DIKUL - logo
(UL)
  • Vrednotenje rezultatov fluorescenčne in situ hibridizacije z avtomatskim sistemom = Evaluation of fluorescence in situ hybridization results by automated system
    Osterman, Elza
    Mikroskopsko kvantitativno vrednotenje analize FISH je zamudna, naporna in za napake dovzetna metoda, ki zahteva vsaj dva usposobljena preiskovalca. Pri velikem številu vzorcev bi bilo smiselno v ... vsakdanjo prakso uvesti avtomatsko štetje, kar je izvedljivo s pomočjo ustrezno programsko opremljenega motoriziranega fluorescenčnega mikroskopa. Namen našega dela je bila primerjava rezultatov analize FISH, ki jih dobimo z ročnim mikroskopskim pregledom, z rezultati, ki jih dobimo s pomočjo avtomatskega štetja. Določili smo pražne vrednosti za avtomatsko analizo za nekatere sonde in določili parametre kontrole kakovosti pri avtomatski analizi FISH. Preverili smo tudi ponovljivost avtomatskega vrednotenja in primerjali čas analize med ročnim in avtomatskim štetjem. V raziskavo smo vključili 85 preparatov, vzorci so pripadali 55-im bolnikom. Vzorce smo nacepili na gojišča, jih gojili 24-72 ur, nato smo celice izolirali. Vzorce smo nanesli na objektna stekla, jih označili z različnimi DNA-sondami in izvedli preiskavo FISH. Preparate smo vrednotili najprej ročno, nato pa še avtomatsko. Ugotovili smo, da lahko uporabimo le sonde, s katerimi ugotavljamo pomnožitev ali izgubo signalov in še te z določenimi omejitvami. Pri določenem deležu pozitivnih signalov moramo namreč s pomočjo programske opreme ročno prerazporediti celice glede na vzorec signalov, da bi lahko potrdili ali ovrgli prisotnost kromosomske spremembe. Avtomatsko štetje pravilno prepozna okoli 75-85% celičnih jeder, medtem ko jih moramo okoli 15-25 % prerazporediti. Delež nerazporejenih oziroma izključenih celic je različen, odvisno od tega ali so prisotni dodani razredi razporeditve ali ne. Brez dodanih razredov jih je okoli 15 %, drugače pa precej več. Pri pozitivnih vzorcih med ročnim in avtomatskim načinom štetja ni statistično značilnih razlik (p > 0,05), korelacija med različnima načinoma štetja pa je večinoma zelo dobra do odlična. Translokacijskih in razcepnih sond, kjer nastane ali pa se razcepi zliti signal (fuzija), nismo uspeli validirati, saj avtomatskemu štetju težave povzročajo že negativni (normalni) preparati. Zaradi tega smo navedli tudi možne vzroke in možne rešitve. Ponovljivost avtomatskega vrednotenja, tako ponovljivost celotne analize kot tudi samega štetja je ustrezna, prav tako je s hitrostjo analize, ki je med ročnim vrednotenjem in avtomatskim štetjem primerljiva. V vsakdanjo prakso bi bilo torej smiselno uvesti avtomatsko štetje le za sonde, kjer se spremeni število signalov.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [E. Osterman], 2019
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 4727409

    Povezava(-e):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=107977

Knjižnica Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
mlab 543 OSTERMAN ELZA Vrednotenje 197
IN: 0016190 		prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...

Vnos na polico