(UL)
-
Molekulsko kloniranje in izražanje rekombinantne indolamin 2,3-dioksigenaze 1 v bakteriji Escherichia coli = Cloning and expression of recombinant indolamine 2,3-dioxygenase 1 in Escherichia coli : enoviti magistrski študijski program FarmacijaPetrač, MirjamTemelj magistrske naloge je bila priprava ekspresijske kasete, molekulsko kloniranje, izražanje ter izolacija in čiščenje humanega proteina indolamin 2,3-dioksigenaze 1 (IDO1). Rekombinanten encim bo ... omogočil razvoj in vrednotenje novih zaviralcev encima IDO1, potencialno uporabnih za zdravljenje nekaterih rakavih bolezni. IDO1 je normalno prisoten encim v človeških celicah. Njegova naloga je indukcija primarne poti katabolizma triptofana. Pri tem nastanejo presnovki, med katerimi so nekateri tudi toksični. Skozi pot metabolizma triptofana in nastanek kinurenina, ki je ligand za arilni ogljikovodikov receptorjev (AhR) pride do prikritja tumorja imunskemu sistemu. Tako je omogočena njegova rast in razvoj. Rekombinantni humani IDO1 (rhIDO1) smo izražali v celicah Escherichia coli NiCo21. V vektor pET-28 smo vstavili gen za IDO1, ki smo mu na 5'-konec pripeli nukleotidno zaporedje, kodirajoče heksahistidinski rep in peptidno zaporedje, ki ga selektivno cepi trombin. Plazmid smo s toplotnim šokom vstavili v ekspresijski bakterijski sev. Celice smo namnožili in z dodatkom induktorja IPTG inducirali izražanje rhIDO1. Skozi poizkuse smo iskali najustreznejše pogoje (temperatura, čas indukcije, koncentracija glukoze, vrsta gojišča...) s ciljem optimizacije izražanja z vidika kakovosti in količine produkta. Za čiščenje smo uporabili večstopenjski kromatografski proces (kovinsko-kelatno afinitetno kromatografijo, gelsko filtracijo in kationsko izmenjevalno kromatografijo). Čistoto produkta smo med izolacijo spremljali s polialkrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata. Koncentracijo produkta smo ocenili spektrofotometrično in z metodo po Bradfordu. Na koncu smo aktivnost proteina preverili z biokemijskim testiranjem. Uspešno smo izrazili in izolirali rhIDO1. Čeprav je produkt vseboval določen delež nečistot in je izkazoval nižjo aktivnost v primerjavi s komercialnim standardom, ga kljub temu lahko uporabljamo za vrednotenje potencialnih zaviralcev rhIDO1 v encimskih testih.Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasleZaložništvo in izdelava - Ljubljana : [M. Petrač], 2020Jezik - slovenskiCOBISS.SI-ID - 4903537
Avtor
Petrač, Mirjam
Drugi avtorji
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978-
Teme
Molekularna genetika |
indolamin 2, 3-dioksigenaza 1 |
Escherichia coli |
molekulsko kloniranje |
izražanje |
izolacija |
restrikcija plazmidov |
testna izražanja
Knjižnica | Signatura – lokacija, inventarna št. ... | Status izvoda |
---|---|---|
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana | Knjižnica emšf 577 PETRAČ MIRJAM Molekulsko 827 IN: 0016575 |
prosto - za čitalnico |
Vnos na polico
Trajna povezava
- URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto | Faktor vpliva | Izdaja | Kategorija | Razvrstitev | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Baze podatkov, v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov | Področje | Leto |
---|
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev | Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS |
---|---|
Petrač, Mirjam | |
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978- | 23598 |
Vir: Osebne bibliografije
in: SICRIS
Izberite prevzemno mesto:
Prevzem gradiva po pošti
Naslov za dostavo:
Med podatki člana manjka naslov.
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Gesla v Splošnem geslovniku COBISS
Izbira mesta prevzema
Gradivo iz matične enote je brezplačno. Če je gradivo na mesto prevzema dostavljeno iz drugih enot, lahko knjižnica to storitev zaračuna.
Mesto prevzema | Status gradiva | Rezervacija |
---|
Rezervacija v teku
Prosimo, počakajte trenutek.
Rezervacija je uspela.
Rezervacija ni uspela.
Rezervacija...
Članska izkaznica:
Mesto prevzema: