Enhancement Of Dermal Fibroblast Isolation Method Zaric, Milan; Nikolic, Ivana; Zelen, Ivanka ...
Serbian Journal of Experimental and Clinical Research,
3/2015, Letnik:
16, Številka:
1
Journal Article
Recenzirano
Odprti dostop
ABSTRACT
Cultivated fibroblasts have been widely used in a large number of in vitro studies. Although they readily proliferate under cell culture conditions, improvements in methods for their ...isolation are necessary. Here, we present our modified enzyme digestion method and compare its efficiency with commonly used techniques.
Three foreskin samples from young, middle-aged and old donors were used. The classical explant, standard enzyme digestion method with collagenase and our improved enzyme digestion method were compared for efficiency of fibroblast isolation and the time needed to achieve 95% confluence in a 30-mm Petri dish.
The explant method was the slowest to achieve fibroblast confluence, especially with the tissues from the older donors (up to 23 days). With the standard enzyme digestion method, the skin tissue was partially digested, but the fibroblasts reached confluence much faster (the younger donor cells needed approximately 7 days to reach confluence). Our modified “mixed” enzyme digestion method was the fastest (the fibroblasts from the younger donors needed up to 5 days to reach confluence).
For studies requiring the primary isolation and cultivation of dermal fibroblasts, the best method to achieve this goal is the tissue digestion method with the multiple enzyme solution.
Cilj rada: Odrediti učestalost infekcija uzrokovanih M. hominis i U. urealyticum u KBC-u Split od 1.1.2020. do 31.12.2020. te odrediti osjetljivost navedenih izolata na antibiotike u istom ...periodu.Materijali i metode: Istraživanje je obuhvatilo podatke o pacijentima s dokazanom M. hominis ili U. urealyticum u navedenom razdoblju. Podatci su prikupljeni u Kliničkom zavodu za mikrobiologiju i parazitologiju, Kliničkog bolničkog centra (KBC) Split. Kao dijagnostička metoda koristio se komercijalni set za kultivaciju urogenitalnih mikoplazmi MYCOFAST RevolutioN, podijeljen u dvije faze testiranja.Rezultati: Klinički zavod za mikrobiologiju i parazitologiju u Splitu zaprimio je 638 uzoraka iz urogenitalnog trakta sumnjivih na infekciju urogenitalnimi mikoplazmama. Od toga je u 7% (ukupno 45 uzoraka) dokazana U. urealyticum te u 0,5% (ukupno 3 uzorka) M. hominis. Ureaplazme najčešće uzrokuju infekcije spolnog sustava i to u žena u generativnoj dobi. Većina testiranih izolata ureaplazmi bila je osjetljiva na doksicikin (94,4%), eritromicin (82,9%), moksifloksacin (80,5%), levofloksacin (77,8%) i tetraciklin (76%), a rezistentnana klindamicin (95,8%). Zbog malog broja mikoplazmi testiranih na antibiotike, uzorak nije repre-zentativan za statističku analizu osjetljivosti izolata na antibiotike.Zaključci: Rezultati ovoga istraživanja ukazuju na najveću pojavnost urogenitalnih mikoplazmi u žena reproduktivne dobi, što naglašava značaj rane dijagnostike i liječenja, kako bi se pravodobno spriječile komplikacije u trudnoći i postpartalnom razdoblju. Iako je većina izolata dobro osjetljiva na tetracikline i makrolide, potrebno je stalno testiranje osjetljivosti izolata na antibiotike zbog sve veće pojave i rasta rezistencije u svijetu.
Objectives: To determine the incidence of infections caused by M. hominis and U. urealyticum at the University Hospital of Split from 1 January 2020 to 31 December 2020 and the susceptibility of these isolates to antibiotics in the same period. Materials and methods: The study was carried out of data on patients with isolated M. hominis or U. urealyticum during this period. The data were collected from the Department of Microbiology and Parasitology, University Hospital of Split (UHS). As a diagnostic method, the commercial cultivation set MYCOFAST RevolutioN was used, divided into two phases of the test. Results: Department of Microbiology and Parasitology UHS received 638 samples suspected of infection with ureaplasma and mycoplasma. Out of these samples, in 7% (45 samples) U. urealyticum and 0.5% (3 samples) for M. hominis were proven. Urea-plasma was predominantly isolated from the genital system in women of generative age. Most tested strains were susceptible to doxycycline (94.4%), erythromycin (82.9%), moxifloxacin (80.5%), levofloxacin (77.8%) and tetracycline (76%); and resistant to clindamycin (95.8%). However, the sample size for mycoplasma was too small for statistical analysis. Conclusion: The results of this research indicate the highest incidence of urogenital mycoplasmas in women of reproductive age, which emphasizes the importance of early diagnosis and treatment, to prevent complications of pregnancy and the postpartum period. Although most isolates are sensitive to macrolides, constant surveillance and antibiotic susceptibility testing is required, due to increasing and growing resistance worldwide.
U pokusu provedenom u istočnoj Slavoniji tijekom 2021. godine analizirano je nicanje, rast, cvatnja i prinos kivana (Cucumis metuliferus E. Meyer Ex. Naudin). Cilj istraživanja bio je utvrditi ...agromorfološke razlike pri proizvodnji kivana uzgajanog s različitim sustavima kontrole korova te različitim rokovima sjetve. Pokus je postavljem kao 3 x 3 faktorski plan s tri ponavljanja. Faktori su uključivali tri varijante suzbijanja korova (primjena slame kao malča, kultivacija i kontrolna zakorovljena varijanta) te tri roka sjetve (rani, srednji i kasni). Tijekom pokusa se razvila tipična zajednica ljetnih korova u kojoj su dominirali pršljenasti muhar (Setaria verticilata (L.) P. Beauv.) i oštrodlakavi šćir (Amaranthus retroflexus L.), dok su ostali korovi bili niske relativne gustoće i frekvencije po jedinici površine i slabog utjecaja na uzgajane biljke. Tretmani suzbijanja korova bili su vrlo učinkoviti u usporedbi sa zakorovljenom kontrolom. Međutim, vrijeme sjetve pokazalo se kao kritičan faktor u proizvodnji kivana, i imalo je utjecaja ne samo na nicanje, rast i cvatnju, već i na broj i veličinu plodova. Zaključno, srednji rok sjetve i kultivacija kao mjera suzbijanja korova pokazali su najveći agronomski potencijal za proizvodnju kivana, a slijede srednji i rani rok sjetve uz primjenu malča za suzbijanje korova.
Periodontal diseases are widely distributed in the world and represent a major oral health problem both in developed and in developing countries. These chronic inflammatory diseases are characterized ...by the destruction of tooth supporting tissues. It is commonly accepted that dental plaque bacteria are the primary etiologic agents of periodontal disease. More than 700 species have been detected in the oral cavity in different individuals. Approximately 400 of these species have been isolated from different subgingival microenvironments. However, only a few species have been associated with the disease. From these bacteria specifically associated with destructive disease, Aggregatibacter actinomycetemcomitans is considered as one of the bacterial species of etiological importance in periodontitis and has contributed to the initiation and/or progression of destructive forms of periodontitis. The aim of this study was to evaluate the occurance characteristics and toxic activity of A. actinomycetemcomitans in the subgingival biofilm in subjects with periodontal health and disease. Periodontal status of all included subjects was evaluated during the initial screening visit. A fullmouth clinical examination was performed in each patient using a manual probe and the following parameters were recorded at six sites per tooth: probing depth (PD in mm), clinical attachment loss (CAL in mm), bleeding on probing (BOP) and plaque index (PI). Pooled samples of subgingival plaque were taken for culture-based identification of microorganisms and further molecular analysis. Colonies suspected to be A. actinomycetemcomitans were selected for molecular identification using 16S rRNA gene sequencing. Genotyping was performed by polymerase chain reactions specific to the ltx promotor region, serotype-specific and cdt region and by sequencing of 16S rRNA. Cytotoxicity was examined on extravillous trophoblast cell line HTR-8/SVneo. The three groups demonstrated statistically significant differences regarding clinical parameters examined in the whole dentition. The subjects in AP group showed higher mean PD and CAL values in comparison with CP group indicating a more severe level of periodontal disease, while BOP values did not show significant difference. Diseased subjects had significantly higher full-mouth bleeding score compared with healthy controls. Identification of A. actinomycetemcomitans in conventional PCR for 16S rRNA with one species-specific and one universal primer was inconclusive because almost identical signal with A. segnis, A. aphrophilus, Campylobacter gracilis, Capnocytophaga and Bacillus turigiensis was obtained. PCR analysis showed that serotype e was overrepresented, the ltx promoter region was amplified and the cdtABC in A. actinomycetemcomitans isolates was absent. Infection coused by A. actinomycetemcomitans resulted with cell growth inhibition of extravillous trophoblast cell line HTR-8/SVneo, but further investigation are needed to determine what type of cell death had occurred-apoptosis or autophagy. It seems plausible that A. actinomycetemcomitans strains are distinct in their phenotypes, pathogenic mechanisms and functional roles in the subgingival microbial communities, which may result in different patterns of disease association.
Parodontalna oboljenja su široko rasprostanjena u celom svetu i u velikoj meri narušavaju oralno zdravlje, kako u razvijenim tako i u nerazvijenim zemljama. Parodontopatije su hronična inflamatorna oboljenja potpornog aparata zuba koja usled razaranja dubljih parodontalnih tkiva mogu da rezultiraju gubitkom zuba. Etiologija parodontopatije je polimikrobna po svojoj prirodi. Opisano više od 700 različitih vrsta mikroorganizama koje naseljavaju usnu duplju, od kojih je oko 400 izolovano iz subgingivalne regije. Međutim, samo nekoliko bakterijskih vrsta je dovedeno u vezu sa parodontopatijama, među kojima je i Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Ovaj parodontopatogen se smatra veoma važnim u etiologiji parodontopatije, odnosno da doprinosi kako inicijaciji tako i progresiji destrukcije parodontalnih tkiva. Cilj ove studije je bio da se ispita prisustvo, karakteristike i toksična aktivnost bakterije A. actinomycetemcomitans poreklom iz subgingivalnog dentalnog plaka, kod obolelih od parodontopatije kao i kod osoba sa klinički zdravim parodoncijumom. Kod svih ispitanika uključenih u studiju, evidentiran je parodontalni status i nivo oralne higijene verifikacijom kliničkih parametara: dubinom sondiranja (DS u mm), nivoom pripojnog epitla (NPE u mm), krvarenjem na provokaciju (KNP) i plak indeksom (PI). Pulovani uzorci subgingivalnog dentalnog plaka su se koristili za kultivaciju i molekularne analize bakterije A. actinomycetemcomitans. Kultivacijom dobijene kolonije su selektovane u cilju identifikacije bakterije A. actinomycetemcomitans, sekvenciranjem 16S rRNK gena. Korišćene su specifične PCR reakcije u cilju genotipizacije promotorskog operona za leukotoksin, citoletalnog toksina istezanja i serotipizaciju kao i identifikaciju bakterije A. actinomycetemcomitans umnožavanjem dela gena za 16S rRNK. Ispitivan je uticaj bakterije A. actinomycetemcomitans na inhibiciju rasta ekstravilusne trofoblastne ćelijske linije HTR-8/SVneo. Statistički značajne razlike posmatranih kliničkih parametara su bile prisutne među grupama ispitanika. Srednje vrednosti dubine sondiranja i nivoa pripojnog epitela u A grupi su bile statistički značajno veće u odnosu na H grupu, dok se srednje vrednosti KNP nisu statistički značajno razlikovale. Oboleli od parodontopatije (A i H grupa) su imali statistički značajno veće srednje vrednosti svih posmatranih kliničkih parametara u odnosu na grupu zdravih ispitanika. Identifikacija bakterije A. actinomycetemcomitans konvencionalnim PCR reakcijama za 16S rRNK pomoću jednog prajmera specifičnog za vrstu i jednog univerzalnog prajmera se pokazala neefikasnom, jer su PCR produkti na očekivanim visinama dobijeni i u slučaju A. segnis, A. aphrophilus, Campylobacter gracillis, Capnocytophaga i Bacillus turigiensis. PCR reakcijama je dokazana dominantnost serotipa e među A.actinomycetemcomitans kliničkim izolatima, kao i da izolati ne pripadaju hiperleukotoksičnom fenotipu. Prisustvo nijednog cdt gena nije potvrđeno PCR analizama. Infekcija bakterijom A. actinomycetemcomitans je dovela do inhibicije rasta ekstravilusne trofoblastne ćelijske linije HTR-8/SVneo. Međutim, neophodna su dalja istraživanja koja će pokazati koja vrsta ćelijske smrti nastupa kao rezultat infekcije-apoptoza ili autofagija. Istraživanja su pokazala da A. actinomycetemcomitans sojevi imaju različite fenotipove, patogenetske mehanizme i funkcionalne uloge u zajednicama mikroorganizama subgingivalne regije što može da rezultira različitim obrazcima veze sa oboljenjem.
Cilj ovog rada bio je provesti preliminarna istraživanja brojnosti heterotrofnih mikroorganizama u zraku i na površinama stijena u speleološkim objektima. Istraživanje je provedeno na pet objekata na ...područja Istre i Kvarnerskog zaleđa koristeći klasične mikrobiološke tehnike (kultivaciju). Rezultati pokazuju trend smanjenja broja bakterija u zraku i na površinama speleoloških objekata s odmicanjem od ulaza, uz odstupanja koja se mogu objasniti pojavama šišmiša, otjecanjima vode, zračnim strujama ili antropogenim utjecajem. Rezultati istraživanja će omogućiti optimizaciju metoda uzorkovanja, uzgoja i određivanja brojnosti bakterija u speleološkim objektima te osnovu za daljnji monitoring mikrobiologije speleoloških objekata.
U stručnoj literaturi ustalilo se mišljenje o upotrebi vinove loze na širem ninskom području (zapadni dio Ravnih kotara) od ranog brončanog doba, i to u kontekstu pogrebnih rituala. Kao temelj za ...takvu interpretaciju iskorišteni su rezultati arheoloških istraživanja lokaliteta Mala glavica – Matakov brig kod Podvršja u Općini Ražanac, provedenih 1986. – 1987. g. pod vodstvom Šime Batovića i Sineve Kukoč. Radi se prvenstveno o uzorcima sjemenja vinove loze (Vitis vinifera), pronađenim u (naizgled) intaktnom sloju gomile, pa se zaključuje da potječu iz arheološkog konteksta grobnog humka iz ranog brončanog doba. Da bi se potvrdila pretpostavljena starost i ustanovila vrsta sjemena, u okviru proučavanja tematike iz gospodarske prošlosti šireg ninskog područja, 2017. – 2018. g. provedene su arheobotanička i radiokarbonska analiza uzoraka. Radiokarbonskom analizom ustanovljeno je da uzorci sjemena datiraju u šezdesete godine 20. st., najvjerojatnije u razdoblje 1966. – 1968. g. (Beta – 489417, 95.4 % 1966-1967 cal AD). U skladu s takvom datacijom logičan je zaključak da uzorci ne potječu iz originalnog konteksta grobnog humka. Stoga se i njihov nalaz ne bi trebao interpretirati u okviru pogrebnih rituala brončanog doba kako se dosad ustalilo u literaturi. Takva se (re)interpretacija stavlja u širi kontekst dosadašnjih spoznaja i dokaza najranije upotrebe vinove loze na širem području Ravnih kotara u zaleđu Nina i Zadra.
Rad koji se nalazi pred nama tematizira neke osnovne ideje Newmanovog poimanja sveučilištas posebnim naglaskom na odnos sveučilišta i intelektualnog razvoja pojedinca. Newmanje bio mišljenja da ...sveučilišno obrazovanje može pojedincu ponuditi određenu formacijuintelektualnih sposobnosti koje druga vrsta obrazovanja ne nudi. Razlog tome nalazi uspecifičnosti sveučilišta kao mjesta u kojem se osoba ima priliku susresti s raznim znanostimai znanstvenim teorijama, od kojih svaka nudi samo jedan aspekt stvarnosti, te ujedinjujući štoje moguće više tih vidova, pojedinac ima priliku stvoriti obuhvatniju sliku stvarnosti od onekoju bi imao da se bavi isključivo jednom znanošću. Znanje koje je nužno vezano za istinu, zaNewman predstavlja objekt i vrhunac dostignuća ljudskoga razuma, te bogati spoznajni životkoji omogućuje ne samo savršeniji način postojanja osobe, nego pozitivno djeluje i na društvou kojem se takav pojedinac nalazi.
U radu su prikazani rezultati koprološke parazitološke pretrage konja različitih pasmina i dobi. Uzorci su poslani na Zavod za parazitologiju i invazijske bolesti s klinikom Veterinarskog fakulteta ...Sveučilišta u Zagrebu tijekom 2021. godine. Ukupno su pretražena 123 uzorka svih dobnih skupina, najčešće podrijetlom od hrvatskih toplokrvnjaka. Metode pretrage obuhvatile su metodu flotacije, FLOTAC i metodu kultivacije ličinki. Najčešći su nalaz bila jajašca strongilidnog tipa (91 % ), zatim jaja nematoda Parascaris spp. (4 %), nematoda Oxyuris equi (3 %) i trakavice Anoplocephala spp. ( 1 %). Metodom kultivacije ličinki pronađene su ličinke malih strongilida tipa A. S obzirom na malen broj pretraženih uzoraka
postoji potreba za daljnjom edukacijom veterinara i vlasnika o važnosti i prednostima koproloških pretraga nad prečestom upotrebom antihelmintika.
PDF
