Coronary artery disease (CAD) is one of the most important causes of mortality and morbidity in wide world population. Dyslipidemia, inflammation and oxidative stress may contribute to disruption of ...endothelium structure and function, atherosclerosis and CAD. Our study was aimed to determine whether Cu/Zn superoxide dismutase (Cu/Zn SOD) and Mn superoxide dismutase (Mn SOD) gene expression could be modulated by oxidative stress in CAD patients.
This study included 77 CAD patients and 31 apparently healthy persons. Serum lipid levels, high sensitivity C-reactive protein (hsCRP), total antioxidant status (TAS) and thiobarbituric acid-reacting substances (TBARS) were measured. SOD isoenzymes gene expression was determined in peripheral blood mononuclear cells using quantitative polymerase chain reaction.
Mn SOD messenger ribonucleic acid (mRNA) levels were significantly lower in CAD patients than in controls (p=0.011), while Cu/Zn SOD mRNA levels did not change significantly between tested groups (p=0.091). We found significantly lower high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-c) (p<0.001) and TAS (p<0.001) levels and significantly higher hsCRP (p=0.002) and TBARS (p<0.001) in CAD patients than in controls. There were significant positive correlations between TAS and Mn SOD mRNA (ρ=0.243, p=0.020) and TAS and Cu/Zn SOD mRNA (r=0.359, p<0.001). TBARS negatively correlated only with Cu/Zn SOD mRNA (ρ=-0.215, p=0.040). TAS levels remained independent predictor for Mn SOD mRNA levels (OR=2.995, p=0.034).
Results of this study showed that Mn SOD gene expression were decreased in CAD patients compared to controls and can be modulated by non-enzymatic antioxidant status in blood.
Gene expression analysis by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-qPCR) allows accurate and sensitive measurment of gene expression levels. However, a series of steps needs ...to be taken to ensure the relevance, accuracy, correct interpretation and repeatability of the RT-qPCR experiment. We describe here a simple experiment of determining relative gene expression for caspase 8 gene in chicken chondrocytes treated with an apoptosis inducing compound 5-fluorouracil. We use this example to point out some important guidelines in setting up a gene expression study in tissue cells, analyzing and interpreting the results and reporting on the findings.
Analiza izražanja genov z metodo reverznega pomnoževanja in kvantitativne verižne reakcije s polimerazo v realnem času (RT-qPCR) omogoča natančno in občutljivo določanje nivoja izražanja tarčnih genov. Vendar je za zagotavljanje točnosti, natančne interpretacije in ponovljivosti eksperimenta, predvsem pa relevantnosti rezultatov, pomembno natančno poznavanje korakov postopka. V tem prispevku opisujemo enostaven poskus, v katerem smo v celični liniji kokošjih hondrocitov, ki smo jih tretirali s spojino 5-fluorouracil, ki sproži apoptozo, določili relativno izražanje gena, ki kodira encim kaspazo 8. Ta primer smo uporabili za izpostavitev nekaterih pomembnih smernic pri oblikovanju študije izražanja genov v tkivnih celicah, analizi in interpretaciji rezultatov ter oblikovanju zaključkov.
Tumori mliječnih žlijezda najčešća su skupina neoplazija u kujica. Tumorogeneza je povezana s promjenama u ekspresiji gena u širokom rasponu gena. Iz tog razloga se rabi kvantitativna lančana ...reakcija polimerazom u stvarnom vremenu (qRT-PCR) u rutinskim dijagnostičkim postupcima u kliničkoj praksi, uslijed specifičnosti, osjetljivosti, jednostavnosti i visoke učinkovitosti ove tehnike. qRT-PCR se široko rabi i za mjerenje ekspresije ciljanih gena u usporedbi s referentnim genima u više vrsta tkiva. Prikupili smo uzorke krvi zdravih kujica i kujica s tumorom mliječnih žlijezda u Manizalesu, Kolumbiji, od lipnja 2018. do siječnja 2019. godine. Izolirali smo mRNK iz svakog uzorka za cDNK sintezu. Pokusi ekspresije na bazi qRT-PCR obavljeni su uporabom primera dizajniranih za gama-aktin, beta-aktin, gliceraldehid- 3-fosfat dehidrogenazu (GAPDH) i 18S gene. Izračunali smo pojačanu učinkovitost, specifičnost i stabilnost uporabom geNorm, NormFinder, BestKeeper i ΔCt komparativne metode. Dobili smo linearne regresije za potvrđivanje stalne ekspresije gena i proveli smo analizu varijance (ANOVA) za detekciju razlika u ekspresiji s obzirom na Ct vrijednosti te zdrava u usporedbi s bolesnim stanjima. Otkrili smo i stabilnost za primere 18S-1, GAPDH-1, GAPDH-NM i Gamma-actin-1 (rastućim redoslijedom). Nadalje, ovi geni su pokazali konstantne razine ekspresije u pacijenata (R2>0,80). Izvještavamo o novim primerima za gama-aktin i GAPDH, koji su se pokazali učinkovitim endogenim kontrolnim genima za qRT-PCR primjene u krvnom tkivu. Ti primeri su korisni za istraživanje ekspresije gena u tumora psećih mliječnih žlijezda.
Provider: - Institution: - Data provided by Europeana Collections- Breast cancer is the most common invasive cancer in women. Beside genetic, epigenetic factors influence its initiation and ...progression. The purpose of this study was to test whether methylation of the promoter ON of the gene for ERβ protein (ESR2) influences its expression (on mRNA and protein level) and to correlate the methylation index of the ON promoter, ERβ1-mRNA and ERβ1 protein levels with clinicopathological parameters. In this study, 131 archival samples of breast cancer tissue were used. Custom designed two step PCR method, was done for amplification and relative quantification of the specific region of the ON promoter of the ESR2 gene. Measuring of ERβ1-mRNA was done by quantitative real time RT-PCR, and relative quantification of ERβ1 protein isoform was done by Western blot. Statistical analysis was performed and results for methylation index of ON promoter, mRNA and ERβ1 protein levels were correlated with clinicopathological parameters. The methylation index of ERβ-ON promoter was significantly higher in a group of patients with positive axillary lymph node status, than in a group with negative one. A significant positive correlation between methylation index of ON promoter and ERα protein levels was obtained. It can be concluded that methylation index of the ERβ-ON promoter could be more confident parameter for prediction and/or prognosis of breast cancer, than measuring of ERβ1-mRNA or ERβ1 protein levels.- Invazivni karcinom dojke je najčešći kancer kod žena. Pored genetičkih i epigenetički faktori imaju važnu ulogu u njegovoj inicijaciji i progresiji. Cilj ove studije bio je ispitati da li metilacija promotora ON, gena za ERβ protein (ESR2) utiče na njegovu ekspresiju (na nivou iRNK i proteina) i utvrditi povezanost metilacionog indeksa promotora ON sa nivoima ERβ1-iRNK i ERβ1 proteina, kao i sa kliničkim i patohistološkim parametrima. U ovoj studiji analiziran je 131 arhivski uzorak kancera dojke. Pomoću posebno dizajniranog PCR testa iz dva koraka, amplifikovan je i kvantifikovan specifični region promotora ON ESR2 gena. Za kvantifikaciju ERβ1-iRNK korišćena je metoda kvantitativnog RT-PCR u realnom vremenu. Metoda „Western Blot“ je korišćena za relativnu kvantifikaciju ERβ1 proteinske izoforme. Dobijeni podaci, metilacioni indeks promotora ON, nivoi iRNK i ERβ1 proteina, analizirani su i korelisani sa kliničkopatološkim parametrima neparametrijskim statističkim testovima. Nađeno je da je metilacioni indeks promotora ON ERβ gena značajno veći u grupi pacijentkinja sa pozitivnim, u odnosu na grupu sa negativnim statusom aksilarnih limfnih čvorova. Takođe, pronađena je značajna pozitivna korelacija metilacionog indeksa promotora ON ERβ gena sa nivoom estrogenskog receptora α. Na osnovu dobijenih rezultata pokazano je da metilacioni indeks promotora ON, ERβ gena može biti pouzdaniji marker prognoze kancera dojke nego ekspresija ERβ1-iRNK ili proteina ERβ1.- All metadata published by Europeana are available free of restriction under the Creative Commons CC0 1.0 Universal Public Domain Dedication. However, Europeana requests that you actively acknowledge and give attribution to all metadata sources including Europeana
Među cirkovirusima svinja razlikujemo cirkovirus svinja tipa 1 (PCV1), cirkovirus svinja tipa 2 (PCV2) i cirkovirus svinja tipa 3 (PCV3). Posljednjih se godina pojavljuje koinfekcija ovim trima ...serotipovima, stoga je potrebno uspostaviti brzu, specifičnu i osjetljivu metodu kako bi se kvantitativnim PCR testom temeljenom na SYBR Green I mogli identificirati PCV1, PCV2 i PCV3. U ovom su istraživanju upotrijebljene specifične početnice te su optimizirani uvjeti rekacije za uspostavljanje kvantitativnog PCR-a u stvarnom vremenu. Rezultati su pokazali da su granice detekcije ovog testa 40,3 kopije/μL za PCV1, 25,2 kopije/μL za PCV2 i 22,4 kopije/μL za PCV3. Nije bilo križne reaktivnosti s virusom svinjske kuge (CSFV), virusom reproduktivnog i respiratornog sindroma svinja (PRRSV), virusom pseudobjesnoće svinja (PRV) i parvovirusom svinja (PPV). Koeficijenti varijacije unutar testa i među testovima bili su manji od 1 %. Rezultati analize 100 uzoraka sa sumnjom na PCV pokazali su da je stopa infekcije serotipom PCV1 bila 10% (10/100), PCV2 64% (64/100), a PCV3 52% (52/100). Stopa koinfekcije serotipovima PCV1 i PCV2 bila je 8% (8/100), PCV1 i PCV3 7% (7/100), a PCV2 i PCV3 26% (26/100). Koinfekcija svim trima serotipovima, PCV1, PCV2 i PCV3, bila je 7% (7/100). Metoda primjenjena u ovom istraživanju ima dobru specifičnost, osjetljivost i postojanost te je obećavajući alat za brzo otkrivanje serotipova PCV1, PCV2 i PCV3.
PDF
