Optimizacija postopka alkalne lize za pridobivanje velikih plazmidov = Proposal for a better integration of alkaline lysis into the production of large plasmids : diplomska naloga
Rožman, Jasmina Živa, 1981-
Namen diplomske naloge je bil optimirati pogoje gojenja kultur bakterij (Escherichia coli) in procesa alkalne lize za pridobivanje velikih plazmidov, (R6K - 39.4 kbč R1drd19 - 93.9 kbč TP114 - 62.1 ...kbč R388 - 21 kb), prisotnih vbakteriji. Med izolacijo plazmidov lahko pride zaradi prisotnih kemijskihreagentov, delovanja encimov in striznih sil do njihovega poskodovanja, pri èemer lahko farmacevtsko zanimiva oblika (nadzvita) spremenisvojo konformacijo v sprosèeno ali celo linearno. Optimizacija prvega postopka v proizvodnji plazmida je tako kljuènega pomena, saj s tem lahko vplivamo na pridobitev èim veèje kolièine nadzvitih plazmidov in hkrati omogoèimo lazje nadaljnje èisèenje.Bakterije smo gojili pri 37°C, s konstantnim stresanjem. S spektrofotometrom smo periodièno merili koncentracijo celic, zraslih na gojisèu, in s pomoèjo rastne krivulje doloèilioptimalen trenutek bioprocesa za zaèetek lize. Med alkalno lizo celic smo z detergentom SDS v alkalni raztopini NaOH spremljali kljuèna dejavnika, kot sta vpliv pH vrednosti lizirajoèega pufra in èasa izpostavljenosti lizata alkalnim pogojem. Rezultate smo analizirali na elektroforezi. Za definiranje lis na elektroforezi smo uporabili encim topoizomerazo I in fizikalno degradacijo pDNA s temperaturo. Lise smo kvantificirali s pomoèjo kvantitativnega markerja. Z veèkratnim taljenjem in zamrzovanjem vzorcev smo spremljali stabilnost konformacij. V zadnjem koraku smo preverili, s predhodnoze razvito metodo, uèinkovitost èisèenja lizata na sibkih anionsko-izmenjevalnih kromatografskih kolonah (CIMr monolitni diski), s èimersmo dokazali primernost postopka priprave pDNA za nadaljnje kromatografsko èisèenje. Tezava veèjih plazmidov tekom proizvodnje je njihova majhna stabilnost. Obèutljivost na hidrodinamske in strizne sile postane se izrazitejsa z narasèajoèo velikostjo. Izkazalo se je, da so za izolacijo velikih plazmidov pri alkalni lizi najugodnejse razmere - 0.15M do 0.2M NaOH in krajsi èas izpostavljenosti lizata alkalnim pogojem - 1min do 3min.
Vrsta gradiva - diplomsko delo
Založništvo in izdelava - Ljubljana : [Černe J.Ž.], 2006
Bibliografsko gradivo je bilo uspešno dodano na polico.
Dodajanje bibliografskega gradiva na polico ni uspelo.
Gradivo je že na polici.
Trajna povezava
URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto
Faktor vpliva
Izdaja
Kategorija
Razvrstitev
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Izberite knjižnično izkaznico:
Baze podatkov,
v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov
Področje
Leto
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev
Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Citiranje
Funkcionalnost trenutno ni na voljo. Prosimo, poskusite kasneje.
