U ovom su radu provedene spektrofotometrijske metode za brzu analizu uzoraka propolisa iz različitih područja Republike Hrvatske. S ciljem određivanja glavnih skupina bioaktivnih spojeva u propolisu, optimizirane i validirane su tri spektrofotometrijske metode: Folin-Ciocalteuova metoda za određivanje ukupnih fenola i dvije različite metode za sadržaj ukupnih flavonoida - metoda kompleksiranja s aluminijevim kloridom za ukupne flavone/ flavonole te 2,4-DNPH metoda za ukupne flavanone/dihidroflavonole. Validacijom su određeni sljedeći parametri: linearnost, osjetljivost, raspon, točnost, granica detekcije, granica kvantifikacije, preciznost i robusnost. Za provedbu validacijskog protokola korišteni su standardi polifenola, uključujući galnu kiselinu (GA), pinocembrin (PC), galangin (GN), kvercetin (QC) te smjesu pinocembrina i galangina (PC-GN). Validiranim metodama analizirano je šest uzoraka sirovog propolisa iz kontinentalne i jadranske regije Hrvatske. Primijećena je velika raznolikost u sadržaju ukupnih fenola, ukupnih flavona/flavonola te ukupnih flavanona/dihidroflavonola među uzorcima iz dviju hrvatskih regija. Iako metode ekstrakcije (ultrazvučna ekstrakcija ili ekstrakcija potpomognuta mikrovalovima) nisu pokazale statistički znakovitu razliku u obliku prinosa ekstrakcije (P > 0,05), te gledajući koncentracije polifenola cjelokupno, ultrazvučna je ekstrakcija bila selektivnija. Nadalje, velik utjecaj na konačne koncentracije ukupnih fenola i ukupnih flavona/flavonola imao je standard korišten za izradu kalibracijske krivulje. Dobivena je dobra linearnost, točnost, ponovljivost, srednja preciznost, granica detekcije i granica određivanja u svim trima spektrofotometrijskim metodama te su ovi rezultati temelj za daljnja istraživanja pojedinačnih polifenolnih spojeva u uzorcima propolisa.