(UL)
-
Vloga katepsina X v aktivaciji mikroglije, posredovani z agonisti TLR receptorjev = Role of cathepsin x in microglia activation mediated through TLR agonists : magistrska naloga : enovit magistrski študijski program FarmacijaPertoci, VesnaDobro uravnavana aktivacija mikroglije je izjemnega pomena za zaščito centralnega živčnega sistema pred različnimi grožnjami. Slabo uravnavana in prekomerna aktivacija mikroglije privede do nastanka ... pretiranega vnetnega odziva, ki škoduje nevronom in povzroča nevrodegeneracijo, ki vodi v razvoj življenjsko ogrožajočih bolezenskih stanj, kot je Parkinsonova bolezen (PB). Predhodne raziskave so že pokazale, da aktivirana mikroglija v svojo okolico poleg vnetnih dejavnikov in citokinov sprošča tudi cisteinske katepsine, med njimi tudi katepsin X. Za slednjega je bilo pokazano, da je pomemben regulator nevrodegeneracije, povzročene z vnetnimi procesi, v katerih sodelujejo celice mikroglije. V sklopu magistrske naloge smo podrobneje raziskali vpliv aktivacije mikroglije na vnetni odziv preko sočasne aktivacije alfaToll-u alfa podobnih receptorjev (TLR), in sicer TLR3 in TLR4, obenem pa smo opredelili vlogo katepsina X v tem procesu. Poskuse smo izvedli na celičnem modelu aktivirane mikroglije z uporabo celic BV2, ki smo jih stimulirali z agonistoma receptorjev TLR3 in TLR4, in sicer s poly(I:C) in LPS. S pomočjo spektrofotometrije in pretočne citometrije smo preverili vpliv aktivacije mikroglije, v prisotnosti ali odsotnosti zaviralca katepsina X, AMS36, na celično preživetje in nivo vnetnega odziva. Spektrofotometrično smo določili tudi aktivnost kaspaze-3 in katepsina X, medtem ko smo izražanje katepsina X preverili z uporabo encimsko- imunskega testa na trdni podlagi (ELISA), njegovo znotrajcelično lokalizacijo pa z uporabo imunofluorescenčne konfokalne mikroskopije. Za določanje izražanja inducibilne NO sintaze (iNOS) smo uporabili prenos western. Sočasna aktivacija TLR3 in TLR4 z agonistoma poly(I:C) in LPS je v primerjavi z enostransko stimulacijo s posameznim agonistom izkazovala močnejši, sinergistični učinek na aktivacijo celic mikroglije BV2, opredeljeno preko merjenja koncentracije sproščenih vnetnih dejavnikov, in sicer dušikovega oksida (NO), interlevkina-6 (IL-6) in tumorje-nekrotizirajočega faktorja alfa (TNF-alfa). Meritve izražanja in aktivnosti katepsina X v celičnih lizatih in supernatantih aktivirane mikroglije so pokazale, da sočasna aktivacija TLR3 in TLR4 s poly(I:C) in LPS v približno enaki meri kot enostranska stimulacija z LPS značilno poveča nivo proteina kot tudi aktivnost katepsina X v supernatantih celic BV2, medtem ko se njegova aktivnost v celicah značilno zniža. Z opazovanjem znotrajcelične lokalizacije katepsina X smo pokazali, da ko-aktivacija celic mikroglije značilno poveča lokalizacijo katepsina X ob plazemski membrani in hkrati zmanjša lokalizacijo slednjega v lizosomskih veziklih, kar dodatno nakazuje na znotrajcelično translokacijo katepsina X v aktivirani mikrogliji. Z uporabo ireverzibilnega specifičnega zaviralca katepsina X, AMS36, smo v nadaljevanju potrdili vlogo katepsina X kot mediatorja aktivacije mikroglije, saj je prisotnost AMS36 pomembno zmanjšala koncentracijo sproščenih vnetnih dejavnikov NO, IL-6 in TNF-% iz ko-aktiviranih celic mikroglije, hkrati pa je AMS36 vplival tudi na zmanjšano izražanje iNOS po ko-stimulaciji mikroglije. Zaviranje katepsina X je zmanjšalo tudi delež celične smrti in apoptozo aktivirane mikroglije, spodbujene s sočasno stimulacijo z LPS in poly(I:C), hkrati pa je bil opazen vpliv AMS36 na povišano aktivnost kaspaze-3 v aktivirani mikrogliji. Nenazadnje smo na ko-kulturnem modelu celic mikroglije BV2 in nevronskih celic SH-SY5Y pokazali tudi zaščitno delovanje zaviralca katepsina X na nevronske celice. Dodatek AMS36 pred ko-stimulacijo celic mikroglije z LPS in poly(I:C) je namreč značilno zmanjšal degeneracijo nevronskih celic, ki so bile izpostavljene supernatantu aktivirane mikroglije. Rezultati, pridobljeni v sklopu magistrske naloge, torej nakazujejo na pomembno vlogo katepsina X pri ko-aktivaciji mikroglije in uravnavanju vnetnega odziva, zato katepsin X predstavlja pomembno tarčo pri načrtovanju strategij zdravljenja nevrodegenerativnih bolezni povzročenih z vnetjem, kot je PB.Type of material - master's thesis ; adult, seriousPublication and manufacture - Ljubljana : [V. Pertoci], 2019Language - slovenianCOBISS.SI-ID - 4737393
Author
Pertoci, Vesna
Other authors
Pišlar, Anja
Topics
Živčevje |
Parkinsonova bolezen |
katepsin X |
mikroglija |
agonisti receptorjev TLR |
vnetni odziv |
zaviralec katepsina X
Library | Call number – location, accession no. ... | Copy status |
---|---|---|
Faculty of Pharmacy, Lj. | Knjižnica emšf 542 PERTOCI VESNA Vloga 708 IN: 0016207 |
available - reading room |
Shelf entry
Permalink
- URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year | Impact factor | Edition | Category | Classification | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Select the library membership card:
If the library membership card is not in the list,
add a new one.
DRS, in which the journal is indexed
Database name | Field | Year |
---|
Links to authors' personal bibliographies | Links to information on researchers in the SICRIS system |
---|---|
Pertoci, Vesna | |
Pišlar, Anja | 32035 |
Source: Personal bibliographies
and: SICRIS
Select pickup location:
Material pickup by post
Delivery address:
Address is missing from the member's data.
The address retrieval service is currently unavailable, please try again.
By clicking the "OK" button, you will confirm the pickup location selected above and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the above pickup location and delivery address, and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the address selected above and complete the reservation process.
Notification
Automatic login and reservation service currently not available. You can reserve the material on the Biblos portal or try again here later.
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
Pickup location | Material status | Reservation |
---|
Reservation in progress
Please wait a moment.
Reservation was successful.
Reservation failed.
Reservation...
Membership card:
Pickup location: