Las bacterias del género Mycoplasma pueden comportarse como patógenos causando diferentes enfermedades en el tracto reproductivo que incluyen endometritis, vulvovaginitis, infertilidad y abortos. ...Generan infecciones en los órganos reproductivos del toro (vesiculitis y epididimitis) pudiendo aislarse del semen. Mycoplasma bovis (Mb) y Mycoplasma bovigenitalium (Mbg) son capaces de adherirse al espermatozoide afectándolo negativamente. Mycoplasma californicum (Mc) es otra de las especies que afecta los bovinos causando mastitis, artritis y neumonía. No existen reportes previos que indiquen su prevalencia en semen bovino. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de genes correspondientes a Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovigenitalium y Mycoplasma Californicum en muestras de semen bovino de origen comercial, mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Para ello, se utilizaron 100 pajuelas de semen bovino criopreservado de origen comercial. Se efectuó la extracción de ácidos nucleicos a partir de kits de extracción comerciales (Roche®), con leves modificaciones para obtener los templados de reacción. Se cuantificó el ADN extraído mediante Nanodrop a 260 nm de longitud de onda. La evaluación de calidad se realizó mediante corrida electroforética en gel de agarosa al 1% y la detección molecular se efectuó mediante PCR convencional. Como controles positivos de la reacción por PCR se utilizó ADN de cepas cedidas por el ANLIS-Instituto Dr. C. Malbrán y, como control negativo, agua destilada libre de DNasa y RNasa. El revelado se realizó mediante corrida electroforética en geles de agarosa al 1%. Todas las muestras fueron negativas a Mb, en el 40% de las muestras se aisló Mc y en 22% Mbg. Se concluye que es posible detectar especies de Mycoplasma en muestras de semen bovino criopreservado de origen comercial, siendo este el primer reporte de la detección de Mc. El semen podría ser un potencial transmisor de estas bacterias entre bovinos.
RESUMO Queixada (Tayassu pecari) é um mamífero neotropical, classificado como vulnerável devido à caça e à destruição de seu habitat. Em razão das dificuldades na reprodução em cativeiro, técnicas de ...reprodução assistida podem ser aplicadas em programas de repovoamento da espécie. Dessa forma, objetivou-se identificar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HOST) para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides de queixada. O sêmen de quatro machos adultos foi coletado com auxílio de eletroejaculador após contenção física e protocolo de sedação e anestesia. O sêmen foi avaliado quanto às características macro e microscópicas e diluído nas seguintes soluções hiposmóticas: água destilada (0mOsmol/L), sacarose (50, 100, 150mOsm/L) e frutose (50, 100, 150mOsm/L). Cada amostra foi incubada em duplicata, e uma sofreu fixação em solução de citrato de sódio formolizado a 4%. Duzentos espermatozoides foram avaliados por amostra e classificados em reativos ou não ao HOST. Todas as soluções testadas foram semelhantes em identificar o percentual de espermatozoides reativos, independentemente de a amostra ser ou não fixada (P>0,05). Dessa forma, pode-se usar água destilada como HOST por este apresentar resultados similares e por ser um teste mais barato.
ABSTRACT White-lipped peccary (Tayassu pecari) is a neotropical mammal classified as vulnerable due to overhunting and habitat destruction. Due to the low reproduction success in captivity, assisted reproduction techniques can be used in re-stocking programs. Therefore, we aimed to identify the best hyposmotic swelling test (HOST) to evaluate the functional integrity of peccary sperm. Semen samples of four adult males were collected with the aid of an electroejaculator after physical contention, sedation and anesthesia protocols. The semen was evaluated for macro and microscopic characteristics and diluted in the following hyposmotic solutions: distilled water (0mOsmol/L), sucrose (50, 100, 150mOsm/L) and fructose (50, 100, 150mOsm/L). Each sample was incubated in duplicate and one was fixed in 4% formalized sodium citrate solution. Two hundred spermatozoa were evaluated from each sample and classified as reactive or not- reactive to HOST. There were similar proportions of reactive and functional sperm regardless of whether the sample was fixed or not fixed (P> 0.05). Therefore, distilled water can be used as HOST to evaluate the functional integrity of white-lipped peccary sperm because it shows similar results and it is a cheaper test.
La presencia de toros con características seminales deficientes ocasiona fallas considerables en la eficiencia reproductiva de las unidades de producción, debido a la disminución del número de vacas ...preñadas, siendo más marcado en sistemas bajo programas de inseminación artificial (IA). Los rasgos de calidad seminal (CS) pueden constituir un criterio importante para la selección de machos reproductores utilizados en IA. La identificación de marcadores moleculares asociados con CS en el toro, podría facilitar la selección para estos rasgos. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la asociación de los polimorfismos del gen Leptina, sobre la CS de toros de la raza Carora. Se evaluaron las variables volumen de eyaculado (VE), motilidad masal (MM), motilidad individual (MI) y concentración espermática (CE) de 43 toros reproductores Carora, organizados en 8 grupos de edad. Los polimorfismos nucleotídicos simples (SNP) del gen Leptina evaluados fueron: rs29004487 (SNP1), rs29004488 (SNP2), rs29004501 (SNP3) y rs29004508 (SNP4). Se utilizó un análisis de varianza mediante un modelo lineal generalizado (GLM). El factor genotipo contó con 10 niveles y el factor edad, 8 niveles. No se observó efecto del SNP1 sobre ninguna de las variables evaluadas, mientras que el SNP3 tuvo un efecto significativo sobre la CE. Los SNP2 y SNP4 presentaron un efecto altamente significativo sobre la MI y CE. Finalmente, las variables VE y MM no fueron afectadas por ninguno de los SNP estudiados. Los resultados del presente estudio sugieren marcadores potenciales para la valoración y selección genética de bovinos reproductores.
Se evaluó el efecto de dos colectas de semen realizadas en la misma temporada reproductiva sobre los parámetros espermáticos y composición fisicoquímica del plasma seminal de Piaractus brachypomus. ...El semen de nueve machos inducidos hormonalmente con extracto hipofisiario de carpa (EHC) fue colectado en abril y mayo de 2014. Se estudiaron los cambios entre colectas del volumen seminal (VS), movilidad espermática (ME), tiempo de activación (TA), concentración espermática (CE) y variables fisicoquímicas (Na+, Ca2+, Mg2+, Cl-, K+, glucosa, triglicéridos, proteína, osmolaridad y pH). Se observaron diferencias significativas entre colectas para Na+, triglicéridos y osmolaridad (p<0.05) y Ca2+ (p<0.01). Por otro lado, no se encontraron diferencias significativas en VS, ME, TA y CE entre colectas. La colección de semen de un reproductor inducido hormonalmente en dos oportunidades dentro de una misma temporada reproductiva en es una alternativa de manejo viable en P. brachypomus, aunque los componentes plasmáticos pueden variar por efecto del muestreo.
Se evaluó el efecto de la adición de metil-β-ciclodextrina cargada con colesterol (CLC) sobre la criopreservación de semen de toros Holstein Friesian a través de la valoración de las características ...seminales pre y pos-congelación. Se utilizaron cuatro toros de 3-4 años, obteniéndose 28 eyaculados, que fueron divididos en tres alicouotas, donde se agregó el CLC: 0, 1.5 y 2 mg de CLC por cada 120 millones de espermatozoides (T1, T2 y T3, respectivamente) a 37 °C y fueron incubados por 15 minutos. Las muestras fueron refrigeradas a 5 °C durante 18 horas para su estabilización. La congelación del semen se hizo en pajillas de 0.5 ml usando vapores de nitrógeno por 7 minutos y luego sumergidas en nitrógeno líquido. No se encontraron diferencias estadísticas entre tratamientos en todas las características del semen refrigerado. Los resultados pos-descongelación revelaron mejoras significativas en los tratamientos con colesterol, obteniendo una motilidad total del 67.73, 79.59 y 74.73%; integridad de membrana de 46.89, 60.43 y 55.06% y vitalidad de 63.26, 75.84 y 70.53% para T1, T2 y T3, respectivamente (p<0.05) No hubo diferencias significativas entre tratamientos con respecto a las anormalidades morfológicas.
Se evaluó el efecto de la adición de metil-β-ciclodextrina cargada de colesterol (CLC) sobre las características microscópicas del semen refrigerado/descongelado de carnero. Se emplearon cuatro ...carneros Asblack de 1-2 años. Se usaron 30 eyaculados divididos en grupos de tres alícuotas a los que se agregó CLC (0, 1 y 2 mg de CLC/120 millones de espermatozoides, T1, T2 y T3, respectivamente) a 22 °C y fueron incubados por 15 minutos. Las muestras luego fueron refrigeradas y estabilizadas a 5 °C durante 18 horas. El congelamiento del semen se hizo en pajillas usando vapores de nitrógeno por 4 minutos (-120 °C) y luego sumergidas en nitrógeno líquido. No hubo diferencias estadísticas entre las medias de los tratamientos en todas las características del semen refrigerado. Los resultados pos-descongelación demuestran mejoras con el uso de colesterol en la criopreservación de semen de carnero (p<0.5), obteniendo una motilidad de 65.3, 68.7 y 75.37%, vitalidad de 56.6, 60.7 y 66.2% e integridad de membrana de 50.5, 56.4 y 63.7%, para T1, T2 y T3, respectivamente. No hubo diferencia estadística entre tratamientos con respecto a las anormalidades espermáticas.
RESUMO O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado ...(EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.
ABSTRACT The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.
RESUMO Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades ...mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.
ABSTRACT The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.
En la implementación de la inseminación artificial (IA) se puede utilizar semen no sexado (convencional) o semen sexado. Cuando se utiliza sexado disminuye considerablemente la tasa de preñez, con el ...consecuente aumento de los servicios por concepción y de los costos de producción. El objetivo del presente trabajo consistió en evaluar la dependencia de la preñez de la ubicación del semen sexado en novillas Gyrolando inseminadas a tiempo fijo (IATF). La investigación se realizó en la Hacienda El Cristal del Municipio de Sabana de torres y consistió en inseminar, 22 novillas, ubicando el semen en dos sitios del aparato tubular reproductivo de las novillas (11 en el cuerpo y 11 en el cuerno del útero). Para establecer si la preñez depende de la ubicación del semen sexado se utilizó la prueba de chi-cuadrado desde el software SPPSS Statistic 21. Los resultados permitieron evidenciar dependencia de la preñez del semen sexado (p<0,05). En este trabajo, los resultados, mostraron que la ubicación del semen en el cuerno del útero favorece la tasa de preñez cuando se utiliza semen sexado.
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