BF, Dept. of Food Science and Technology, Lj. (BFZIV)
Knjižnica je odprta od pon. do pet. od 7h do 15h.
Izposojeno gradivo lahko vrnete tudi v nabiralnik pred knjižnico.
13.
Poskus izolacije topnega TNF-receptorja p55 : magistrsko delo = An attempt to purify the soluble TNF-receptor p55 : master of science thesis
Stražišar, Monika
Glavni cilj dela je bil doseři ekspresijo topnega dela TNF-receptorja p55 ter izolirati řisto, bioloǴko aktivno obliko. V ta namen smo njegov gen - (s)p55 namnoÍili s tehniko PCR, pri řemer smo ...uporabili oligonukleotida, v katera smovkljuřili restrikcijski mesti NdeI in BamHI, ki sta omogořili subkloniranjev ekspresijski vektor pET-19b ter fuzijo histidinskega podaljǴka na N-terminalni del proteina. Z dodatkom 0,4 mM IPTG v gojiǴře smo dosegli visoko ekspresijo rekombinantnega proteina (His10)p55 (veř kot 30 % celotnih proteinov), ki se je v E. coli akumuliral v obliki inkluzijskih teles. Za njihovo raztapljanje smo uporabili razliřne kombinacije detergentov in denaturantov. Kot najuřinkovitejǴa raztopina za raztapljanje se je izkazala 8 M urea z dodatkom 0,15 % b-merkaptoetanola. Ugotovili smo tudi, da je zelo smiselno predhodno spiranje inkluzijskih teles z 2 % sarkozilom, ker se pri tem odstrani precej proteinov E. coli. Izolacija proteina (His10)p55 je bila na afinitetni kelatni koloni Ni-NTA zaradi prisotnega histidinskega podaljǴka sicer moÍna, vendar je metoda zaradi hitrega padanja kapacitete kolone v navzořnosti mořnega denaturanta in reducenta ter velike neponovljivosti manj primerna za preparativno delo. Modifikacija proteina s sulfitom je prav tako problematiřna, ker se v pufru navzoř cistein veÍe na prosta mesta kolone Ni-NTA. NajboljǴe rezultate je dala predhodna klasiřna renaturacija z redřenjem, kateri je sledila vezava topnega proteina (His10)p55 na kolono Ni-NTA in elucija z gradientom pH od 7,2 do 3,5. Na ta nařin smo uspeli pripraviti manjǴo koliřino topnega (His10)p55 s řistoto viǴjo od 95 %, vendar je bil izkoristek renaturacije zelo majhen in zato postopek ni primeren za preparativno delo. Menimo, da bakterija E. coli za ekspresijo proteina (s)p55,ki ima izjemno veliko Ǵtevilo disulfidnih vezi ni primerna, predvsem zaradi neuřinkovitega procesa renaturacije.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [BF, Oddelek za živilstvo] : [M. Stražišar], 2000
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
Izposojeno gradivo lahko vrnete tudi v nabiralnik pred knjižnico.