A survey was carried out in citrus fields of Lazio and Tuscany, Central Italy, to determine the presence of Citrus exocortis viroid (CEVd) and Hop stunt viroid (HSVd), both of which cause economically important diseases in citrus. In order to make pathogen diagnosis easier and more efficient, a one-tube one-step RT-PCR assay was developed and used for the detection of CEVd and HSVd in citrus samples collected from field trees. CEVd and HSVd occurred in 100 and 30% of samples from Lazio, respectively, and in 45 and 9% of samples from Tuscany. Specifically, of 21 citrus cultivars belonging to 9 citrus species and one hybrid, 12 cultivars and the hybrid were infected with CEVd, one cultivar with HSVd, three cultivars with both viroids and 4 cultivars were free from both viroids. The study revealed a wide distribution of the two viroids in the citrus field samples and showed that one-tube one-step RT-PCR assay is a rapid, sensitive and reliable technique for the detection of these viroids. This diagnostic technique is therefore suitable for the preliminary screening of CEVd and HSVd in routine sanitary and certification programmes because it drastically reduces the number of indicator plants needed for biological indexing of the two viroids E' stata effettuata un'indagine in agrumeti del Lazio e della Toscana per determinare la presenza del Viroide dell'esocortite degli agrumi (CEVd) e del Viroide del nanismo del luppolo (HSVd), che causano fitopatie importanti economicamente negli agrumi. Allo scopo di rendere più agevole ed efficiente la diagnosi, è stato sviluppato un saggio RT-PCR one-tube one-step, che è stato utilizzato per l'identificazione di CEVd e HSVd in campioni raccolti da piante di agrumi in campo. CEVd e HSVd erano presenti rispettivamente nel 100 e nel 30% dei campioni del Lazio e nel 45 e 9% di quelli della Toscana. Più in dettaglio, di 21 cultivar appartenenti a 9 specie di agrumi e un ibrido, 12 cultivar e un ibrido erano infetti da CEVd, una cultivar da HSVd, tre cultivar da ambedue i viroidi e 4 cultivar risultavano esenti da ambedue i viroidi. Lo studio ha evidenziato un'ampia distribuzione dei due viroidi nei campioni di campo e ha dimostrato che il saggio RT-PCR one-tube one-step è una tecnica rapida, sensibile e affidabile per la diagnosi di questi viroidi. Questa tecnica diagnostica è perciò adatta per lo screening preliminare di CEVd e HSVd nei programmi sanitari e di certificazione di routine, in quanto riduce drasticamente il numero di piante indicatrici necessarie per l'indexing biologico dei due viroidi.