Rezultati iskanja

为了建立传染性法氏囊病病毒反向遗传系统，应用PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5’末端和3’末端分别引入T7启动子和核酶HDV序列，然后分别将含有T7启动子和核酶HDV序列的A、B节段构建到载体PT—Pluc当中，构建感染性载体PTmA和PT—mB．在脂质体介导下将PT—mA和PT—mB共转染经痘病毒vTF7—3（含T7RNA聚合酶基因，能稳定表达T7RNA聚合酶）预先感染1h的vero细胞．细胞病变观测、间接免疫荧光试验、电镜观察和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救．

以氯乙酰化聚苯乙烯微球载体为大分子引发剂,以甲基丙烯酸缩水甘油酯和亲水性丙烯酰胺为共聚接枝单体,以氯化亚铜及2,2′-联吡啶为催化体系,采用原子转移自由基聚合法接枝合成了具有柔性链的亲水梳状环氧聚合物载体PS-acyl-P（AM-co-GMA）,并将其用于耐有机溶剂YCJ01脂肪酶的共价柔性固定化.结果表明,固定化酶催化对硝基苯酚棕榈酸酯水解的最适温度为45~55oC,pH=8.5,此时酶活为16.6U/g;在80oC以下,pH=5~10时,酶的活性稳定;连续进行7次间歇操作,固定化酶保留初始活性的73.5%;于4oC保存60d,酶活仍剩余86.8%.经亲水梳状环氧载体柔性固定化后,该脂肪酶对有机溶剂的耐受性有所提高.

目的 研究胃癌组织中野生型和突变型dna聚合酶β在dna修复过程中的作用,为进一步探讨肿瘤的病因发病学奠定基础.方法 采用聚合酶链反应(pcr)和分子克隆技术,以野生型和突变型dna聚合酶β基因为模板,扩增后构建pgem-t-polβ克隆载体,经pcr筛选,亚克隆于pet28a(+)表达载体中,并转化至大肠杆菌bl21(de3)感受态细菌,经诱导剂异丙基-β-d-硫代半乳糖苷( ... iptg)诱导表达后,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白.设计3条单链dna引物,退火合成含有单碱基缺失的dna底物,与纯化蛋白共做碱基切除修复(ber)实验,最后琼脂糖凝胶电泳鉴定.结果 成功构建了pet28a(+)-polβ重组表达载体；在ber实验中,野生型dna聚合酶β能够在dna底物的酶切位点处将其切开,突变型dna聚合酶β不能或部分将其切开.结论 野生型dna聚合酶β能够修复单碱基缺失的dna底物,而突变型dna聚合酶β在碱基缺失修复过程中的作用丧失或减弱. več

目的：确定一个种特异性的实时聚合酶链反应（PCR）法检测绿脓杆菌（PA）,一个可能提供给其他细菌病原体通用目标的用于PA的次一级目标DNA,并验证这种用于诊断测试的检测方法.方法：利用已知PA的角膜炎株建立对ecfX PA基因和16S rRNA基因的PCR检测.两个实验的结果参数是＂检测限＂（LOD）,扩增效率（AE）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）扩增产物分析.两种检测方法通过对20例PA ... DNA阳性的真阳性临床标本和20例不含有PA DNA的真阴性样品的检测进行了验证.描述性统计和PAGE分析用作为结果参数.结果：通过ecfX检测的AE为96.6%,而LOD为每微升33.6目标DNA拷贝.16S rRNA检测的AE为103.4%,而LOD为每微升8.12拷贝.ecfX和16S rRNA 检测的敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值,效率分别为（75%,95%,94%,79%和85%）,及（70%,100%,100%,77%和85%）.这两种PCR方法经过了验证,通过了PAGE分析的DNA图谱确认.结论：这里描述的PCR方法可能是对PA角膜炎标准诊断方法的一种有用的辅助检测. več

目前临床用血多为成分输血，成分血分离自全血，不可避免会残留少量白细胞或血小板。而有核细胞或血小板表面存在的HLA会随着输血进入患者体内，异体HLA抗原可对患者的HLA分型判定产生干扰。

目的建立检测创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的实时荧光定量PCR方法,为气性坏疽的早期快速诊断提供新手段。方法以产气荚膜梭菌16SrDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物及探针,以PCR扩增产物重组质粒作为定量检测的标准品,绘制标准曲线。对荧光定量PCR体系和反应条件进行优化,并验证方法的特异性、敏感性、重复性及临床应用的可行性。结果所建立方法检测产气荚膜梭菌具有高度特异性,与创伤弧菌等23种相关细菌均无交叉反应。检测灵敏度以纯菌计达9×102cfu/ml,相当于9cfu/反应。反应体系具有很高的稳定性。整个操作过程仅需3h。5例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养完全一致。结论本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可用于创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的日常检测以及战时和突发事件时的批量应急诊断。

心脏型脂肪酸结合蛋白（Heart fatty acid binding acid,H-FABP）、脂肪型脂肪酸结合蛋白（Adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP）和细胞外脂肪酸结合蛋白（Extracellular fatty acid binding ... protein,Ex-FABP）对鸡肌内脂肪性状的影响越来越引起研究者的关注.在总结、回顾近年来鸡肌内脂肪性状研究进展的基础上,从H-FABP、A-FABP、Ex-FABP基因功能、基因单核苷酸多态性以及两基因聚合基因型效应等方面,详细介绍和阐述了其与肌内脂肪含量的关系,并提出未来鸡肌内脂肪性状的3个重要候选基因研究需要解决的问题,对鸡肌内脂肪性状的3个重要候选基因的研究进行综述,为优质鸡的遗传育种工作提供新的思路和突破口. več

目的观察消栓肠溶胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠远隔脑区星形胶质细胞活化及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cystein-aspartate protease 3,Caspase-3）及其底物多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP）表达的影响。方法线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,雄性SD大鼠90只随机分成假手术组、模型组、消栓肠溶胶囊（420 ... mg/kg、140 mg/kg、47 mg/kg）组、阳性对照药脑心通胶囊（600 mg/kg）组,每组15只,连续灌胃给药15 d,每天给药1次。分别在术后3 d、7 d、12 d、15 d检测前肢抓握力量;术后15 d采用免疫荧光染色结合图像分析技术检测海马胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）和Caspase-3、PARP的表达。结果大鼠大脑中动脉栓塞第3天、第7天、第12天、第15天前肢抓握力量均较同时间段假手术组大鼠减小,差异具有显著性（P〈0.01）;大脑中动脉栓塞第15天,大鼠远隔脑区海马GFAP、PARP表达增强,Caspase-3阳性细胞增多,差异均较假手术组明显（P〈0.05）。消栓肠溶胶囊420 mg/kg治疗后,大脑中动脉栓塞第7天大鼠前肢抓握力量增加;消栓肠溶胶囊140 mg/kg组大鼠大脑中动脉栓塞第12天前肢抓握力量增强;大脑中动脉栓塞第15天,消栓肠溶胶囊420 mg/kg、140 mg/kg、47 mg/kg组和脑心通胶囊组大鼠前肢抓握力量均提高,差异均较模型组显著（P〈0.05）。和模型组相比,消栓肠溶胶囊（420 mg/kg、140 mg/kg、47mg/kg）组大鼠海马GFAP、PARP阳性表达强度降低（P〈0.01）,Caspase-3阳性细胞数减少,差异均较模型组明显（P〈0.05或P〈0.01）。脑心通胶囊也可明显下调大鼠海马GFAP、PARP表达,和模型组比较差异具有显著性（P〈0.01）。结论消栓肠溶胶囊可通过抑制星形胶质细胞异常活化,抑制Caspase-3、PARP凋亡信号分子激活,保护缺血远隔脑区。 več

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值，评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针，PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素，建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法，并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测，评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板，PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0，6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4，7％和4．1％-4，9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862），当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％，其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度，且节省操作时间、降低实验成本，有望成为PCa早期诊断的有效方法。

以苯甲酸为模板分子,4-乙烯基吡啶为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,采用本体聚合法制备了高选择性识别的分子印迹聚合物。利用合成的聚合物作为吸附剂填充制备气体浓缩针装置,并用于挥发性有机化合物（VOCs）的气相色谱分析。实验结果表明：60℃下恒温聚合反应6h,模板分子、功能单体、交联剂的物质量比为1∶4∶20,预聚合时间为3h,溶剂为乙腈,模板分子为苯甲酸时,合成的分子印迹聚合物对苯系物的吸附量最大。