i kultiviranih sojeva graha. U ovom su radu detaljano opisani rezultati analize fazeolina, izoliranog iz kultiviranih sojeva graha s različitih područja uzgoja (središnje Amerike i Anda), dobivenih dvodimenzionalnom elektroforezom (2-DE) i masenom spektrometrijom. Visokokvalitetni 2-DE gelovi otkrili su vrlo složenu strukturu fazeolina u svim kultivarima. Uzorci fazeolina iz jednog kultivara bili su vidljivi u obliku horizontalne linije, sastavljene od parova elektroforetskih točaka koje predstavljaju uzorke s različitim izoelektričnim točkama i molekularnim masama. Stupanj sličnosti uzoraka fazeolina procijenjen je prema postotku točaka koje su zajedničke paru kultivara. Analizom proteomske udaljenosti tipova fazeolina pomoću nemetričke multidimenzionalne skale otkriveno je da su 2-DE profili fazeolina sličniji u kultivarima što potječu iz istoga genetskog izvora. Veća je razlika bila među kultivarima podrijetlom iz Anda. Rezultati analize genetičkih varijacija PCR SCAR markera fazeolina izoliranog iz sjemena bili su u skladu s podacima dobivenim dvodimenzionalnom elektroforezom, a osigurali su dodatne informacije o razlikama među kultivarima. Nadalje, istražena je molekularna osnova složenosti 2-DE uzoraka fazeolina. Identifikacijom elektroforetskih točaka fazeolina na 2-DE gelovima pomoću MALDI-TOF i MALDI-TOF/TOF MS otkriveno je da svaki par točaka sadržava samo jedan tip (α ili β) polipeptida fazeolina, te da su α-polipeptidi imali veću molekularnu masu, a β-polipeptidi manju. Usto, djelomičnom i cjelovitom deglikozilacijom ekstrakata proteina pomoću enzima PGNaza F utvrđeno je da su razlike između elektoroforetskih točaka svakoga para donekle uvjetovane glikozilacijom istoga tipa polipeptida. Dobiveni podaci pridonose istraživanju genetičke različitosti populacije graha, što je posljedica prisutnosti različitih tipova fazeolina u sjemenkama.
Uvod: Dvodimenzionalna gel-elektroforeza (2-DE) metoda je analize kompleksnih proteinskih smjesa izdvojenih iz stanica, tkiva, tjelesnih tekućina ili drugih bioloških uzoraka, koja objedinjuje dva ...različita elektroforetska postupka: izoelektrično fokusiranje i SDS-poliakrilamidnu gel-elektroforezu.
Metode: U ovom radu ispitan je utjecaj četi riju različiti h pufera na proteomske profile dviju staničnih linija karcinoma kolona, SW 620 i HCT 116 uzgojenih klasičnim metodama
uzgoja stanica in vitro uz pomoć metode 2-DE, u pH rasponu 3 – 10 NL, te rasponu molekulskih
težina od 14 do 100 kDa.
Rezultati : Dobiveni rezultati pokazuju kako se pojedini puferi
međusobno razlikuju po prirodi proteina koji su specifi čno otopljeni, što je djelomično ovisilo i o staničnoj liniji.
Diskusija: Topljivost proteina jedan je od najvećih problema pri korištenju 2-DE, što naročito dolazi do izražaja kod hidrofobnih membranskih proteina, proteina jezgre i proteina izrazito sklonih agregaciji. Jedan od načina poboljšanja topljivosti proteina je i opti mizacija pufera za izdvajanje proteina, pri čemu se u pufer dodaju zwitt er-ionski amfi fi lni surfaktanti poput CHAPS, SB 3-10 (kaprilil sulfobetain) i ASB-14, te uporabom ti ouree u kombinaciji s ureom. Gelovi dobiveni uz pomoć pufera koji sadrži CHAPS imali su najbolju rezoluciju i na njima je bilo moguće detekti rati najveći broj jedinstvenih proteinskih vrsta obiju ispitanih staničnih linija.
Zaključak: Postupkom opti mizacije pripreme uzorka za analizu mehanizama učinka novosinteti ziranog protutumorskog spoja na razini proteoma uz pomoć 2-DE pokazano je kako je pufer sastava 7M urea + 2M ti ourea + 4% (w/v) CHAPS opti malan pufer za izolaciju i razdvajanje smjese proteina dobivene iz tumorskih staničnih linija kolona HCT-116 i SW 620.
Ascaris lumbricoides i Ascaris suum bili su analizirani radi utvrđivanja sličnosti i razlike u elektroforetskoj pokretljivosti proteina iz njihove kutikule i spolnih organa. U obje vrste dokazana je ...znatna sličnost proteinskoga profila. Elektroforezom iscrpka kutikule ženki ustanovljeno je deset zajedničkih vrpci za obje vrste, dok je elektroforezom proteina kutikule mužjaka dobiveno 12 zajedničkih vrpci proteina od čega je najmanje pet proteina bilo zajedničko za oba spola. Usporedbom proteinskoga profila spolnih organa ženki i mužjaka obiju vrsta dokazane su također mnoge sličnosti. U proteinskomu profilu vrste Ascaris lumbricoides dokazano je 11 proteinskih traka dok je u proteinskomu profilu vrste Ascaris suum dokazano 12 vrpci, od čega je šest bilo zajedničkih. Elektroforezom proteinskih iscrpaka spolnih organa i kutikule mužjaka dokazano je osam zajedničkih proteinskih vrpci, dok su istom usporedbom proteinskoga profila ženki dokazane samo dvije zajedničke proteinske vrpce. Nalaz proteinskih vrpci od 25 kDa, 20-21 kDa i 18 kDa gotovo u svim pretraženim proteinskim ekstraktima govori o njihovoj velikoj važnosti te mogućoj upotrebi u svojstvu markera. Dokazane sličnosti u sastavu proteinskih ekstrakata u askarida izdvojenih iz ljudi i svinja govori o njihovoj bliskoj genetskoj srodnosti. S obzirom na ove nalaze i ranija istraživanja koja upućuju na zoonotsku prirodu askaridoze i veliku mogućnost križnih invazija ljudi i svinja, treba donijeti kontrolne mjere za istodobno dehelmintizaciju invadiranih ljudi i svinja. Vjerojatnost križne invazije ljudi i svinja vrstama roda Ascaris treba procijeniti na
osnovi pretraga na askaridozu u mjestima gdje se svinje još uvijek drže po dvorištima. Ovo je prva analiza proteinskoga profila vrsta roda Ascaris na Filipinima.
Premda su poznati već neko vrijeme, esteri gama-butirobetaina (GBB) i srodni spojevi nisu dobili mnogo pozornosti u znanstvenoistraživačkoj zajednici, a njihova fiziološka funkcija i dalje je ...nerazjašnjena. U ranijem smo istraživanju HPLC-metodom otkrili enzimsku aktivnost GBB-esteraze u serumu štakora rabeći umjetni supstrat ovoga enzima, tj. fenilirani gama-butirobetain. Cilj ovoga istraživanja bio je razviti pretragu koja će omogućiti spektrofotometrijsko ili kolorimetrijsko određivanje reakcijskih produkata nastalih aktivnošću GBB-esteraze te utvrditi koji pojedinačni proteini u serumu štakora posjeduju aktivnost GBB-esteraze. U tu je svrhu sintetiziran gama-butirobetain 1-naftil ester. Njegovom hidrolizom otpušta se 1-naftol koji povećava optičku apsorbanciju na 322 nm. Pokazali smo da u hidrolizi GBB 1-naftil estera u 1-naftol u serumu štakora sudjeluje GBB-esteraza. Pokušali smo pročistiti enzim iz štakorskoga seruma. Kombinacijom DEAE sefaroze pri pH 4,2 i afinitetne kromatografije s prokainamidom dobili smo 68-erostruko povećanje aktivnosti ovoga enzima. Razdvajanjem bjelančevina iz frakcije s pomoću 2D elektroforeze te naknadnom spektrometrijom masa utvrđeno je da u serumu štakora esteraznu aktivnost prema gama-butirobetainu kao supstratu djelomice provodi karboksilesteraza.
Uvod: Dijagnostički pristup bolesniku koji istodobno boluje od nasljedne hemokromatoze i beta-talasemije može biti dosta složen zbog činjenice da teži oblici beta-talasemije sami po sebi mogu imati ...za posljedicu hemokromatozu. S druge strane, i najlakši oblik beta-talasemije može dovesti do ozbiljnih manifestacija hemokromatoze u bolesnika s heterozigotnim oblikom HFE polimorfizama. Ova stanja, kao i HFE polimorfizmi naslijeđeni u homozigotnom obliku kao rizični čimbenici za razvoj hemokromatoze mogu imati za posljedicu cirozu jetre i hepatocelularni karcinom pa pravodobno prepoznavanje navedenih stanja ima presudno značenje za dužinu i kvalitetu bolesnikova života.
Metode: Za prikaz slučaja izabran je bolesnik primljen na Kliniku za zarazne bolesti Kliničke bolnice Osijek s febrilitetom, hepatosplenomegalijom i neurološkim simptomima. Kod prijma su učinjene osnovne laboratorijske pretrage te ultrazvučni pregled abdomena i snimanje glave magnetskom rezonancijom. Naknadno je provedena biopsija jetre, elektroforeza hemoglobina te određivanje koncentracije haptoglobina i utvrđivanje Cys282Tyr polimorfizma HFE gena.
Rezultati: Anamnestički podaci i rezultati rutinske laboratorijske obrade su ukazali na mogućnost da bolesnik boluje od beta-talasemije. Proširenom laboratorijskom obradom je dijagnosticirana pigmentna ciroza-hemokromatoza, a potvrđena je dijagnoza beta-talasemije minor. Odgovarajući moleularno-dijagnostički postupak je dokazao prisutnost homozigotnog oblika nasljedne hemokromatoze.
Zaključak: Određivanje koncentracije feritina i zasićenje transferina željezom, elektroforeza hemoglobina i utvrđivanje polimorfizma Cys282Tyr HFE gena pokazali su se ključnim čimbenicima za relativno brzo postavljanje ispravne dijagnoze u prikazanom slučaju istodobnog nasljeđivanja beta-talasemije minor i homozigotnog oblika nasljedne hemokromatoze. Homozigotni oblik nasljedne hemokromatoze uz beta-talasemiju minor objašnjava težinu simptoma prisutnih kod bolesnika u vrijeme hospitalizacije.
Provider: - Institution: University of Zagreb. Faculty of Pharmacy and Biochemistry. Department of pharmaceutical analysis. - Data provided by Europeana Collections- Kardiovaskularne bolesti su ...vodeći uzrok smrtnosti u svijetu, a jednim od glavnih rizičnih čimbenika za njihov razvoj smatra se hiperlipidemija. Postoji nekoliko skupina hipolipemika, a najvažniji su statini, jedni od najčešće propisivanih lijekova uopće. Oni djeluju kao reverzibilni kompetitivni inhibitori HMG-CoA reduktaze, enzima koji katalizira limitirajući korak u biosintezi kolesterola. Svi statini još uvijek nemaju službene farmakopejske monografije, pa postoji velika potreba za razvojem analitičkih metoda za njihovu identifikaciju i određivanje sadržaja u aktivnim ljekovitim tvarima i gotovim ljekovitim oblicima. Terapija statinima je svakodnevna i dugoročna, pa je procjena njihove čistoće od velikog značaja, odnosno razvoj selektivnih i osjetljivih metoda za karakterizaciju, identifikaciju i određivanje sadržaja onečišćenja je neophodan.
Crvena fermentirana riža sadrži 14 monakolina koji imaju hipolipemički učinak, a najvažniji je monakolin K, poznat kao lovastatin. Na tržištu se nalaze brojni dodaci prehrani s crvenom fermentiranom rižom. Nažalost, nadležne nacionalne agencije diljem svijeta upozoravaju na lošu kvalitetu dodataka prehrani te potrebu za njihovim pojačanim nadzorom i redovitom kontrolom.
Cilj ovog istraživanja stoga je bio razviti nove, brze, selektivne, osjetljive, precizne i točne analitičke metode za identifikaciju i određivanje sadržaja statina, karakterizaciju i kvantifikaciju onečišćenja atorvastatina, najčešće korištenog lijeka iz skupine statina, te određivanje aktivnih i toksičnih sastavnica crvene fermentirane riže. U radu su korištene sofisticirane analitičke tehnike: kapilarna elektroforeza (CE), tekućinska kromatografija visoke djelotvornosti (HPLC) i masena spektrometrija (MS). Ukupno je razvijeno, validirano i uspješno primijenjeno 6 novih analitičkih metoda. Predložena CE metoda predstavlja jedinstvenu brzu analitičku metodu za analizu bilo kojeg od šest statina registriranih u Europskoj uniji. Određen je sadržaj četiriju onečišćenja atorvastatina te je strukturno karakterizirano i identificirano još osam prisutnih onečišćenja primjenom HPLC-DAD-MSn metode. Rezultati provedene analize proizvoda s crvenom fermentiranom rižom pokazuju značajna odstupanja u sadržaju lovastatina od deklariranih vrijednosti te između pojedinih serija proizvodnje, što upućuje na potrebu za strožom, detaljnijom i češćom kontrolom, u svrhu osiguranja djelotvornog, sigurnog i kvalitetnog proizvoda.- Cardiovascular diseases are the leading cause of death in the world and one of the major risk factors for their development is considered hyperlipidemia. Statins are most commonly used drugs in the treatment of hyperlipidemia, and are one of the most often prescribed drugs in general. Statins act by competitively inhibiting HMG-CoA reductase, the rate limiting enzyme in the cholesterol biosynthesis. Not all statins have official pharmacopoeia monographs, so new analytical methods for their identification and determination in active pharmaceutical ingredients and finished drug products are highly required. Statin therapy is long-term and they are used on daily basis, so their purity assessment is of great importance. Hence, development of selective and sensitive methods for characterization, identification and determination of their impurities is indispensable.
Red fermented rice contatins 14 monacolins with hypolipemic effect, and the most important one is monacolin K, also known as lovastatin. There are numerous dietary supplements containing red fermented rice on the market. Unfortunately the relevant national agencies around the world warn of dietary supplements' poor quality and the need for their increased supervision and regular inspection.
Therefore, the aim of this research was to develop new, fast, selective, sensitive, precise and accurate analytical methods for the identification and determination of statins, characterization and quantification of atorvastatins impurities, which is the most commonly used statin drug, and determination of active and toxic ingredients in red fermented rice. Highly sophisticated analytical techniques were used: capillary electrophoresis (CE), high performance liquid chromatography (HPLC) and mass spectrometry (MS). In total 6 new analytical methods were developed, validated and successfully applied. The proposed CE method represents a universal fast analytical method for the analysis of any of the six statins registered in the European Union. The content of four atorvastatin impurities was determined and eight other impurities were structurally characterized and identified by HPLC-DAD-MSn method. The results of the red fermented rice products analysis indicated significant deviations in lovastatin content from declared values and among different batches. This suggests the need for tighter, more detailed and more frequent control in order to ensure effectiveness, safety and quality of these products.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Uvod: Urođena bisalbuminemija je rijetka bolest, najčešće prisutna u benignom obliku, dosad opisivana u nekoliko patoloških stanja. Već su opisane dvije genske varijante kod dvije hrvatske obitelji. ...U ovom radu izvještavamo o novom slučaju bisalbuminemije kod bolesnika iz Hrvatske sa sarkoidozom.
Metode: Bolesnik je, od strane liječnika opće prakse, upućen u KB „Sestre milosrdnice" na dijagnostički pregled pod sumnjom nasarkoidozu. Napravljena je kapilarna elektroforeza proteina u serumu s automatiziranim uređajem za kapilarnu elektroforezu.
Rezultati: Temeljem laboratorijskih i patoloških nalaza potvrđena je sarkoidoza. Elektroforezom u serumu otkrivene su dvije različ ite frakcije albumina. Dodatna frakcija albumina bila je sporo migrirajuća. Ta sporo migrirajuća frakcija činila je 0,48, a normalna 0,51 ukupnog albumina. Sestra bolesnika također je imala bisalbuminemiju.
Zaključak: Ovo je novi slučaj urođene bisalbuminemije kod bolesnika sa sarkoidozom. Ima li bisalbuminemija ikakve veze sa sarkoidozom, potrebno je tek razjasniti. Svaki slučaj pojave urođenih ili stečenih frakcija albumina trebao bi probuditi pažnju medicinskih biokemičara i kliničara, jer bi mogao pružiti uvid u evoluciju proteina kao i u fizičke, kemijske i molekularne karakteristike albumina.
PDF
