Cilj istraživanja bio je usporediti osjetljivosti na određene vrste aeroalergena i obolijevanje od tri alergijske bolesti za sve ispitanike zajedno i posebno po spolu, kao i mogućnost prognoze ...pojedinih alergijskih bolesti (astma, alergijski dermatitis i conjunctivitis) na temelju pojedinih aeroalergena, tijekom 1980-tih i 1990-tih godina. Ispitanici u istraživanju bili su 648 muškaraca i 698 žena sa šireg područja Dubrovnika, koji su pokazali pozitivne reakcije na pricktestove i provokacijske testove. Rezultati su pokazali da su osjetljivosti na određene vrste aeroalergena, kao i na obolijevanje od tri alergijske bolesti u razdoblju 1980-tih i 1990-tih bitno različite. Sve statistički značajne razlike pokazuju smjer veće alergološke osjetljivosti na aeroalergene u razdoblju 1990- tih. Mogućnost prognoze pojedinih alergijskih bolesti na temelju pojedinih aeroalergena u oba razdoblja pokazala se najbolja za astmu, a najgora za alergijski konjunktivitis. Kod prognoze obolijevanja od alergijskog dermatitisa na temelju osjetljivosti na aeroalergene, ni kod muškaraca ni kod žena (za razdoblje 1980- tih) regresijski model nije bio statistički značajan. Rezultati daju smjernice korisne za javno zdravstvo, za predviđanje daljnjeg trenda promjena alergijske osjetljivosti na određene aeroalergene, kao i za prevenciju alergijskih bolesti.
Alergija - moderna epidemija Bulat-Kardum, Ljiljana
Medicus (Zagreb, Croatia : 1992),
11/2013, Volume:
22, Issue:
2_Respiratorni_Konti
Journal Article
Peer reviewed
Open access
Učestalost alergijskih bolesti u svijetu u dramatičnom je porastu posljednjih 20-30 godina. Ovaj porast osobito je izražen u dječjoj dobi. Procjenjuje se da 30-40% osoba u svijetu boluje od jedne ili ...više alergijskih bolesti, stotine milijuna osoba pate zbog alergijskog rinitisa, a oko 300 milijuna ima astmu. Prevalencija je astme u odraslih i djece između 1-18% s najvećom prevalencijom u zemljama engleskoga govornog područja. Hrvatska s učestalosti od 8% dječje astme spada u zemlje s umjerenim pobolom. U pokušaju da se objasne epidemiološki trendovi u astmi nastale su teorije koje su definirale nove rizične faktore za razvoj i porast astme i alergija. Higijenska hipoteza tumači da izostala, odnosno smanjena izloženost nekim infekcijama rano u djetinjstvu može uzrokovati porast rizika od razvoja alergije. Prema epigenskoj teoriji porast alergijskih bolesti događa se zbog okolišne ekspozicije intrauterino ili rano u životu (duhanu, prometnom onečišćenju, endotoksinima i folatima iz prehrane), što posreduje adaptaciju gena na okoliš.
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- Food allergy is defined as an adverse health effect arising from a specific immune response that occurs reproducibly on exposure to ...a given food. Currently, food allergy is a major health problem, with an estimated prevalence of about 5% in young children and 3-4% in adults, and the prevalence is increasing. Food allergies present a challenge in the field of diagnostics, since the currently employed allergen extracts frequently give rise to poor specificity and sensitivity of tests. Recombinant DNA technology developed in the 1980s has provided the means for producing allergens that are equivalent to their natural counterparts. The proteins are produced as biochemically defined molecules with consistent structural and immunologic properties. Several hundred allergens have been cloned and expressed as recombinant proteins, and they can provide the means for making a very detailed diagnosis of a patient's sensitization profile. The production of recombinant proteins in a well-characterized form has become an important issue in the pharmaceutical industry. Banana (Musa acuminata) is a very popular fruit worldwide. It is available year round and is very present in human nutrition. However, in 1991 symptoms of allergic reaction to banana were described for the first time. The molecular basis of allergic reactions to banana has been ascribed to five proteins, designated Mus a 1 to 5. The Mus a 5 allergen is a β-1, 3-glucanase belonging to the PR-2 family of proteins and is involved not only in plant defense, but also in diverse physiological and developmental processes. In this thesis banana β-1,3-glucanase was produced as a heterologous protein in Escherichia coli. Its gene (GenBank GQ268963) was cloned into a pGEX-4T expression vector as a fusion protein with glutathione-S-transferase (GST). BL21 cells transformed with the GST-Mus a 5 construct were employed for production of the protein. The conditions for protein expression were optimized by varying the temperature (25, 30 and 37 °C) and duration of protein expression (3, 6 and 12 h). The level of protein production was analyzed by densitometry of the sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel (SDS–PAG) after electrophoretic resolution of the respective cell lysates. The optimal protein expression for downstream processing was obtained after 12 h of cell growth at 25 °C upon addition of IPTG. In addition, since a large amount of rGST-Mus a 5 was detected in inclusion bodies we designed an enzyme assay for monitoring expression and solubility of GST fusion proteins targeted to inclusion bodies. The activity of rGST was assayed under denaturing conditions using a colorimetric assay and it was shown that rGST preserves 50% of activity in 4M urea. This assay was further successfully used to monitor rGST-Mus a 5 expression in inclusion bodies. Recombinant GST-Mus a 5 purified by glutathione affinity chromatography revealed a molecular mass of about 60 kDa. The IgE and IgG reactivity of the rGST-Mus a 5 was confirmed by dot blot and 2D blot analysis with sera of individual patients from subjects with banana allergy and polyclonal rabbit antibodies against banana extract, respectively. These results indicate that purified recombinant glucanase is a potential candidate for banana allergy diagnosis.- Аlergije na hranu se definišu kao nepoželjne imunološke reakcije koje se javljaju svaki put prilikom konzumiranja odrеđene hranljive namirnice. Danas alergije na hranu predstavljaju značajan zdravstveni problem, i smatra se da oko 5% dece i 3-4% odraslih ljudi pati od ovog poremećaja, a uočena je i tendencija rasta broja alergičnih pacijenata. Istovremeno, čak i samo dijagnostifikovanje alergije na hranu predstavlja izazov, s obzirom da se u tu svrhu trenutno upotrebljavaju alergeni ekstrakti, koji su uzrok slabe specifičnosti i osetljivosti dijagnostičkih testova. Rekombinantna DNK tehnologija je razvijena tokom 80-tih godina prošlog veka i pružila je mogućnost proizvodnje rekombinantnih proteina koji bi bili ekvivalentni prirodnim alergenima. Ovi proteini se proizvode kao biohemijski definisani molekuli sa ujednačenim strukturnim i imunološkim osobinama. Do danas je nekoliko stotina različitih alergena klonirano i eksprimirano u obliku rekombinantnih proteina. Ovi rekombinantni alergeni su omogućili znatno detaljniju dijagnostiku senzitizacionih profila alergičnih pacijenata. Iz ovog razloga je proizvodnja dobro okarakterisanih rekombinantnih proteina postala važno pitanje u farmaceutskoj industriji. Banana (Musa acuminata) je veoma popularno voće širom sveta i prisutno je tokom cele godine. Međutim, 1991. godine su prvi put opisani simptomi alergijske reakcije na ovo voće. Do danas je identifikovano 5 proteina koji čine molekulsku osnovu alergije na bananу. Ovi proteini su označeni kao Mus a 1 do 5. Alergen Mus a 5 predstavlja β-1, 3-glukanazu iz PR-2 porodice proteina i učestvuje kako u odbrani biljke, tako i u mnogim drugim raznolikim fiziološkim i razvojnim procesima. Tokom izrade ove disertacije, β-1, 3-glukanaza je proizvedena kao heterologi protein u bakteriji Escherichia coli. Gen glukanaze iz banane (GenBank GQ268963) je ukloniran u ekspresioni vektor pGEX-4T sa glutation-S-transferazom (GST). BL21 ćelije transformisane sa GST-Mus a 5 konstruktom su korišćene za proizvodnju proteina. Uslovi za ekspresiju proteina su optimizovani variranjem temperature (25, 30 i 37°C) i dužine trajanja proteinske sinteze (3, 6 i 12 h). Nivo proizvodnje proteina je analiziran denzitometrijom SDS–PA gela nakon elektroforetskog razdvajanja ćelijskih lizata. Optimalna proizvodnja proteina za njegovo dalje procesovanje je dobijena gajenjem ćelija nakon dodatka IPTG na 25 °C tokom 12 h. S obzirom da je znatna količina rGST-Mus a 5 detektovana u inkluzionim telima, tokom izrade ove disertacije osmišljen je enzimski esej za proveru ekspresije i solubilnosti GST fuzionih proteina u inkluzionim telima. Aktivnost rGST-a je merena pod denaturišućim uslovima i pokazano je da rGST zadržava 50% svoje aktivnosti u 4M urei. Ovaj esej je zatim uspešno korišćen i za detekciju ekspresije rGST-Mus a 5 u obliku inkluzionih tela. GST-Mus a 5 prečišćen je afinitetnom hromatografijom sa glutationom i određena je molekulskа masа od 60 kDa. IgE i IgG reaktivnost izolovane glukanaze potvrđena je u “dot blot-u” i 2D imunoblotu sa pojedinačnim serumima osoba alergičnih na bananu, i sa poliklonskim zečijim antitelima na ekstrakt bananе. Dobijeni rezultati ukazuju da je prečišćena rekombinantna glukanaza dobar potencijalan kandidat za dijagnozu alergije na bananu.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Suvremeni pogledi na alergijske bolesti Kanceljak-Macan, Božica
Arhiv za higijenu rada i toksikologiju,
06/2004, Volume:
55, Issue:
2-3
Conference Proceeding
Peer reviewed
Open access
Alergijske bolesti rastući su zdravstveni problem u industrijski razvijenim zemljama, ali i u zemljama u razvoju, i to osobito u djece i mlađih odraslih osoba te se smatraju bolestima moderne ...civilizacije. Populacijska istraživanja pokazala su kumulativnu prevalenciju alergijskih bolesti u djetinjstvu od 25-30 %, uključujući alergijski rinokonjunktivitis, astmu i dermatitis. Uzroci porasta alergijskih bolesti još nisu sasvim razjašnjeni. Hipotetskim rizičnim čimbenicima smatraju se: nasljedna predispozicija, izloženost alergenima, onečišćenja okoliša, smanjena stimulacija imunosnog sustava u ranim razvojnim stadijima i suvremeni način života. Prema postojećim saznanjima alergijske bolesti treba tretirati kao općenit poremećaj zdravlja. One se mogu javiti u bilo koje doba života, u različitim organima istodobno ili u različitome vremenskom slijedu, dugotrajna su tijeka i zahtijevaju kompleksnu medicinsku skrb. Značajno utječu na kvalitetu života i smanjenje radne sposobnosti oboljelih te su veliko socioekonomsko opterećenje za pojedinca i društvo. U ovom prikazu iznesena su neka suvremena stajališta i dileme s gledišta epidemiologije, patogeneze, dijagnostike, liječenja i prevencije alergijskih bolesti.
Sindrom oralne alergije je jedan od najčešćih oblika alergije na hranu. Ovaj sindrom uključuje simptome kao što su svrbež i oticanje usnica, nepca i jezika, koji nastaju obično nakon konzumacije ...svježeg voća i povrća. Patogenetski, dolazi do križne reakcije između antigena peludi i antigena iz hrane kao što je svježe voće, povrće i orašasti plodovi, koji su strukturalno slični peludi. Ovaj sindrom pripada alergijskim reakcijama tipa I (IgE posredovane reakcije) koje uključuju reakciju specifičnog IgE sa specifičnim alergenom odnosno proteinom peludi i s proteinom iz hrane. Dijagnozu postavljamo prvenstveno na temelju anamneze, te potvrđujemo kožnim testiranjem, testovima in vitro i provokacijskim testovima. Diferencijalna dijagnoza uključuje mnoge bolesti (npr. sindrom pečenja usta, angioedem, peludna groznica i još različite oralne bolesti) pa je upravo zbog toga potreban multidisciplinarni pristup te uključiti stručnjake različitih specijalnosti u postupak dijagnostike i liječenja. Terapija uključuje izbjegavanje odgovornog voća i povrća ili njihovu termičku obradu te primjenu antihistaminika, ponekad su potrebne i jače terapijske mjere, npr. u liječenju anafilaktične reakcije. U ovome radu prikazana je etiopatogeneza, klinička slika i simptomi, dijagnostički postupci i liječenje oralnog alergijskog sindroma.
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- Food allergy is an IgE mediated reaction of the immune system to food components, most commonly to food proteins. Food allergies ...develop after primary sensitization through the gastrointestinal tract and the mechanism behind this route of sensitization has not yet been elucidated. It has been postulated that in order to sensitize the organism through an oral route, food allergens must reach the gastrointestinal mucosa in at least a partially intact form in order to interact with the immune system. In addition to the unclear mechanism of sensitization, food allergies also present a challenge in the field of diagnostics, while the only effective therapy method to date is the strict avoidance of allergenic substances. During the last 30 years, since its first appearance on the world market, kiwifruit has become one of the more popular components of human nutrition, and yet, at the same time, it has emerged as one of the ten most frequent elicitors of allergic reactions to food. Actinidin, a cysteine protease from the papain family, is the most abundant protein in the pulp of kiwifruit and is considered the major allergen of this fruit. In this thesis the structural and immunological characteristics of actinidin were examined in order to shed light on the mechanism of oral sensitization and to aid in the improvement of kiwifruit allergy diagnosis. It was shown that actinidin purified from fresh kiwifruit under native conditions represents a mixture of the active and inactive enzyme. Differences in electrophoretic mobility, IgE binding in immunoblot and patient response in skin prick tests were shown for proteolytically active and inhibited actinidin. It was demonstrated that only the active enzyme survives conditions of simulated gastric and intestinal fluid while preserving its immunogenicity and proteolytic activity. The observed differences between the active and inhibited form of actinidin are most likely a consequence of differences in the conformation of the enzyme that arise upon inhibition, a hypothesis supported by results from CD spectroscopy and fluorimetry. Results presented in this thesis contribute to the effort of elucidating the mechanism of oral sensitization to kiwifruit by shedding light on the features of actinidin which enable it to reach the intestinal mucosa in a proteolytically active form. Additionally, since the influence of the activity (conformation) of actinidin on results of in vitro and in vivo diagnostic assays was demonstrated, results from this thesis could contribute to the improvement of kiwifruit allergy diagnosis. In addition, it was shown that the relative ratio of active and inhibited actinidin in kiwifruit protein extract depends on the chosen method for extract preparation. Apart from influencing future kiwifruit allergy diagnostic procedures, these results can be used to optimise the extraction procedure for kiwifruit protein extracts. In this thesis the possibility of using kiwifruit extract as a plant milk clotting agent was analysed. It was shown that the addition of kiwifruit extract prepared at pH 5.0 to cow milk leads to the formation of a casein clot. The obtained clot and whey were shown to have identical protein profiles to the clot and whey obtained through the activity of calf chymosin. The ratio between coagulating and proteolytical activity towards cow milk was only 30 % less favorable when using kiwifruit extract.- Alergije na hranu su IgE antitelima posredovane imunološke reakcije na komponente hrane, najčešće proteine. Razvijaju se nakon primarne senzitizacije preko gastrointestinalnog trakta, i za sada nije poznat mehanizam senzitizacije ovim putem. Smatra se da bi alergeni proteini hrane morali da prođu kroz gastrointestinalni trakt barem delimično očuvane strukture kako bi doveli do senzitizacije. Pored nerazjašnjenog mehanizma senzitizacije, alergije na hranu predstavljaju i izazov na polju dijagnostike, dok je jedina do sada potpuno uspešna metoda terapije strogo izbegavanje unosa alergene namirnice. Tokom svega 30-tak godina od svog prvog pojavljivanja na svetskom tržištu pa do danas plod kivija je postao jedna od omiljenijih namirnica u ljudskoj ishrani, ali je istovremeno dospeo i među deset najčešćih uzročnika alergije na hranu. Aktinidin, cistein proteaza iz papainske familije, je najzastupljeniji protein pulpe kivija i smatra se glavnim alergenim molekulom ovog izvora. U oviru ove disertacije ispitivane su strukturne i imunološke osobine aktinidina u cilju rasvetljavanja puta oralne senzitizacije i poboljšanja dijagnostike alergije na kivi. Pokazano je da aktinidin prečišćen iz svežeg ploda kivija pod nativnim uslovima predstavlja smešu aktivnog i neaktivnog enzima. Između proteolitički aktivnog i neaktivnog aktinidina postoji razlika u elektroforetskoj pokretljivosti, sposobnosti vezivanja IgE u imunoblotu i obrascima reagovanja pacijenata u kožnim probama. Pokazano je da samo aktivni enzim preživljava uslove simuliranog želudačnog i crevnog soka i da nakon ovih tretmana pokazuje očuvanu imunogenost i proteolitičku aktivnost. Uočene razlike između aktivnog i inhibiranog oblika aktinidina najverovatnije su posledica razlika u strukturi enzima koje nastaju prilikom inhibicije, a ova pretpostavka je potkrepljena rezultatima CD spektroskopije i fluorimetrije. Rezultati dobijeni u ovoj disertaciji doprinose rasvetljavanju mehanizama oralne senzitizacije na kivi ukazujući na strukturne osobine aktinidina koje mu omogućavaju da u proteolitički aktivnom obliku dospe do intestinalne mukoze. S obzirom da je pokazan uticaj aktivnosti (konformacije) aktinidina na in vivo i in vitro dijagnostičke eseje prikazani rezultati mogu doprineti i poboljšanju dijagnostike alergije na kivi. Pokazano je i da relativni odnos aktivnog i inhibiranog aktinidina u ekstraktu kivija zavisi od načina pripreme ekstrakta. Ovi rezultati, osim u poboljšanju dijagnostike alergije na kivi, mogu biti upotrebljeni i za optimizaciju proteinskih ekstrakata kivija i njihovu upotrebu u industriji mleka. U ovoj disertaciji je ispitana moguća upotreba ekstrakta kivija kao sredstva za koagulaciju mleka u procesu proizvodnje sira. Dobijeni rezultati su pokazali da dodavanjem proteinskog ekstrakta kivija pripremljenog na pH 5.0 u kravlje mleko dolazi do nastanka gruševine i surutke identičnih proteinskih profila kao prilikom dodavanja himozina poreklom iz želuca teleta. Izmeren odnos koagulacione i proteolitičke aktivnost ovog ekstrakta prema mleku je bio svega 30% lošiji od himozina.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Oralni alergijski sindrom (OAS) je alergijska reakcija posredovana IgE protutijelima koja se javlja nakon konzumacije svježeg voća i povrća u bolesnika s alergijom na peludi. Simptomi nastaju zbog ...unakrsne reaktivnosti između peludi i hrane biljnog podrijetla, a koristi se i naziv sindrom alergije na pelud i hranu. Bolesnici su senzibilizirani na alergene peludi i iskazuju alergijsku reakciju na hranu strukturne sličnosti s alergenima peludi. OAS se rijetko viđa u male djece, ali mu učestalost raste s dobi pa je najčešća manifestacija alergije na hranu u adolescenata i odraslih. Simptomi su najčešće lokalizirani u usnoj šupljini, ali se mogu javiti i trbušni simptomi na probavnom sustavu i anafilaksija. Bolesnici u pravilu toleriraju termički obrađenu hranu, iako u onih s atopijskim dermatitisom može doći do pogoršanja ekcema. U slučaju generaliziranih simptoma i anafilaksije savjetuje se strogo izbjegavanje i mjere prve pomoći, uključujući autoinjektor adrenalina.
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- The replacement of fruit allergen extracts with component-resolved allergens
seems to be a promising concept. In this regard, the ...evaluation of allergenic
properties of a particular allergen candidate for component-resolved
diagnosis needs to be performed. In this study evaluation of the biochemical
and allergenic properties of cysteine proteinase inhibitor purified from
green kiwifruit (nCPI) was performed. The IgE reactivity was detected both in
vitro (dot blot) and in vivo (skin prick test and basophile activation
assay), while IgG rectivity in both Western blot analysis nd ELISA test.
Biological activity was assesed by examining the growth inhibition of three
plant pathogenic bacterial strains (A.tumefaciens, B. cepacia and, to a
lesser extent, E. carotovora) and two phytopathogenic fungi (A. radicina and
B. cinerea) both in vitro and in vivo. Due to low abundance of nCPI molecule
in kiwifruit the coding sequence of kiwi CPI was efficiently expressed in
Escherichia coli. Molecular identity of rCPI to its natural counterpart has
been clearly demonstrated in structural (mass fingerprint), immunological
(immunoblot and ELISA inhibition) and biological sense (inhibition of papain
proteolytic activity and antifungal activity). Based on the obtained results
it is clear that nCPI is a clinically relevant kiwifruit allergen, and as
such should be involved in the component-resolved diagnosis of kiwifruit
allergy. Standard immunotherapeutic approaches in food allergy are not
adequate due to unacceptably high risk-to-benefit ratio, however
hypoallergenic forms of molecules with reduced IgE binding potential seem to
be promising concept. Diversification of the gene encoding the mature form of
the actinidin was done via error prone PCR, followed by cloning of the
library into the Aga2 yeast surface display expression system. After three
rounds of sorting by FACS, randomly picked colonies were further analyzed by
dot blot and ELISA using pool of 6 kiwifruit allergic patients. Compared to
both natural and recombinant wild type actinidin two of the mutants exhibited
diminished ability to activate basophils. This kind of mutational analysis
could be a useful technique in the development of vaccines for allergy
therapy, since substitution or deletion of amino acids within the IgE binding
epitopes could result in reduction or elimination of the anaphylactic
potential of the molecule.
SA Zamena alergenih ekstrakata pojedinačnim prirodnim i rekombinantnim
alergenima u dijagnostici alergije je obećavajući koncept i naziva se
dijagnostika razdvojena na komponente CRD (engl. component-resolved
diagnosis). U tom smislu, neophodno je proceniti alergeni potencijal svakog
pojedinačnog kandidata za primenu u CRD. U ovoj tezi ocenjivane su
biohemijske i alergene osobine cistein proteaznog inhibitora (nCPI) iz ploda
zelenog kivija. Prečišćeni nCPI pokazao je IgE reaktivnosti in vitro (dot
blot) i in vivo (kožne probe i aktivacija bazofila), dok je IgG reaktivnost
pokazana u Western blotu i ELISA-i. Biološka aktivnost je ocenjena
ispitivanjem antimikrobnog potencijala nCPI naspram tri soja fitopatogenih
bakterija (A. tumefaciens, B. cepacia i u manjem obimu bakterije E.
carotovora) kao i dva izolata fitopatogenih gljiva (A. radicina i B.cinerea),
kako in vitro, tako i in vivo. Zbog slabe zastupljenosti nCPI u plodu kivija
kodirajuća sekvenca nCPI je efikasno eksprimirana u Escherichia coli.
Molekulska identičnost rCPI u odnosu na prirodni molekul pokazana je
strukturnim (maseni otisak prsta) i imunohemijskim (imunoblot i ELISA) i
biološkim (inhibicija proteazne aktivnosti papaina i rasta fitopatogenih
gljiva) testovima. Na osnovu dobijenih rezultata jasno je da je CPI klinički
relevantan alergen i kao takav trebalo bi da bude uključen u dijagnostiku
alergije na kivi razdvojenu na komponente. Standardni imunoterapijski pristup
u tretmanu alergije na hranu nije adekvatan zbog visokog rizika, pa je
primena hipoalergenih molekula koji smanjeno vezuju IgE obećavajući koncept.
Diverzifikacija gena za aktinidin rađena je lančanom reakcijom polimeraze
sklone greškama epPCR (engl. error-prone PCR) koja je praćena kloniranjem
biblioteke u Aga2 ekspresioni sistem za ekspresiju na površini ćelija kvasca.
Nakon tri runde sortiranja, nasumično odabrani klonovi su dalje analizirani
dot blotom i ELI- Zamena alergenih ekstrakata pojedinačnim prirodnim i rekombinantnim
alergenima u dijagnostici alergije je obećavajući koncept i naziva se
dijagnostika razdvojena na komponente CRD (engl. component-resolved
diagnosis). U tom smislu, neophodno je proceniti alergeni potencijal svakog
pojedinačnog kandidata za primenu u CRD. U ovoj tezi ocenjivane su
biohemijske i alergene osobine cistein proteaznog inhibitora (nCPI) iz ploda
zelenog kivija. Prečišćeni nCPI pokazao je IgE reaktivnosti in vitro (dot
blot) i in vivo (kožne probe i aktivacija bazofila), dok je IgG reaktivnost
pokazana u Western blotu i ELISA-i. Biološka aktivnost je ocenjena
ispitivanjem antimikrobnog potencijala nCPI naspram tri soja fitopatogenih
bakterija (A. tumefaciens, B. cepacia i u manjem obimu bakterije E.
carotovora) kao i dva izolata fitopatogenih gljiva (A. radicina i B.cinerea),
kako in vitro, tako i in vivo. Zbog slabe zastupljenosti nCPI u plodu kivija
kodirajuća sekvenca nCPI je efikasno eksprimirana u Escherichia coli.
Molekulska identičnost rCPI u odnosu na prirodni molekul pokazana je
strukturnim (maseni otisak prsta) i imunohemijskim (imunoblot i ELISA) i
biološkim (inhibicija proteazne aktivnosti papaina i rasta fitopatogenih
gljiva) testovima. Na osnovu dobijenih rezultata jasno je da je CPI klinički
relevantan alergen i kao takav trebalo bi da bude uključen u dijagnostiku
alergije na kivi razdvojenu na komponente. Standardni imunoterapijski pristup
u tretmanu alergije na hranu nije adekvatan zbog visokog rizika, pa je
primena hipoalergenih molekula koji smanjeno vezuju IgE obećavajući koncept.
Diverzifikacija gena za aktinidin rađena je lančanom reakcijom polimeraze
sklone greškama epPCR (engl. error-prone PCR) koja je praćena kloniranjem
biblioteke u Aga2 ekspresioni sistem za ekspresiju na površini ćelija kvasca.
Nakon tri runde sortiranja, nasumično odabrani klonovi su dalje analizirani
dot blotom i ELISA testom koristeći serum 6 osoba alergičnih na kivi U
poređenju sa prirodnim i rekombinantnim aktinidinom, dva mutanata su pokazala
smanjenu sposobnost aktivacije bazofila. Ovakav tip mutacione analize mogao
bi da bude korisna tehnika u razvoju vakcina za terapiju alergije, s obzirom
da supstitucija ili delecija aminokiselina u IgE vezujućim epitopima može da
smanji ili eliminiše anafilaktički potencijal molekula.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Cilj je bio istražiti učestalost alergijskih bolesti i atopije u dječjoj dobi na području Brodsko-posavske županije, moguće etiološke činitelje alergijskih bolesti te usporediti dobivene rezultate s ...rezultatima istraživača koji su rabili iste metode u Hrvatskoj i u svijetu. Istraživanje je obuhvatilo 1687 školske djece u dobi od 10-11 godina. Primijenjen je standardizirani upitnik Međunarodnog istraživanja o astmi i alergijama u dječjoj dobi za procjenu učestalosti alergijskih bolesti. Ispitanicima za koje smo dobili pismenu suglasnost roditelja učinjen je kožni ubodni test na inhalacijske i nutritivne alergene. Tijekom djetinjstva bronhoopstrukcije je prijavilo 22,7%, simptome rinitisa 22,5%, a simptome atopijskog dermatitisa 17,8% ispitanika. Učestalost alergijskih bolesti u posljednjih 12 mjeseci iznosila je 7,9% za bronhoopstrukciju, 9,9% za simptome rinokonjunktivitisa i 10,1% za simptome atopijskog dermatitisa. Kožni test učinjen je u skupini od 1070 (63.5%) djece, od kojih je 20,2% imalo pozitivan kožni test na najmanje jedan od primijenjenih alergena, s najčešćom senzibilizacijom na alergene grinje. Istraživanjem rizičnih činitelja uočeno je kako alergijske bolesti u obitelji, alergijska senzibilizacija i izloženost duhanskom dimu povećavaju rizik za alergijske bolesti u dječjoj dobi. Usporedbom s drugim međunarodnim centrima Brodsko-posavska županija se svrstava u područja s umjerenom učestalošću alergijskih bolesti i atopije u dječjoj dobi.
PDF
