Vloga proteina MPP7 pri diferenciaciji celične linije človeških osteoblastov MG63 = The role of MPP7 protein in human osteoblast cell line MG63 differentiation : magistrski študijski program Laboratorijska biomedicina
Dragar, Brina
Vsegenomske študije (GWAS; angl. Genome Wide Association Study) imajo pomembno vlogo pri iskanju novih terapevtskih tarč. S primerjavo pojavnosti genetskih variant pri zdravih in obolelih nam ta ...način preiskovanja omogoča lokalizacijo mest v genomu in prepoznavo genov (posredno tudi proteinov), ki vplivajo na opazovano lastnost. S pomočjo te metode so ugotovili, da obstaja močna povezava med kostno gostoto in variantami membranskega palmitoiranega proteina 7 (MPP7; angl. Membrane Palmitoylated Protein 7). Kljub temu pa še vedno ni povsem znano, kakšna je njegova vloga pri diferenciaciji in aktivaciji kostnih celic. V sklopu magistrske naloge smo želeli potrditi vlogo proteina MPP7 pri diferenciaciji osteoblastov. Kot celični model smo uporabili celice osteosarkoma MG-63. Primerjali smo stopnjo diferenciacije med celicami z izbitim genom za protein MPP7 (MMP7 KO) in kontrolnimi nespremenjenimi celicami MG-63, ki imajo ohranjeno sposobnost izdelave omenjenega proteina. Pri ocenjevanju stopnje razvitosti osteoblastov smo si pomagali z več različnimi metodami. Stopnjo razvoja smo ocenjevali na podlagi izražanja kazalnih genov, značilnih za diferenciacijo osteoblastov, pri čemer smo uporabili metodo kvantitative verižne reakcije s polimerazo (RT-qPCR). Določili smo izražanje gena za z RUNT povezanim transkripcijskim dejavnikom 2 (RUNX2; angl. Runt-Related Transcription Factor 2), gena za alkalno fosfatazo (ALP; angl. Alkaline Phosphatase), gena za kolagen tipa I alfa 1 verige (COL1A1; angl. Collagen Type I Alpha 1 Chain ) in gena za kostni gama karboksglutamat protein oziroma osteokalcin (BGLAP oz. OC; angl. Bone Gamma-Carboxyglutamate Protein). Izražanje posameznih kazalcev smo nato normalizirali glede na izražanje referenčnega gena za TATA-vezavni protein (TBP, angl. TATA-Box Binding Protein). Določili smo tudi kako se s potekom razvoja osteoblastov spreminja aktivnost encima ALP v celicah in celokupno koncentracijo proteinov v celičnih lizatih v različnih časovnih točkah razvoja. Rezultati so pokazali, da je bilo izražanje genov RUNX2 in COL1A1 značilno višje v MMP7 KO in izražanje gena ALP značilno nižje kot v kontrolnih celicah MG-63. Izražanje gena OC se je bilo obeh celičnih kulturah podobno. Prav tako smo opazili manjšo aktivnost ALP pri celicah z izbitim genom za protein MPP7. Med celičnima linijama ni bilo opaznih razlik v celokupni količini proteinov. Glede na pridobljene rezultate lahko sklepamo, da ima protein MPP7 vpliv na razvoj osteoblastov, saj je v celicah osteosarkoma MG-63 MPP7 KO prišlo do počasnejše diferenciacije celic, kot pri celicah, ki so izražale gen MPP7 (KC). Da bi ugotovili natančen mehanizem, preko katerega je protein MPP7 vpleten v celično diferenciacijo, bo potrebno izvesti dodatne raziskave funkcijske genomike.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [B. Dragar], 2021
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
