U ovome in vitro istraživanju testiran je reaktivacijski potencijal triju reaktivatora acetilkolinesteraze (AChE; EC 3.1.1.7) dobivenih iz monokvaternog reaktivatora pralidoksima. Testirani su ...sljedeći spojevi: 4-karbamoil-2-aldoksim-1-metilpiridinijev jodid (TO231), 4-etoksikarbonil-2-aldoksim-1-metilpiridinijev jodid (TO237) te 5-etoksikarbonil-2-aldoksim-1-metilpiridinijev jodid (TO238). Za usporedbu su uzeti pralidoksim i obidoksim. Kao inhibitori kolinesteraze rabljeni su živćani otrov ciklosarin i pesticid klorpirifos. Izvor acetilkolinesteraze bio je homogenat mozga štakora. Nijedan od testiranih oksima nije uspio reaktivirati acetilkolinesterazu inhibiranu ciklosarinom pri koncentraciji oksima od 1.0 mmol L-1. Kod inhibicije klorpirifosom TO231 pokazao se najsnažnijim reaktivatorom acetilkolinesteraze s reaktivacijom od 82 % pri koncentraciji oksima od 1.0 mmol L-1. Ovaj reaktivacijski potencijal jednak je onomu pralidoksima i obidoksima. Slabiju je djelotvornost iskazao TO238, a TO237 nije uspio reaktivirati acetilkolinesterazu inhibiranu klorpirifosom. Stoga nijedan od testiranih spojeva (uključujući i referentne oksime) ne može služiti kao univerzalni reaktivator acetilkolinesteraze inhibirane klorpirifosom i ciklosarinom.
Pozadina istraživanja. Bršljanolisna tikva (Coccinia grandis L.) tradicionalno se koristi za liječenje dijabetesa. S obzirom na to da njezin učinak i mehanizam djelovanja još nisu detaljno ispitani, ...svrha je ovog istraživanja bila procijeniti antidijabetički i citotoksični učinak bioaktivnih fitospojeva iz C. grandis, te optimirati postupak njihove ekstrakcije za industrijsku primjenu, radi postizanja što većeg prinosa.
Eksperimentalni pristup. Ispitivanje in silico je provedeno da bi se predvidio afinitet vezanja fitospojeva iz bršljanolisne tikve na α-amilazu i α-glukozidazu uključene u patofiziologiju dijabetesa, te procijenila njihova farmakokinetička svojstva. Metoda odzivnih površina korištena je za određivanje optimalnog ukupnog udjela fenola, flavonoida i tanina te antioksidacijske aktivnosti u 17 pokusa u kojima su korišteni različiti parametri ekstrakcije potpomognute mikrovalovima, i to temperatura (50–70 °C), snaga mikrovalova (400–1000 W) i trajanje ekstrakcije (15–45 min). Fitospojevi su pročišćeni i identificirani kromatografijom u stupcu, tankoslojnom kromatografijom (TLC), UV-vidljivom spektroskopijom, infracrvenom spektroskopijom s Fourierovom transformacijom (FTIR) te tekućinskom kromatografijom spregnutom sa spektrometrijom masa (LC-MS). In vitro antidijabetička aktivnost određena je testom inhibicije α-amilaze i α-glukozidaze, dok je citotoksičnost ispitana mjerenjem hemolitičke aktivnosti, testom redukcije 3-4,5-dimetiltiazol-2-il-2,5-difenil tetrazolij bromida i određivanjem toksičnog učinka fitospojeva na korioalantoisnu membranu jajeta.
Rezultati i zaključci. Spomenuti glavni bioaktivni spojevi imali su izvrstan afinitet vezanja na α-amilazu i α-glukozidazu u rasponu od 14,28 do 36,12 kJ/mol, dobra farmakokinetička svojstva i nisku do srednju toksičnost. Utvrđeno je da su ekstrakcijom potpomognutom mikrovalovima dobiveni veliki udjeli bioaktivnih sastojaka, kao što su ukupni fenoli, flavonoidi i tanini, izražene antioksidacijske aktivnosti (inhibicije DPPH i FRAP), i to ovisno o parametrima ekstrakcije, pri čemu su optimalni uvjeti bili temperatura od 55 °C, trajanje ekstrakcije od 45 min i snaga mikrovalova od 763 W. Šesnaest spojeva identificirano je na osnovu FTIR i LC-MS spektara u biljnom uzorku nakon preliminarne identifikacije, pročišćavanja i tankoslojne kromatografije. Postotak inhibicije enzima ovisio je o koncentraciji ekstrakta (7,81–125 µg/mL) i bio je veći od postotka inhibicije akarbozom. Hemolitička aktivnost bila je u skladu s ISO standardima, a niska toksičnost ekstrakata uočena je u MTT i CAM testovima u rasponu koncentracija ekstrakta od 7,81 do 125 µg/mL, što upućuje na njegovu moguću uporabu kao lijeka protiv dijabetesa te u razvoju funkcionalne hrane.
Novina i znanstveni doprinos. Rezultati istraživanja pružaju nove mogućnosti za istraživače, znanstvenike i poduzetnike u prehrambenom i farmaceutskom sektoru pri razvoju antidijabetičke hrane i lijekova koji pomažu dijabetičarima da bolje kontroliraju razinu šećera u krvi i održe cjelokupno zdravlje.
U novije vrijeme proizvodnja i potrošnja kiselog mlijeka i ostalih fermentiranih proizvoda je porasla kako u našoj tako i u drugim zemljama. Usporedo s porastom potrošnje raste i potreba tržišta za ...visokokvalitetnim fermentiranim proizvodima, uopće.
Razrađena je terenska metoda za dokazivanje organofosfornih spojeva u vodama, koja se osniva na kinetici inhibicije kolinesteraza. U metodi se rade sljedeće reagencije: lifolizirani serum čovjeka kao ...izvor enzima, butiriltiokolin kao stupstrat i DTNB kao tiolni reagents. Garnitura test-reagencija sadržava i pufer i destiliranu vodu. Enzim i potencijalno kontaminirana voda inhibiraju SP 15 min prije dodatka supstrata, a zatim se tijekom 5-10 min prati nastajanje žute boje. Ako je voda kontaminirana organofosfornim spojevima, onda će otopina biti bezbojna ili svijetložuta u odnosu na kontrolni uzorak, koji će imati intenzivno žutu boju. U kontrolnom uzorku enzim se inkubira s destiliranom vodom. Granice detekcije za nervne bojne otrove su (µg/L): Soman 0,12, VX 5,9, Sarin 9,9 i Tabun 26. Granica detekcije za organofosforni pesticid diklorvos: 50 µg/L.
