DIKUL - logo
(UL)
  • Razvoj in optimiranje pogojev bioluminiscentne metode za ugotavljanje koncentracije galaktoze in aktivnosti galaktokinaze = Development and optimization of the conditions of the bioluminescence method for assessment of galactose concentration and galactokinase activity : Prešernove nagrade študentom
    Finderle, Petra
    Galaktokinaza je intracelularni encim, ki katalizira prvo stopnjo pretvorbe galaktoze v organizmu. Primanjkljaj galaktokinazne aktivnosti privede do kopièenja galaktoze, ki posledièno aktivira ... stranski presnovni poti, pri katerih se tvorita galaktitol in galaktonska kislina. Galaktitol nastane in se kopièi v organih z visoko vsebnostjo aldozne reduktaze, medtem ko se galaktonska kislina preko stevilnih pretvorb izloèi iz telesa. Toksiènost galaktitola se pokaze v nastanku katarakt, mozganskih in ledviènih okvar. Ze v zgodnjem otrostvu izrazeni znaki kazejo na popolni primanjkljaj galaktokinazne aktivnosti. Pri osebah, ki imajo izrazeno polovièno encimsko aktivnost, se tezave pojavijo kot posledica dolgoletnega nabiranja presnovkov.Pomembo je, da se encimski primanjkljaj odkrije ze ob rojstvu ( neonatalno presejevanje ) in da se te osebe ne obremenjujejo z vnosom hranil, ki vsebujejo galaktozo. V tem delu smo opisali bioluminiscenco, kot potencialno metodo za ugotavljanje aktivnosti galaktokinaze v èloveskih eritrocitih. To je posredna metoda doloèanja encimske aktivnosti, zato je primarno zahtevala pripravo sistema za zaznavo koncentracije galaktoze. Bioluminiscentno analizo smo izvajali z zdruzitvijo reakcije luciferaze iz kresnièk in galaktokinaze kvasovk. Vse meritve luminescence so potekale pri 27°C in trajale pet minut. Pri analizi vzorcev galaktoze v fizioloski raztopini ( èisti medij ), smo dodali mikromolarno koncentracijo adenozin 5`-trifosfata, pri analizah vzorcev hemolizata ( kompleksni medij ) to ni bilopotrebno, saj smo pomemben substrat obeh encimskih reakcij izolirali iz eritrocitnih celic. Odstotek upada luminiscence v èasu meritve se je izkazal kot primeren parameter za opazovanje encimske kinetike in primerjanje rezultatov. Po ustrezni matematièni obdelavi rezultatov smo dobili enaèbo premice, ki definira odvisnost bioluminiscentnega odziva od zaèetne koncentracije galaktoze. Z inkubacijo vzorcev pri 37°C smo ugotavljali koncentracijo galaktoze, ki je ostala nefosforilirana. V studiji ugotovljena galaktokinazna aktivnost je drugega velikostnega razreda, kot je doloèena z radioaktivno metodo in podana v literaturi, saj smo aktivnost merili pri nefizioloskih koncentracijah galaktoze. Podane vrednosti galaktokinazne aktivnosti so le orientacijske in zahtevajo se nadaljne raziskave. Vpeljava obravnavane metode v klinièni laboratorij bo zahtevala luminometer z avtoinijektorsko in samo-ohlajevalno tehnièno podporo ter obravnavo rezultatovz lastnimi referenènimi vrednostmi.
    Vrsta gradiva - razne literarne vrste
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [Finderle P.], 2003
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 1422705

Knjižnica Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
dp 577 Finderle Petra Razvoj
IN: 0007269 		prosto - za čitalnico
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
dp 577 Finderle Petra Razvoj
IN: 0007268 		prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico