Procjena reproduktivnih indikatora u stadima koza u Kolumbiji fokusirana je na mužjake i od osnovne je važnosti za postizanje optimalnih produktivnih parametara. Cilj je ove studije bio ocijeniti ...kvalitetu sjemena jaraca kroz konvencionalnu i funkcionalnu analizu sjemena. Prikupljeni su uzorci sjemena osam jaraca te su procijenjeni konvencionalni (volumen, izgled, boja, pokretljivost, vitalnost i morfologija) i funkcionalni (integritet stanične membrane, potencijal mitohondrijske membrane, integritet DNK, peroksidacija lipida i proizvodnja reaktivnih spojeva kisika) parametri. Rezultati su pokazali prosječni opseg skrotuma od 25,69 cm, 0,51 mL za volumen sjemena, 1936 x 106 spermija/mL za koncentraciju. Prosječna pojedinačna pokretljivost bila je 63,37 %, vitalnost je bila četiri, a postotak abnormalnosti bio je 7,75 %. Pojedinačna pokretljivost povezana je s potencijalom mitohondrijske membrane (r=0,840, P=0,009) i proizvodnjom reaktivnih spojeva kisika (r=-0,91, P=0,001). Prosjek stanica s visokim potencijalom mitohondrijske membrane bio je 52,94 %, dok je bilo 39,29 % nekrotičnih stanica, prosječni indeks fragmentacije DNK bio je 12,5 %, proizvodnja reaktivnih spojeva kisika bila je 38,68 %, analiza lipoperoksidacije bila je u prosjeku 7,33 %, a integritet membrane 54,77 %. Rezultati utvrđuju parametre za sjeme antioquia koza i potvrđuje da sjeme jaraca predstavlja dobru kvalitetu i moglo bi se koristiti u programima umjetne oplodnje.
Posljedice infekcije herpes virusom-1 svinja (SuHV-1) uzročnikom bolesti Aujeszkoga (BA) dobro su istražene, ali, manje je poznat učinak imunomodulatora (IM) mikrobnog podrijetla (virusnog ili ...bakterijskog) primijenjenih u kombinaciji s atenuiranim cjepivom protiv BA. Učinak parenteralne primjene IM-a, inaktiviranog virusa Parapoxvirus ovis ili kombinacije inaktivirane bakterije Propionibacterium granulosum i lipopolisaharida bakterije Escherichia coli i cjepiva koje sadržava atenuirani virus BA (SuHV-1, soj Bartha) na udio CD3-CD21+ B limfocita periferne krvi analiziran je protočnom citometri¬jom u krvi 30 komercijalnih križanaca svinja u dobi od tri mjeseca bez protutijela za virus BA. Prisustvo je protutijela za glikoproteine B (gB) i E (gE) virusa BA provjereno imunoenzimnim testom (engl. Enzyme Linked Immunosorbant Assay, ELISA). Dobiveni su rezultati uspoređeni između 6 pokusnih skupina tj. između svinja koje su primile: cjepivo (1. skupina), IM bakterijskog podrijetla (2. skupina), IM virusnog podrijetla (3. skupina), svinja koje su istovremeno primile cjepivo i IM bakterijskog podrijetla (4. skupina) ili cjepivo i IM viruisnog podrijetla (5. skupina) te netretirane, kontrolne skupine svinja (6. skupina). Usporedba udjela B limfocita u uzorcima krvi cijepljenih svinja 11. dan pokusa pokazali su prolazno smanjenje sred¬nje vrijednosti udjela B limfocita za koje se nije moglo pretpostaviti da je povezano s pojavom specifičnih protutijela, jer je smanjenje srednje vrijednosti udjela B limfocita bilo i u kontrolnoj skupini istoga dana. Naši su rezultati pokazali da primjena samo IM-a, kao i njihovih kombinacija s atenuiranim cjepivom protiv BA, nisu imali značajan utjecaj na udio B limfocita periferne krvi u tovljene prasadi.
Immunological alterations may led to the reduction in capacity and endurance levels in elite athletes by e.g. increased susceptibility to infections. There is a need to explain the impact of ...intensive physical effort on the CD4
memory T cell subsets.
Fourteen participants median aged 19 years old (range 17-21 years) were recruited form Pogoń Szczecin S.A., soccer club. They performed progressive efficiency test on mechanical treadmill until exhaustion twice: during preparatory phases to spring and autumn competition rounds. We examined the influence of exhaustive effort on the selected CD45
, especially CD4
memory T cell subsets and inflammation markers determined before, just after the test and during recovery time.
Significant changes in total CD45
cells and decrease in T lymphocytes percentage after the run was observed. Significant fluctuations in T cells' distribution were related not only to the changes in Th or Tc subsets but also to increase in naïve T cell percentage during recovery. Increase in TNF-α and IL-8 post-exercise, IL-6 and IL-10 plasma levels in recovery was also found.
The novel finding of our study is that the run performed on mechanical treadmill caused a significant release of CD4
T naïve cells into circulation. Post-exercise increase in circulating NK cells is related with fast biological response to maximal effort. However, at the same time an alternative mechanism enhancing inflammation is involved.
During karate fight muscles work at a very high intensity, and their contractions are extremely strong. The movement pattern contains a great number of feints, dodges, frequent changes in movements' ...tempo and direction, hits and kicks, all of which is highly stressful for athlete's organism, including the immune system.
T lymphocyte subsets' distribution and selected cytokines in peripheral blood of three elite karate athletes aged 30 years old (range 21-31 years) with minimum 15 years of training experience were analysed in two experiments: at the beginning of the preparatory phase (a progressive test until exhaustion; an analysis of immune system's selected parameters and cardiorespiratory fitness measures, including VO
max, VE, AT, MVV, MET, Rf), and during the start-up period (Karate Championships; an analysis of selected parameters of the immune system).
Maximal effort caused an increase in total lymphocyte percentage (p<0.05). A decrease in Th cells in recovery (p<0.05 compared to post-exercise), and an increase in Th naïve cells in recovery (p<0.05) were observed. A significant increase in CD8
central memory cells (p<0.05) was found only after the progressive test, and no changes in both central and effector memory subsets of CD4
cells during the first experiment. An increase (p<0.05) in Treg and Th1 and a decrease (p<0.05) in Th2 cells' distribution during recovery time were found. Additionally, changes (p<0.05) in TNF-α, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-12p70 were observed.
Post-effort disorder in immune balance activated compensation pathways involving CD4
cells. Treg and Th1 cells seem to be subsets of key importance involved in the anabolic effect of physical effort, at least among karate athletes.
Mijelodisplastični sindrom (MDS) heterogena je skupina klonskih bolesti podrijetlom iz promijenjenih (malignih) hematopoetskih matičnih stanica. Klinički se prikazuje citopenijom u perifernoj krvi, ...displastičnim
promjenama u jednoj ili više staničnih linija u koštanoj srži i povišenim rizikom od razvoja akutne mijeloične leukemije. Stečeni kromosomski poremećaji nađeni su u 40 – 50% pacijenata s MDS-om. Prema kriterijima Svjetske zdravstvene organizacije, dijagnoza MDS-a zasniva se na morfološkoj procjeni displastičnih promjena, nađenom broju blasta, nalazu prstenastih sideroblasta u koštanoj srži i utvrđenim kromosomskim promjenama. Multiparametrijska ili polikromatska analiza protočnom citometrijom (engl. Multiparameter Flow Cytometric Analysis – MFC), iako inicijalno uključena kao opcionalna tehnika, postignutim napretkom posljednjih godina u imunofenotipizaciji hematopoetskih progenitornih stanica i zrelih stanica displastične koštane srži dobiva ravnopravnu ulogu u dijagnostici i prognozi mijelodisplastičnog sindroma.
Reproduktivna procjena, odabir pojedinačnih rasplodnih mužjaka i reproduktivne biotehnologije važni su alati u unaprjeđenju produktivnih i reproduktivnih stopa. Pri odabiru mužjaka za rasplod, ...potrebno je određivanje općeg zdravstvenog statusa te genotipske i fenotipske superiornosti. Ovaj rad procjenjuje konvencionalnu i funkcionalnu kvalitetu sjemena u ovnova. Sjeme jedanaest ovnova različitih čistokrvnih pasmina prikupljeno je elektroejakulacijom. Zamijećene su sljedeće prosječne vrijednosti za svaki konvencionalni parametar: opseg skrotuma (CE, 34,3 cm), volumen sjemena (vol, 1,63 mL), koncentracija (C, 768,4 x 106/mL), pojedinačna pokretljivost (MI, 80 %), ukupna pokretljivost (MM, 4) i vitalnost (Vi, 3,7). S druge strane, funkcionalna analiza pokazala je integritet stanične membrane (PMI) od 45,7 %, potencijal mitohondrijske membrane (MMP) od 38,5 %, indeks fragmentacije DNK (DFI) od 17,0%, lipoperoksidaciju membrane (LPO) od 32,7 % i proizvodnju reaktivnih kisikovih spojeva (ROS) od 28,56 %. Uz to je otkrivena i visoka i pozitivna korelacija za varijable o kvaliteti sjemena: Vi i MM, Vi i MI, MMP i MM, MMP i MI, PMI i MMP, kao i ROS i MMP. Suprotno tome, dobivene su dvije vrlo negativne korelacije (C nasuprot Vol i LPO nasuprot CE). To su prve procjene ocjenjivanja funkcionalne kvalitete sjemena ovaca u Kolumbiji. Uz to, ova studija osigurava početnu vrijednost za sve konvencionalne i funkcionalne parametre sjemena u regiji.
Detekcija apoptoze Žlender, Vilim
Arhiv za higijenu rada i toksikologiju,
06/2006, Letnik:
57, Številka:
2
Journal Article
Recenzirano
Odprti dostop
Apoptoza ili programirana smrt stanice ima vodeću ulogu u mnogim biološkim procesima. Njezino određivanje od velike je važnosti u različitim područjima moderne biologije, uključujući različite ...studije o embrionalnom razvoju, biologiji tumora te brojnim degenerativnim i imunodeficijentnim bolestima koje se povezuju s poremećajima u apoptozi. Mehanizam aktivacije i pokretanja apoptotskog procesa vrlo je kompleksan i prate ga specifične morfološke i biokemijske promjene stanica, koje često variraju ovisno o tipu stanica i specifičnim uvjetima okoline u kojoj rastu. Upravo zbog tog razloga bitno je upotrijebiti više različitih detekcijskih metoda koje će obuhvatiti različite stadije apoptoze kako bi se izbjegli lažno pozitivni ili lažno negativni rezultati. Svaka od danas poznatih i upotrebljavanih metoda ima svoje prednosti i nedostatke te ni za jednu od njih ne možemo reći da potpuno zadovoljava sve kriterije. U ovom radu prikazan je kratak pregled metoda koje se najčešće rabe pri detekciji apoptoza te osnovni morfološki i biokemijski procesi na kojima se te metode zasnivaju.
Tumori sjemenika pasa najčešći su tumori spolnog sustava te među najčešćim tumorima pasa uopće. Većinom se dijagnosticiraju u kasnijoj fazi, kada dođe do povećanja sjemenika, te se u svrhu liječenja ...obavlja kastracija nakon koje se postavlja dijagnoza na temelju histopatološke pretrage.
U ovom je istraživanju provedena histopatološka analiza i klasifikacija arhiviranih uzoraka najčešćih tumora sjemenika pasa (9 uzoraka) i jednog uzorka nepromijenjenog sjemenika, te je provedena analiza DNK metodom protočne citometrije. Provedenom komparativnom analizom nastojala se utvrditi korelacija između tipova tumora i rezultata protočne citometrije, tj. jesu li promjene u genetičkim ili fizikalnim svojstvima tumorskih stanica povezane s histološkim tipom tumora. Utvrđeno je da je histopatološka pretraga objektivna dijagnostička metoda za razlikovanje pojedinih tipova tumora sjemenika u pasa. Dobiveni rezultati protočne citometrije, iako nisu bili dostatni i dovoljno precizni za donošenje definitivnog zaključka o karakteristikama istraživanih neoplastičnih promjena, pokazuju da je primjenom protočne citometrije na uzorcima sjemenika pasa moguće dobiti nove informacije o svojstvima stanica. Kako bi se protočna citometrija i njezini rezultati mogli objektivnije analizirati te koristiti u dijagnostici neoplazija testisa u pasa, potrebno je optimizirati
i standardizirati metodu te postaviti detaljne dijagnostičke kriterije, za što je potrebno provesti istraživanje na znatno većem broju uzoraka tumorozno promijenjenih i patološki nepromijenjenih sjemenika.
Metoda protočne citometrije može pomoći u dijagnostici tumora sjemenika pasa, osobito ako je kombinirana s do sada uhodanim metodama pretrage kao što je histopatološka analiza tumora sjemenika.
Family Gesneriaceae comprises plant species mostly distributed in the tropics
and subtropics of both the Old and New Worlds. Only a small number of species
inhabits temperate regions. Among them, ...there are the only 5 species of this family in
Europe: Ramonda myconi, endemic of the Iberian Peninusla, as well as R. nathaliae, R.
serbica, Haberlea rhodopensis i Jankaea heldreichii, four endemic species of the
Balkan Peninsula. All five species are Tertiary relicts, remnants from the times when
the climate was much warmer and more humid. During the Ice Age, they have found
shelter in canyons and gorges where can be often found today as well. These „living
fossils“ are poikilohydric, „resurrection plants“ what helps them survive the
inhospitable environmental conditions.
Balkan species of the genus Ramonda are today characterized by disjunct
distribution. Ramonda nathaliae is restricted to Macedonia, N Greece, slopes of Mt.
Šara in Kosovo and few localities in SE Serbia. The largest part of the R. serbica range
is situated in Albania, but is also present in NW Greece, W Macedonia, SW and NE
Montenegro, SW, SE and NE Serbia and NE Bulgaria. The ranges of two species cooccur only in two localities in SE Serbia, Oblik and Radovanski Kamen, establishing
sympatric populations. Both species prefer limestone rocks, but R. nathaliae can also
be found on serpentine, schist and granite. This species is often found in more open
habitats and in higher altitudes why it is considered as more resistant and tolerant than
R. serbica.
The aims of this study are: to investigate morphology of both pollen and seeds of
three Ramonda species; to estimate pollen viability and germination capacity of their
seeds; to determine chromosome numbers and genome size of three species; to explore
if there are hybrids in sympatric populations; to look into genetic diversity and
phylogeography of R. nathaliae and R. serbica. Pollen grains and seeds were examined
by light and scanning electron microscopy, chromosome number by standard karyological techniques, genome size was estimated by flow cytometry and genetic
diversity by molecular AFLP method.
Ramonda myconi and R. nathaliae are diploids with 2n = 48, while R. serbica is
a hexaploid with 2n = 144 chromosomes. Few individuals with larger chromosome
numbers were detected in one population (2n = 8x = 192 and 2n = 10x = ~230).
Average genome size in R. myconi is 2C = 2.55 pg, R. nathaliae 2C = 2.34 pg and R.
serbica 2C = 7.85 pg, while rare decaploids of this last species have 2C = 11.65 pg.
Monoploid genome sizes of R. myconi (1Cx = 1.27 pg) and R. serbica (1Cx = 1.31 pg)
are similar, while this parameter has a lower value in R. nathaliae (1Cx = 1.17 pg).
Pollen grains of three Ramonda species are small, 3-colporate, mostly spheroidal
in shape. They are of similar size in diploid species (R. myconi E = 12.57 µm; R.
nathaliae E = 15.19 µm), while R. serbica, as a hexaploid with larger genome size, has
larger pollen grains as well (E = 19,80 µm). Exine ornamentation is microreticulateperforate, in R. nathaliae more perforate, in R. serbica with larger lumens with more
perforations, while R. myconi exine ornamentation characteristics are intermediary
between two Balkan relatives.
Seeds are small, elongated, 814.47 µm long and 217.77 µm wide in R. myconi,
639.23 µm long and 228.09 µm wide in R. nathaliae and with 714.36 µm average
length and 254.84 µm width in R. serbica. There are auriculate structures on the seed
surface, most pronounced in R. myconi (46 – 87 µm high), little bit smaller in R.
serbica (32 – 44 µm) and least high in R. nathaliae (21 – 30 µm). Their possible role is
better surface adhesion. Seed mass is moderately correlated to genome size and
chromosome number. While size of pollen grains and seeds are not good characters for
differentiation of three Ramonda species, differences in fine pollen exine and seed
surface ornamentations can be used for this purpose.
Natural hybrids between R. nathaliae and R. serbica are found in the scope of
extensive research performed in sympatric populations. Hybrid individuals are
tetraploid with 2n = 96 chromosomes and average genome size of 2C = 5.14 pg. Small
number of individuals could be penta (2C = 6.19 pg) or octoploids (2C = 10.04 pg) on
the basis of their 2C-values. Pollen from hybrids is very heterogeneous in number of
colpi (3-, 9- and 12-colporate) and the size of the grains. Seeds are very small, 2-3
times smaller than those from parental species and germinate weekly (c. 1%). These results reveal complex processes of hybridisation between two relict species,
introgression and genome duplications.
Population of R. nathaliae from serpentine substrate is ecologically very
interesting. Plants have smaller rosettes, smallest pollen grains with thin exine and
lower viability, smallest seeds and even smallest genome size among investigated
populations of this species.
AFLP analysis of genetic population structure confirmed clear taxonomic
differentiation of R. nathaliae and R. serbica. As endemics without self-fertilisation,
but with vegetative reproduction present, they are characterized by small genetic
diversity. Expected heterozygosity (H) ranges from 0.062 to 0.128 in R. nathaliae
populations and from 0.087 to 0.140 in R. serbica. Variability within populations (R.
nathaliae 72%, R. serbica 86%) is higher than among populations (R. nathaliae 28%,
R. serbica 14%). Genetic distances and fixation indices are higher among R. nathaliae
populations suggesting that this is an older species whose populations are separated for
a longer period of time.
Today’s genetic population diversity of these relic and endemic species from the
Balkan Peninsula reflects the influences of the Ice Age, but of more recent conditions
in their habitats as well. Both species had several refugia where they survived harsh
conditions during glaciations. They began spreading from there after climate warming,
so newly established populations have lower genetic diversity because of the founder
and bottleneck effects. They can be more sensitive to environmental stress and
therefore must be adequately protected.
Familija Gesneriaceae obuhvata biljne vrste pretežno rasprostranjene u tropskim
u subtropskim oblastima Starog i Novog sveta. Samo mali broj vrsta naseljava umerene
oblasti, a među njima je i jedinih 5 vrsta ove familije u Evropi: Ramonda myconi,
endemit Pirinejskog poluostrva, kao i R. nathaliae, R. serbica, Haberlea rhodopensis i
Jankaea heldreichii, četiri endemične vrste Balkanskog poluostrva. Svih pet vrsta su
relikti Tercijera, vremena kada je klima u Evropi bila toplija i vlažnija. Za vreme
Ledenog doba, one su našle skrovište u klisurama i kanjonima gde ih najčešće nalazimo
i danas. Ovi „živi fosili“ danas nepovoljne uticaje spoljašnje sredine u velikoj meri
preživljavaju zahvaljujući poikilohidričnosti, pa se još nazivaju i „biljke koje
vaskrsavaju“.
Danas se dve balkanske vrste roda Ramonda odlikuju disjunktnim arealima.
Ramonda nathaliae zastupljena je u Makedoniji, S Grčkoj, na obroncima planine Šare
na Kosovu i u JI Srbiji. Najveći deo areala vrste R. serbica nalazi se u Albaniji, a
prisutna je i na SZ Grčke, u Z Makedoniji, JZ i SI Crnoj Gori, JZ, JI i SI Srbiji, kao i na
SZ Bugarske. Jedina zona u kojoj se areali dve vrste susreću nalazi se u JI Srbiji, gde na
dva lokaliteta, Oblik i Radovanski Kamen, obrazuju simpatrijske populacije. Obe vrste
prevashodno naseljavaju krečnjačku podlogu, s tim što se R. nathaliae može naći i na
serpentinitu, škriljcima i granitu. Ova vrsta, takođe, bolje podnosi otvorenija staništa, a
njene populacije se mogu naći i na većem rasponu nadmorskih visina, zbog čega se
smatra otpornijom i tolerantijom.
Ciljevi ovog rada su višestruki: da se utvrde morfološke osobine polena i semena
sve tri vrste roda Ramonda, jer detalji njihove građe do sada nisu istraživani; da se
procene vijabilnost njihovog polena i klijavost semena; da se utvrdi broj hromozoma,
kao i veličina genoma kod tri vrste; da se proveri da li postoje hibridne jedinke u
simpatrijskim populacijama; da se pomoću molekularnih markera utvrdi stepen
sličnosti i filogeografske veze između vrsta R. nathaliae i R. serbica. U tu svrhu, polen
i seme analizirani su pomoću svetlosnog i scanning elektronskog mikroskopa, broj hromozoma određen je standardnim kariološkim tehnikama, veličina genoma
procenjena je pomoću protočne citometrije, a genetički diverzitet primenom
molekularne AFLP tehnike.
Ramonda myconi i R. nathaliae su diploidi sa 2n = 48, dok je R. serbica
heksaploid sa 2n = 144 hromozoma. U jednoj populaciji ustanovljeno je i postojanje
nekoliko individua sa većim brojem hromozoma (2n = 8x = 192 i 2n = 10x = ~230).
Prosečna veličina genoma kod R. myconi je 2C = 2,55 pg, R. nathaliae 2C = 2,34 pg i
R. serbica 2C = 7,85 pg, s tim što retki dekaploidi ove vrste imaju 2C = 11,65 pg.
Monoploidne veličine genoma R. myconi (1Cx = 1,27 pg) i R. serbica (1Cx = 1,31 pg)
su slične, dok R. nathaliae ima manju vrednost ovog parametra (1Cx = 1,17 pg).
Polenova zrna sve tri vrste su mala, 3–kolporatna, uglavnom sferoidnog oblika.
Kod diploidnih vrsta su slične veličine (R. myconi E = 12,57 µm; R. nathaliae E =
15,19 µm), dok su kod heksaploidne R. serbica veća (E = 19,80 µm) u skladu sa većom
veličinom genoma. Egzina je mikroretikularno-perforatna, kod R. nathaliae više
perforatna, kod R. serbica sa krupnim lumenima unutar kojih je veliki broj perforacija,
dok je kod R. myconi intermedijarna između dve balkanske rođake.
Semena su sitna, izduženog oblika, kod R. myconi u proseku duga 814,47 µm i
široka 217,77 µm, kod R. nathaliae duga 639,23 µm, a široka 228,09 µm i kod R.
serbica prosečne dužine 714,36 µm i širine 254,84 µm. Na površini semena uočljive su
trouglaste strukture najupadljivije kod R. myconi (visine 46 – 87 µm), nešto manje kod
R. serbica (32 – 44 µm), a najmanje kod R. nathaliae (21 – 30 µm), čija je moguća
uloga bolje pričvršćivanje za podlogu. Masa semena je umeren
PDF
